灭活大肠杆菌免疫小鼠最适浓度的研究报告

张俊爱

广东医学院，广东 东莞 523808

在免疫实验教学当中，免疫血清是相当重要的一部分，有较好的免疫血清能给实验教学提供了很好的实验效果。目前尚未对大肠杆菌在免疫小鼠时所要用的浓度有相关的报道。为此，我们对平时较多用的小鼠用大肠杆菌进行了免疫实验，现将结果报告如下。

1 对象与方法

1.1 对象 随机选择健康小鼠150只，均在同等动物场中饲养。

1.2 方法 将菌液在65℃水浴中灭活60分钟。分别将以上150只小鼠分成5组，每组30只，按各种不同浓度的大肠杆菌菌液对各组小鼠进行免疫，并做好标记，如下表1：

表1 菌液浓度（个菌数/ml）

按照以上浓度进行常规免疫小鼠的过程后，进行观察，最后采集小鼠血清送检进行免疫实验，观察效果对比。

2 结果

2.1 小鼠死亡率比较，1组死亡1只小鼠，死亡率为3.33%、2组死亡3只小鼠，死亡率为10%、3组死亡4只小鼠，死亡率为13.3%、4组8只小鼠，死亡率为26.7、5组死亡12只小鼠，死亡率为40%。

2.2 采集以上免疫后的小鼠血清，按以上组进行分开做凝集反应试管法比较。进行效价的对比，比较出现“++++”时的血清效价，此时血清浓度越低为该组血清效价越高。结果观察如表2

表2 “++++”时血清浓度，数字为血清稀释倍数

3 讨论

(1)本次实验从兔子的死亡率来看，4、5组的死亡率较高，证明这两组所使用的菌液浓度过高，导致小鼠死亡较多。1、2、3组兔子死亡率较低，是实验可以接受的范围。表明是小鼠可以接受的菌液浓度。(2)从血清的效价比较看，3、4、5组的血清效价都较为满意，可达到实验要求。(3)综合以上所述，3组死亡率低，效价达到实验要求，是适合的浓度。得出，3组中所免疫的浓度为最适浓度。因此，今后用大肠杆菌做抗原免疫小鼠时，可首次用6亿/ml、第二次免疫用9亿/ml、第三次免疫用12亿/ml、第四次免疫用15亿/ml的菌液浓度。可作为今后免疫动物的实验指导。