高效液相色谱法测定浓缩当归丸中阿魏酸含量

赵子明，曹英莉

（上海童涵春堂制药有限公司，上海 201315）

浓缩当归丸系收载于1998年《卫生部药品标准·中药成方制剂》（第十七册），具有养血活血、调经止痛功效，用于治疗血虚所致的月经不调、经来腹痛。原标准无含量测定方法，而阿魏酸为当归的指标成分。为此，笔者用高效液相色谱（HPLC）法[1]测定产品中阿魏酸的含量，旨在有效控制产品质量。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。乙腈（色谱纯，美国TEDIA公司）；阿魏酸对照品（批号为0773-9910，中国药品生物制品检定所）；浓缩当归丸（批号分别为050310，050316，050322，上海童涵春堂制药有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Shimpack VP-ODS 柱 （150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.085%磷酸溶液（17∶83）；检测波长：316 nm；柱温：35℃；进样量：10 μL。理论塔板数按阿魏酸峰面积计不低于5 000。

2.2 溶液制备

精密称取阿魏酸对照品10 mg，置50 mL棕色量瓶中，用70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取3 mL，置50 mL棕色量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀即得对照品溶液（每1 mL含阿魏酸12 μg）。取本品，研细，取约 1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加70%甲醇 50 mL，密塞，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）30 min，放冷，抽滤，用70%甲醇洗涤容器与滤渣，收集滤液与洗液，置水浴蒸至近干，残渣加0.1 mol/L盐酸溶液20 mL充分溶解，转移至分液漏斗中，用乙醚振摇提取4次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣用70%甲醇溶解，并转移至10 mL量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀，滤过，续滤液即为供试品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验：按样品制备项下方法制备缺当归药材的阴性样品，照含量测定方法进行试验。结果在阿魏酸对照品色谱峰位置处，阴性样品不出峰，说明阴性不干扰测定（图1）。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：取对照品溶液，逐级稀释成每1 mL含48，24，12，6，3，1.5 μg 的溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以阿魏酸峰面积对进样质量浓度进行线性回归，回归方程 A=1.282×105C-5.381×104（r=0.999 7），n=7。结果表明阿魏酸质量浓度在1.544～98.80 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取同一对照品溶液，连续进样测定。结果峰面积的 RSD为0.25%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，8，12 h时测定。结果峰面积的 RSD=2.91%（n=6），表明供试品溶液至少在12 h内稳定。

重现性试验：取同批样品，依法测定含量。结果阿魏酸平均含量为 0.105 1 mg/g，RSD=1.42%（n=6），表明方法重现性良好。

加样回收试验：取同一批已知含量的样品，研细，取1.0 g，精密称定，分别精密加入阿魏酸对照品，依法测定含量，计算加样回收率。结果见表1。

表1 阿魏酸加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

取5个批号的样品，依法测定。结果5批样品中阿魏酸含量分别为 0.121，0.117，0.118，0.105，0.104 mg/g。

3 讨论

考察了0.1，0.01，0.001 mol/L的盐酸溶液，发现以0.1 mol/L盐酸溶液为溶剂时，提取效率较高。同时对乙醚萃取次数进行了考察，发现4次萃取率已达99.2%。

在上述试验条件下，仪器的精密度、指标成分的稳定性、方法的重现性和加样回收率等均较好，符合定量检测要求。根据以上测定结果，考虑到实际生产需要，同时考虑到药材含量波动范围，可订浓缩当归丸1 g含当归（以阿魏酸计）不得少于0.06 mg。阿魏酸为脂溶性成分，该指标能客观反映乙醇渗漉提取的生产工艺，从而能使生产工艺得到控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京:化学工业出版社，2005:89，附录 33-35.