高效液相色谱法测定小败毒膏中咖啡酸含量

赵艳波，孙冬梅

（1.吉林省吉林市中医院，吉林 吉林 132001； 2.吉林省吉林市食品药品检验所，吉林 吉林 132001）

小败毒膏为《卫生部药品标准·中药成方制剂》（第八册）收载的品种，由蒲公英、金银花、天花粉、当归、黄柏、赤芍、等16味中药组成，具有清热解毒、消肿止痛之功效，临床用于湿热蕴结、热毒雍盛引起的疮疡初起、红肿硬痛、风湿疙瘩、周身刺痒、乳痈胀痛、大便燥结，疗效良好。方中蒲公英为主药，咖啡酸为其主要有效成分。为了更好地控制制剂质量，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法测定小败毒膏的咖啡酸含量，现报道如下。

1 仪器与试药

LC-2010A型高效液相色谱仪。咖啡酸对照品（批号为885-200001，中国药品生物制品检定所）；小败毒膏（批号为061011，061105，061107，药都制药集团股份有限公司）；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Technologies Zorbax Extend-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇 -0.01 mol/L 磷酸二氢钠溶液（23 ∶77）；检测波长：323 nm；流速：0.8 mL/min；柱温：40 ℃；进样量：10 μL。

2.2 溶液制备

精密称取110℃下干燥至恒重的咖啡酸对照品适量，加甲醇制成0.1 g/L的对照品贮备液，再精密量取该贮备液适量，加甲醇制成20 μg/mL的对照品溶液。取样品约2 g，精密称定，置烧杯中，加水3 mL，置水浴温热，并搅拌使溶散，加硅藻土2 g，拌匀，置100℃烘箱中烘干，转移至50 mL具塞锥形瓶中，并用3 mL水洗涤烧杯及玻棒，洗液并入锥形瓶中，置100℃烘箱中烘干，精密加5%甲酸的甲醇溶液10 mL，密塞，摇匀，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用5%甲酸的甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，离心处理，取上清液，即得供试品溶液[1]。取处方中除蒲公英外的其余药材的1/10量制成膏剂，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：分别精密吸取2.2项下3种溶液各10 μL注入液相色谱仪，色谱图见图 1。可见，阴性对照无干扰，方法可行。

线性关系考察：精密吸取对照品贮备液适量，分别置10 mL量瓶中，用甲醇定容，配成质量浓度分别为 1.00，5.00，10.00，20.00，30.00，40.00 μg/mL 的溶液，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤。精密吸取续滤液注入液相色谱仪。以峰面积（A）对质量浓度（C）进行线性回归，得回归方程A=2.58×108C-3.29×104，r=0.999 6（n=6）。结果表明，咖啡酸质量浓度在 1.00～40.00 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取对照品溶液（20.00 μg/mL）10 μL，重复进样。结果峰面积的 RSD为0.5%（n=5），表明仪器精密度较好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，在 0，4，8，12，24 h 时分别测定。结果的 RSD为0.7%（n=5），表明供试品溶液在24 h内稳定。

重现性试验：取同一批样品（批号为061011），依法制备供试品溶液并测定。结果含量的 RSD为1.1%（n=5），表明方法重现性较好。

加样回收试验：精密称取已知含量的样品（批号061011，含量68.10 μg/g）适量，共6份，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入咖啡酸对照品适量，按供试品溶液制备方法操作，依法测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标法计算含量。结果批号为 061011，061105，061107的3批样品中咖啡酸含量分别为68.10，72.85，66.23 μg/g（n=5），经综合考虑，确定限量为每克含咖啡酸不得低于 40 μg。

图1 高效液相色谱图

表1 咖啡酸加样回收试验（n=6）

3 讨论

试验中采用了不同的流动相，如甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢钠溶液（23∶77，pH 为 3.8～4.0）、甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢钠溶液（25∶75，pH 为 3.8～4.0）。结果表明，以前者为流动相时，色谱图基线较稳[2]。本方法准确、简便，重现性及回收率均理想，故可以作为小败毒膏的质量控制方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：244-245.