子痫前期患者胎盘组织中Ang-1的表达及意义

侯晓芬 张延丽

子痫前期患者胎盘组织中Ang-1的表达及意义

侯晓芬 张延丽

目的 探讨血管生成素-1(Ang–1)在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测30例正常妊娠妇女及60例子痫前期(轻度30例，重度30例)患者胎盘组织中Ang–1的表达。结果正常妊娠组、轻度、重度子痫前期组胎盘组织中Ang-1表达逐渐增强，且各组间差异具有显著性(P＜0.05)。结论子痫前期患者胎盘中Ang–1表达水平的变化可能与子痫前期的发病及病情发展有关。

子痫前期;Ang–1;免疫组织化学方法

子痫前期(preeclampsism)是妊娠期特有的疾病，严重威胁母儿安全，是危害孕产妇健康和造成胎儿死亡的重要疾病之一。为此许多学者对其发病机制进行了大量的研究，但具体发病机制至今仍未完全阐明。

Ang-1是一种重要的血管生成调节因子，它与其受体结合通过多种机制影响滋养层细胞浸润能力、影响胎盘发育，这可能是导致子痫前期、胎儿生长受限等疾病的重要原因之一。本研究采用免疫组织化学方法检测子痫前期患者及正常妊娠患者胎盘中Ang-1的表达，以探讨其在子痫前期发病过程中可能的作用及其相互作用机制，为临床寻找子痫前期病因提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 实验对象 随机收集我院2009年3月至2010年3月间在山西医科大学第一临床附属医院产科住院分娩的90例产妇的胎盘组织，其中子痫前期患者60例(轻度30例，重度30例)，正常孕妇30例 (正常妊娠组)。子痫前期的诊断标准参照乐杰主编的《妇产科学》第7版［1］。所有病例均为单胎初产妇，无原发性高血压、糖尿病、心脏病和肝肾疾病史等其他妊娠合并症及并发症。两组孕妇年龄、孕龄及孕次、分娩方式之间比较差异无显著性(P＞0.05)(见表1)。

表1 两组间一般临床资料比较(±s)

表1 两组间一般临床资料比较(±s)

组别 例数 年龄(岁) 孕龄(天)正常妊娠组30 28.3±4.63 269.0±5.46轻度子痫前期组 30 28.6±3.41 264.4±5.69重度子痫前期组30 29.5±5.32 259.7±6.63

1.2 实验方法

1.2.1 标本采集及处理 所有研究对象于胎盘娩出后，立即取胎盘母体面组织大小约1 cm×1 cm×1 cm，注意避开出血、梗死及钙化区，生理盐水漂洗3次后，置于10%中性福尔马林溶液中固定24～48 h，并用石蜡包埋，制成5 μm左右切片，备用。

1.2.2 测定方法 采用免疫组织化学SABC法。特异性兔抗人Ang-1抗体工作浓度为1∶100(由武汉博士德生物工程有限公司提供)。实验步骤按试剂盒说明书严格进行。

1.2.3 结果判定 以细胞膜或细胞浆出现明显的棕黄色颗粒为阳性细胞，无着色或与背景颜色一致的为阴性细胞。由至少两位经验丰富的专业人员独立阅片，将制好的切片置显微镜下观察，每张切片在400倍高倍视野下随机取5个视野，用病理图像分析软件进行半定量分析，计算平均灰度值。

1.3 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件处理，所有数据以均值±标准差(±s)表示，各组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较用LSD法，P＜0.05表明差异有统计学意义。

2 结果

胎盘组织中Ang-1表达强度的比较 免疫组化检测发现Ang-1在孕妇胎盘绒毛间质、滋养叶细胞和血管内皮细胞中均有表达，主要集中在细胞膜及细胞浆中。用病理图像分析软件对Ang-1免疫组织化学染色切片进行灰度测定(见表2)。实验结果发现:正常妊娠组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组胎盘组织中Ang-1表达逐渐增强，且各组间差异具有显著性(P＜0.05)。

表2 各组孕妇胎盘组织Ang-1表达强度(平均灰度值)比较

3 讨论

3.1 Ang-1的生物学功能 Ang-1是一类重要的血管生成调节因子，是血管生成素(Angiopoietin，Ang)家族中的成员。Ang家族现包括四个成员:Ang-1，Ang-2，Ang-3，Ang-4，均能识别内皮细胞特异性酪氨酸激酶受体(Tie-2)，但效应不同。Ang-1是Tie-2的激动剂，与Tie-2结合启动受体磷酸化，在细胞粘附因子存在时可抑制内皮细胞的凋亡［2，3］、抑制血管渗漏［4］、减少血管炎症［5］从而维持血管的稳定性［6］。

