顶空气相色谱法测定羟乙基淀粉中有机溶剂残留量

宋更申，周 丽，孙玉静

（1.河北省药品检验所，河北 石家庄 050011； 2.沈阳华泰药物研究所，辽宁 沈阳 110300）

羟乙基淀粉（hydroxyethyl starch）是广泛应用于临床的环保型血浆代用品，由玉米淀粉经酸水解、羟乙基化制成。羟乙基淀粉在水解、羟乙基化过程中，使用了甲醇、环氧乙烷两种溶剂。本试验根据人用药品注册技术要求国际协调会（ICH）[1]的指导原则和2005年版《中国药典（二部）》[2-3]的相关规定，以及文献[4-5]，采用顶空气相色谱法，以水为溶剂，同时测定上述2种溶剂。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 6890型气相色谱仪，7694E型顶空进样器及Agilent B.02.01-SR1工作站（美国安捷伦公司）。羟乙基淀粉130/0.4（石家庄华康制药有限公司，批号分别为050222，050225，050228）；甲醇、环氧乙烷均为色谱纯；试验用水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱为 DB-FFAP毛细管柱（30 m ×0.53 mm，1.5 μm）；柱温为90℃；FID检测器，温度250℃；分流进样，分流比为1∶1，进样口温度180℃；载气为氮气，流速3.0 mL/min；顶空进样，平衡温度90℃，平衡时间为30 min，顶空瓶加压时间为0.2 min，进样时间为1 min，定量环体积1 mL，定量环温度100℃，传输线温度110℃。气相色谱图见图1。

图1 气相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取环氧乙烷10 mg，置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，再精密量取10 mL，置100 mL量瓶中，精密称取甲醇300 mg，置同一量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液10 mL，置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称取样品0.5 g，置20 mL顶空进样瓶中，精密加水5 mL，密封，摇匀，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察：分别精密量取对照品贮备液 2，3，5，10，20，50 mL，置50 mL量瓶中，分别用水稀释至刻度，精密量取5 mL，置20 mL顶空进样瓶中，密封，摇匀，依法测定，以峰面积 A为纵坐标、质量浓度 C为横坐标进行线性回归，以 S/N=3计算各溶剂的检测限。结果见表1。

表1 回归方程和线性范围（n=6）

精密度试验：精密量取对照品溶液5 mL，置20 mL顶空进样瓶中，密封，摇匀，依法测定。结果甲醇、环氧乙烷峰面积的 RSD分别为 2.1%和 3.2% （n=6）。

重现性试验：取样品（批号为050222）约0.5 g，精密称定，置20 mL顶空进样瓶中，精密加水5 mL，密封，摇匀，依法测定。结果样品中甲醇含量为0.1%，RSD为1.68%（n=6），环氧乙烷均未检出。

加样回收试验：精密称取已知各溶剂含量的样品（批号为050222）0.5 g，置20 mL顶空进样瓶中，共9份，分别精密加入对照品贮备液 0.4，0.5，0.6 mL，各 3份，再分别用水稀释至 5.0 mL，密封，摇匀，依法进行测定，按外标法计算。结果甲醇和环氧乙烷的平均回收率分别为98.8%和98.9%，RSD分别为1.69%和2.01%（n=9）。

2.4 样品测定

取3批样品，依法测定，按外标法计算两组分含量。结果批号为050222，050225，050228的3批样品中甲醇残留量均为0.1%，低于ICH限度规定的0.3%，而环氧乙烷均未检出。

3 讨论

羟乙基淀粉易溶于水，不溶于DMF及DMSO等有机溶剂。采用顶空进样法，可以通过控制温度使待测溶剂有效气化，避免了直接进样时样品和水对进样口及色谱柱的污染，同时也减小了主成分对分离测定的干扰。厚液膜的毛细管柱可使分离的效果及灵敏度更有效地得到改善。该法的分离度、精密度、准确度均达到了2005年版《中国药典（二部）》的相关要求。

试验考察了不同的顶空温度和顶空时间对样品测定的影响，结果样品在70，80，90℃的顶空温度下均稳定，在2000年版《中国药典（二部）》中环氧乙烷的限度为10×10-6，为了提高环氧乙烷的灵敏度，故选择90℃作为顶空温度。本品在30，40 min的顶空平衡时间内得到的峰面积基本一致，故选择30 min作为顶空平衡时间。

[1]ICH指导委员会.药品注册的国际技术要求-质量部分[M].周海钧，主译.北京：人民卫生出版社，2001：343.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，2005：54-57.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，2000：64-65.

[4]吴翠栓，吴 涛.羟乙基淀粉130/0.4的研究进展[J].中国新药杂志，2005，14（8）：981-983.

[5]罗 逸，刘菊蓉，郭兴蓬，等.合成产物羟乙基淀粉主要质控指标研究[J].药物分析杂志，2004，24（3）：296-298.