复方苦豆子栓剂的质量标准考察

胡慧香，张智敏

（1.山西职工医学院，山西 太原 030012； 2.山西大学，山西 太原 030006）

复方苦豆子栓剂是在我院中医临床洗剂处方基础上研制而成的一种新剂型，由苦豆子、蛇床子、黄柏及土茯苓等多味药材组成。与传统洗剂相比，该制剂可以深入阴道皱褶内病灶处，作用时间长，不易流失，可用于慢性宫颈炎、宫颈糜烂、阴道炎等妇科病症的治疗［1］。为了进一步对制剂进行质量控制，我们建立了以下质量标准。

1 实验材料

1.1 实验仪器

美国 Waters高效液相色谱仪（Waters1525），Waters-2487紫外检测器，KQ-2000型超声波清洗器 （巩义市予华仪器厂），PHSJ-3F型实验室酸度计（上海精密科学有限公司），SY-1型融变时限测定仪（天津大学精密仪器厂），溶出度测定仪（天津光学精密仪器厂）。

1.2 药物与试剂

复方苦豆子栓剂（自制），苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110805-200306）；乙腈为色谱纯，乙醇、三乙胺为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 鉴 别

2.1.1 性状 本品为深棕色，半透明，有弹性的鸭嘴形固体，外形完整光滑，色泽均匀，微有腥味，每粒重约3.5 g。

2.1.2 鉴别方法 取本栓剂1粒，切碎，温热熔融，加0.1 mol/L的盐酸溶液20 mL，水浴回流提取30min，冷藏，滤过，作为供试液。取供试液1 mL，滴加碘化铋钾试液，出现橙红色沉淀；另取供试液1 mL，滴加硅钨酸试剂，产生灰白色沉淀。

2.2 质量检查

2.2.1 重量差异 取栓剂10粒，精密称定总重量，求得平均粒重后，再分别精密称定各粒重量，计算重量差异限度，符合2005版附录《中国药典》［2］附录规定。

2.2.2 pH值的测定 取复方苦豆子栓剂1粒，加水5 mL，水浴加热溶解后，用酸度计测其pH值为5.85，接近阴道pH值，有利于治疗。

2.2.3 融变时限 按照《中国药典》［2］2005版附录要求进行融变时限检查，融变时限为25 min，符合规定。

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱：依利特C18柱 （250 nm×4.5 nm，5 μm）；流动相：乙腈-无水乙醇-水-三乙胺（15∶22.5∶62.5∶0.01）；检测波长：215 nm；柱温：30 ℃；流速：1 mL/min。定量方法：外标法。

2.3.2 试液的配制 ①对照品溶液：精密称取经减压干燥至恒重的苦参碱对照品适量，加乙腈制成每1 mL含苦参碱0.37 mg的溶液，摇匀，即得。②供试品溶液：取栓剂10粒，温热熔融，混匀，冷却。精密称取3.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入0.1 mol/L的盐酸溶液50 mL，水浴回流提取30 min，冷藏，滤过。精密量取续滤液20 mL，置分液漏斗中，用浓氨试液调整pH值至9～10，用氯仿振摇提取5次，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣加乙腈溶解，置10 mL容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。③阴性对照液：取缺苦豆子的空白栓剂10粒，按供试品溶液的制备方法处理，同法制成阴性对照液。

2.3.3 线性关系考察 精密量取苦参碱对照品溶液1.0 mL，1.5 mL，2.0 mL，3.0 mL，5.0 mL，7.0 mL 置于10 mL容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，得浓度为 0.0370 mg/mL，0.0555 mg/mL，0.0740 mg/mL，0.1110 mg/mL，0.1850 mg/mL，0.2590 mg/mL 的溶液。分别吸取20 μL注入色谱仪，按色谱条件进行测定，以峰面积为纵坐标，苦参碱对照品进样量为横坐标（μg）作图，回归方程为 Y=0.1017＋0.5550X，r=0.9991，结果表明苦参碱在 0.74 μg～5.18 μg 范围内呈良好线性关系。结果见图1。

2.3.4 精密度试验 按上述色谱条件，用浓度均为0.111 mg/mL的苦参碱标准溶液分别进样5次，每次20 μL，以峰面积计算RSD为1.15%。

2.3.5 重复性试验 取同一批号20090324样品6份，按供试品溶液的制备项下方法处理，分别精密吸取20 μL进样，测得各次的峰面积，并计算其平均值为1.3856，RSD为3.75%。

2.3.6 稳定性试验 取批号20090324样品，按供试品溶液的制备项下方法处理，分别于不同时间（0 h，1 h，2 h，3 h，4 h，5 h，6 h，7 h，8 h） 精密吸取 20 μL进样，测得苦参碱峰面积，计算RSD为0.98%（n=9）。表明样品制备后8 h内测定结果稳定。

2.3.7 加样回收率试验 精密称取己知含量的同一批样品（批号：20090324）1 g，共 5 份，置 5 个具塞锥形瓶中，分别精密加入苦参碱对照品溶液适量，按供试品溶液的制备项下方法处理，测定苦参碱含量，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验 （n=5）

