白蒲黄片质量标准的研究

李方，曹阳，张清波

(1.黑龙江省药品检验所，黑龙江 哈尔滨 150001;2.大庆市药品检验所，黑龙江 大庆 163316)

白蒲黄片由白头翁、蒲公英、黄芩、黄柏四味药组成，具有清热凉血、解毒消炎的功效，用于治疗肠炎、痢疾等疾病。原标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第2册，仅收载理化鉴别［1］，为了更好地控制该制剂的质量，本研究增订了黄芩、黄柏的薄层色谱鉴别;同时采用高效液相色谱法测定处方中黄芩所含黄芩苷的含量，提高后的质量标准，薄层鉴别方法专属性强，含量测定方法操作简便、结果准确，可较好地控制质量。

1 仪器及试药

高效液相色谱仪(紫外检测器，美国Waters);CAMAG PEPROSTAR 3薄层色谱成像系统(瑞士卡马公司)。

黄芩苷对照品:购于中国药品生物制品检定所，批号110715－200514，供含量测定用。

白蒲黄片样品:哈尔滨蒲公英药业有限公司，批号:20070701、20070702、20070703;吉林吉春制药有限公司，批号:071203、071002、070501;黑龙江济仁药业有限公司，批号:080402。

所用溶剂均为分析纯，流动相配制用色谱纯溶剂。

2 方法与结果

2.1 黄芩TLC鉴别

取本品4g，糖衣片除去糖衣，研细，加甲醇40mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加0.5mol·L－1盐酸溶液20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，水层备用，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅣB)试验，吸取上述两种溶液各1μL，分别点于同一含4%醋酸钠的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－丁酮－甲酸－水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰(见图1)。

图1 黄芩薄层色谱图(4%醋酸钠浸泡)

2.2 黄柏TLC鉴别

取《中国药典》2005版黄芩［鉴别］项下的水溶液，用氨试液调节pH值至12，再用三氯甲烷振摇提取2次，每次20mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.1g，加甲醇10mL，超声处理30min，滤过，滤液作为对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅣB)试验，吸取供试品溶液1～2μL，对照药材和对照品溶液各1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇－冰醋酸－水(7∶2∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰(见图2)。

图2 黄柏鉴定薄层色谱图UV365nm

2.3 含量测定

2.3.1 对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1mL含20μg的溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备 取本品10片，除去糖衣，精密称定，或取重量差异项下的本品(薄膜衣片)，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇 50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40KHz)30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。

2.3.3 阴性对照液的制备 取缺黄芩样品，称取相当于供试品的量，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。

2.3.4 色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(150nm×4.6mm，5μm);甲醇－水－磷酸(43∶57∶0.2)为流动相;检测波长为280nm;进样量:对照溶液与供试品溶液各10μL;流速1mL·min－1。在上述色谱条件下，样品中黄芩苷与其他组分分离较好(见图3、4、5)。

图3 对照品溶液HPLC色谱图

图4 供试品溶液HPLC色谱图

图5 白蒲黄片缺黄芩的阴性样品溶液HPLC色谱图

2.3.5 线性关系考察 分别精密称取减压干燥12h以上的黄芩苷对照品11.05mg，置100mL量瓶中，用50%甲醇溶解并稀释至刻度，精密吸取2.0mL，置10mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取上述溶液 2、5、10、15、20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度对峰面积求回归，结果见表1。

表1 标准曲线测定结果

回归方程为:y=3766905.718x－11329.28，线性范围为0.04420μg～0.442μg，相关系数 r=1.0000。

2.3.6 精密度试验 取0.0221mg·mL－1的黄芩苷对照品溶液，精密吸取10μL进样，连续测定5次，以峰面积积分值计算，RSD=0.5%。

2.3.7 稳定性试验 取批号为20070702供试品溶液，按含量测定方法，分别在 0、3、6、9、12、15、18、24h进行测定，结果表明:供试品溶液24h内基本稳定。所得黄芩苷的峰面积RSD为0.3%(n=8)。

2.3.8 重复性试验 取同一批号样品(批号为20070702)6份，按供试品溶液制备方法制备，分别测定，以供试品含量计算，RDS=1.2%，证明此方法重现性良好。

2.3.9 回收率试验 取已知含量的同一批号(批号为20070702，含量1.10497mg·g－1)的样品6份，分别精密加入黄芩苷对照品，按供试品溶液同法制备加样回收溶液，分别测定，计算回收率。结果显示，该方法回收率良好。结果见表2。

2.3.10 样品含量测定

按规定方法制备7批样品溶液及对照品溶液，分别测定，测定结果见表3。

表2 回收率试验结果

表3 样品的测定结果

3 讨论

3.1 通过紫外扫描，黄芩苷溶液在277nm波长处有最大吸收，参照《中国药典》2005年版一部黄芩含量测定项下检测波长为280nm，最终确定检测波长为280nm。

3.2 采用二极管阵列检测器对被测成份黄芩苷的纯度进行验证，结果与对照品光谱图基本一致，说明被测峰基本为单一物质。

3.3 50%甲醇提取时间考察 取本品适量，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声提取 20min、30min、40min，放冷，照质量标准含量测定项下供试品溶液的制备方法制备，考察50%甲醇提取时间对测定结果的影响。结果以甲醇超声提取30min，即可将样品中黄芩苷提取完全。

3.4 由于各厂家生产工艺和投料的药材差异，导致本实验的含量测定数据相差较大，因此更加有必要增加黄芩苷的含量测定，以进一步控制该药品的质量。