3.2 Ang-1与子痫前期 在正常妊娠中，随着妊娠的进展，滋养层细胞侵入螺旋动脉，子宫胎盘血液循环阻力下降，血流灌注充分;而滋养细胞不能正常侵入子宫内膜，浸润过浅、浸润性滋养细胞数量不足以及螺旋动脉重铸失败等经常可在子痫前期患者的胎盘中观察到［7］。所以滋养细胞的分化、迁移、浸润过程对妊娠发生和维持极其重要。因此凡是影响滋养细胞正常浸润过程的因素都可能导致子痫前期的发生。

Nadar等［8］研究发现，子痫前期的妊娠妇女血清的Ang-1mRNA表达水平明显增加。本实验结果表明，轻度、重度子痫前期患者胎盘组织中Ang-1表达均明显高于正常妊娠组，且重度子痫前期患者Ang-1表达水平显著高于轻度患者，可推测:Ang-1在滋养层细胞、血管内皮细胞和绒毛间质的表达明显增加，可能增加胎盘、滋养细胞血管的稳定性，使形成分支血管发生障碍，致子宫螺旋动脉重建失败，造成胎盘灌注不足，引起胎盘功能不良，从而导致子痫前期的一系列病理改变。对于子痫前期，Ang-1的表达目前国内外尚无统一定论，仍需要进一步的研究。

Ang-1不参与血管的起始，只参与血管的成熟。Ang-1维持血管稳定的作用，可抑制胎盘螺旋小动脉的正常产生，引起胎盘血液供应障碍，使滋养细胞浸润过程减弱，从而导致子痫前期的发生。总之，Ang-1通过多种机制影响子宫-胎盘血管床的发育和重塑，导致胎盘缺血缺氧，胎盘发育不良，引起滋养细胞侵入不足，最终导致子痫前期的发生。

［1］ 乐杰．妇产科学．人民卫生出版社，2008:92．

［2］ Kim I，Kim HG，et al．Angiopoietin-1 regulates endothelial cell survival through the phosphatidylinositol 3’-Kinase/Akt signal transduction pathway．Circ Res，2000，86(1):24-29.

［3］ Papapetropoulos A，Fulton D，Angiopoietin-1 inhibits endothelial cell apoptosis via the Akt/survivin pathway.J Biol Chem，2000，275 (13):9102-9105.

［4］ Gamble JR，Drew J，et al.Angiopoietin-1 is an antipermeability and anti-inflammatory agent in vitro and targets cell junctions.Circ Res，2000，87(7):603-607.

［5］ Kim I，Moon SO，et al.Angiopoietin-1 reduces VEGF-stimulated leukocyte adhesion to endothelial cells by reducing ICAM-1，VCAM-1，and E-selectin expression.Circ Res，2001，89(6): 477-479．

［6］ Shigetomo Fukuhara，Keisuke Sako，et al.Tie2 is tied at the cellcell contacts and to extracellular matrix by Angiopoietin-1．Exp Mol Med，2009，41(3):133-139.

［7］ Kadyrov M，Kindom JC，Huppertz B.Divergent trophoblast invasion and apoptosis in placental bed spiral arteries from pregnancies complicated by maternal anemia and early-onset preeclampsia/intrauterine growth restriction.Am J Obstet Gynecol，2006，194(2): 557-563.

［8］ Nadar SK，Karalis I，et al．Plasma markers of angiogenesis in pregnancy induced hypertension.Thromb Haemost，2005，94(5): 1071-1076.

Expression and significance of Ang-1 in placenta from patients with preeclampsia patients

HOU Xiaofen，ZHANG Yan-li．Gynecology and Obstetrics of first Clinical Medical College，Taiyuan 030001，China

Objective To study the expression and clinical significance of Ang-1 in placenta from patients with preeclampsia．Methods The expression of Ang-1 were detected in placental from 30 normal3pregnants women and 60 patients with preeclampsia(30 mild preeclampsia，30 severe preeclampsia)by immunohistochemistry.ResultsThe expressions of Ang-1 of placenta in normal pregnant，mind preeclampsia and severe preeclampsia groups were gradually increased，there were significant differences among them(P＜0.05).ConclusionThe changes of expressional levels of Ang-1 are related to the occurrence and development of preeclampsia.

Preeclampsia;Ang-1;Immunohistochemistry

030001太原，山西医科大学在读硕士(侯晓芬);山西医科大学第一临床医学院妇产科(张延丽)