反相高效液相色谱法测定氯沙坦钾片的溶出度

高 红，刘睿斌，刘俊敏

（重庆科瑞制药有限责任公司研发中心，重庆 400060）

氯沙坦钾（losartan potassium）是由美国默克公司开发的常用的抗高血压药，是第一个非肽类血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，氯沙坦钾片是一种作用持续稳定、耐受性良好、安全的治疗轻、中度原发性高血压的药物[1]。国外文献未查到氯沙坦钾片质量标准，国内现有的质量标准（新药转正标准）中采用分光光度法检查其片剂溶出度。本试验建立了高效液相色谱（HPLC）法测定氯沙坦钾片的溶出度方法，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪，2996检测器，Empower色谱工作站；1601型紫外分光光度计；梅特勒-托利多XS电子天平。氯沙坦钾对照品（批号为100597-200501，含量为100.0%，中国药品生物制品检定所）；氯沙坦钾片（重庆科瑞制药有限责任公司，批号为080201）；甲醇为色谱纯；其他为分析纯。

2 方法与结果

2.1 紫外分光光度（UV）法[2]

取本品，照溶出度测定法[2005年版《中国药典（二部）》附录第二法[3]附录73]，以水900 mL为溶剂，照UV法[2005年版《中国药典（二部）》附录A][3]附录22，在256 nm的波长处分别测定吸光度。计算出每片的溶出量。

2.2 反相高效液相色谱（RP-HPLC）法

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-3 柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（含0.05 mol/L磷酸二氢钾，用磷酸调pH至3.2，64∶36）；检测波长：250 nm；柱温：室温；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。理论塔板数按氯沙坦钾峰计算应不低于4 000。高效液相色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2.2 溶液制备

精密称取氯沙坦钾对照品0.011 g，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度制成每1 mL含55 μg的溶液，即得对照品溶液。照溶出度测定法[2005年版《中国药典（二部）》附录第二法][3]，以水900 mL为溶剂，转速为50 r/min，依法操作，经45 min时，取溶液，滤过，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

检测波长选择：称取样品适量，加水溶解制成约含氯沙坦钾55 μg/mL的溶液，按[2005年版《中国药典（二部）》附录ⅣA UV法][3]在190～400 nm波长范围测定吸光度。由其紫外吸收光谱图可见，样品溶液在上述范围内无最大吸收峰，228及250 nm波长处出现较平坦肩峰，为与含量及有关物质测定波长一致，故选择250 nm作为检测波长。

线性关系考察：精密称取氯沙坦钾对照品0.011 43 g，加水制成质量浓度为0.114 3 mg/mL的贮备液，分别精密吸取1.0，3.0，5.0，7.0，9.0 mL，置10 mL量瓶中，加水制成每1 mL中含氯沙坦钾 11.43，34.29，57.15，80.01，102.87，114.3 μg 的溶液，依次进样测定，以氯沙坦钾对照品质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为 A=13 911.545 C+6 367.589，r=0.999 9（n=6）。结果表明氯沙坦钾质量浓度在 11.43～114.3 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密称取质量浓度为57.15 μg/mL的对照品溶液，重复进样测定峰面积。结果的 RSD为0.19%（n=6）。

稳定性试验：将质量浓度为0.55 mg/mL的供试品溶液在室温放置，分别于配制后的 0，1，2，3，4，8 h时进样测定。结果峰面积的RSD为0.36%（n=6），表明供试品溶液在8 h内稳定。

加样回收试验:取已知含量的样品6份（约82 mg），精密称定，置250 mL量瓶中，分别加入约14，22，28 mg的氯沙坦钾对照品各2份，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，依法测定，按外标法计算含量，计算回收率。结果见表1。

表1 氯沙坦钾加样回收试验测定结果（n=6）

色谱峰纯度检查：根据Waters色谱工作站的色谱峰纯度理论以及其Empower PDA软件，计算样品的氯沙坦钾色谱峰的纯度，纯度角（Purity Angle）为 0.116，纯度阈值（Purity Threshold）为 0.304，二者较小，且前者小于后者，表明被测成分氯沙坦钾峰光谱均匀，纯度较高。

2.4 溶出度结果比较

用《国家药品标准·新药转正标准》（第37册）中的UV法分别在 5，10，20，30，45，60 min 时取样测定，再用 RP-HPLC 法测定样品在上述时间段的溶出情况，结果见表2。可见，用RP-HPLC法代替标准中的UV法是可行的。

表2 溶出度测定曲线测定结果

3 讨论

在现行药品质量标准中，一方面，检测波长采用256 nm，既不是最大吸收，又不是肩峰吸收，测定误差相对较大，而本试验建立的RP-HPLC法，改测定波长为肩峰吸收250 nm，与含量及有关物质测定波长一致；另一方面，过滤后的样品需稀释后测定，而改为RP-HPLC法时则不需要稀释，简化了操作，减少了测定误差，结果更准确。

采用RP-HPLC法测定氯沙坦钾片的溶出度，方法简便，结果准确，重现性好，对今后该品种的质量标准的进一步完善提供了很好的参考。

[1]曾群英，麦炜颐.氯沙坦治疗轻中度原发性高血压病的临床研究 （附57 例报告）[J]. 新医学，1999，30（6）：317.

[2]WS1-（X-144）-2003Z，国家药品标准·新药转正标准[S].

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，2005.