2.3.8 样品测定 取本品3批不同批号的样品各3.5 g，精密称定，按上述供试品溶液方法处理后，测定，以外标法计算含量，结果批号为20090129、20090324、20090513的样品含量分别为 2.058 mg/粒，2.063 mg/粒，2.243 mg/粒。

2.4 体外溶出度考察

2.4.1 溶出度测定 取批号为20090129的样品栓剂 6 枚，按《中国药典》［2］2005 年版二部附录“溶出度测定法”项下第二法（桨法）测定，以 0.1 mol/L HCl 900 mL 为溶出介质，温度（37±0.5）℃，转速为 100 r/min，依法操作。采用RP-HPLC法，用外标法计算一定时间溶出样品中苦参碱的浓度及累计溶出百分率。测得6枚复方苦豆子栓剂的平均累计溶出百分率［F（t）］ 分别为：5 min 为 32.45%，10 min 为46.14%，20min为67.78%，30 min为78.67%，45 min为89.10%，60 min为93.62%。

2.4.2 溶出参数提取 根据威布尔（Weibull）分布模型，以 lnln［1/（1－F（t））］对 ln（t－τ）（τ为位置参数）回归作图，可得一条直线，回归方程为Y=－2.262+0.7975X，r=0.9990。取三批样品进行溶出度试验，结果用电子表格Excel计算药物溶出度Weibull分布参数，结果见表2。将3个批号栓剂的溶出参数进行方差分析，结果Td（溶出63%经历的时间）的F值为 1.263，P 值为 0.389，m（形状参数）的 F 值为3.146，P值为0.0672（P＞0.05），表明3批栓剂的溶出度比较差异无统计学意义，本处方工艺的重现性较好。

表2 复方苦豆子栓剂Weibull分布模型溶出参数 （±s，n=6）

表2 复方苦豆子栓剂Weibull分布模型溶出参数 （±s，n=6）

样品批号 Td（min） m t0 r 20090129 16.98±2.63 0.7813±4.17 9.140 0.999020090324 16.65±0.32 0.7928±0.52 9.276 0.998520090413 17.09±1.25 0.7957±5.87 9.573 0.9981

2.5 稳定性考察

取3批样品，进行强光照射试验和长期试验，考察光线对该栓剂稳定性的影响以及室温条件下放置3个月后稳定性的变化。结果表明不包装的栓剂光照10 d后含量下降为原始含量的86.24%，表明光照10 d后含量已不合格，该栓剂应该铝塑包装并避光贮存。留样观察的结果表明，3批样品3个月后的含量均在合格范围内，平均相当于原始含量的98.34%。

3 讨 论

取苦参碱对照品溶液适量，在200 nm～400 nm范围内进行扫描，结果苦参碱在215 nm处有最大吸收，故选择215 nm作为测定波长。

苦参碱的含量测定方法有酸碱滴定法、紫外分光光度法、酸性染料比色法、高效液相色谱法等，由于前几种方法不能使样品中含有的生物碱得到很好的分离，故采用高效液相色谱法测定苦参碱的含量。在测定过程中，曾参照有关文献，考察过乙腈-磷酸（4∶96）［3］、乙腈-磷酸二氢钾缓冲液（4∶96）［4］等溶剂系统，结果不能使主峰得到很好的分离。而选用乙腈-无水乙醇-水-三乙胺（15∶22.5∶62.5∶0.01）为流动相，苦参碱色谱峰与其他成分的色谱峰能达到较好的基线分离，分离度大于1.5，阴性样品无干扰。该方法用于苦参碱制剂的含量测定，具有灵敏、准确、专属性强、重现性好的特点，可作为复方苦豆子栓剂的质量控制方法。

溶出度在一定程度上反映了有效成分从制剂中溶出的速度和程度。在体外溶出度实验中，通过累计溶出百分率结果可以看出，在30 min时，苦参碱的平均累计溶出百分率达到了78.67%，而45 min时已经溶出89.10%（＞80%），说明本处方设计合理，甘油明胶基质的体外溶出不会影响该栓剂中药物的释放。

《中国药典》尚未对外用制剂的溶出度检查作出明确规定，但对于阴道特殊环境下的固体制剂，比如栓剂，由于阴道内分泌液较少，会直接影响药物的溶出速度。因此对栓剂进行溶出速度的研究尤为必要，它可以作为一定条件下的基质中药物溶出速度的参考指标。

［1］胡慧香，张智敏.复方苦豆子栓剂的制备及临床应用［J］.山西中医，2009，25（5）：50-51.

［2］中华人民共和国药典委员会.中国药典（二部）［S］.北京：化学工业出版社，2005：附录.

［3］苏静洲，刘明言，董海荣.HPLC法测定复方石韦片中苦参碱和氧化苦参碱的含量［J］.中草药，2005，36（3）：383-384.

［4］张义生，刘亚丽.高效液相色谱法测定妇科洗剂中苦参碱的含量［J］.中国医院药学杂志，2004，24（9）：580.