广西桂林食品药品检验所(541002)黄海燕 钟建理
参照保健食品检验与评价技术规范(2003年版)保健食品中金雀异黄素的测定,笔者采用HPLC法测定大豆异黄酮胶囊中金雀异黄素的含量,并进行方法学考察,根据考察结果制定了本品的检验操作规程,结果较满意,现报告如下:
金雀异黄素标准品(Genistein)(Lot:90213)购于上海安谱科学仪器有限公司;甲醇为色谱纯,醋酸铵和冰醋酸均为分析纯,水为高纯水。大豆异黄酮胶囊:天津凯镛药业有限公司产品。WATERS高效液相色谱仪及EASY3000色谱工作站;超声波清洗器,离心机。
2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:phenomenexRC18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.05mol.L-1醋酸铵缓冲液(pH4.6)(46:54);检测波长:260nm[1];柱温:35℃;流速:1ml·min-1。
2.2 溶液的配制 精密称取金雀异黄素对照品适量,加甲醇溶解制成每1ml约含10μg的溶液,作为对照品溶液。精密称取本品内容物1g,置100ml量瓶中,加甲醇-水(80:20)50ml,超声处理30min,放冷,加甲醇-水(80:20)至刻度,摇匀,以0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得(供试品溶液)。
2.3 测试方法与结果
2.3.1 线性关系考察 精密称取金雀异黄素对照品(含量99.5%)10.21mg,置50ml量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取0.1ml,0.5ml,1.0ml,3.0 ml,5.0ml,10.0ml,置20.0ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。按上述色谱条件,进样20μl。以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,进行线性回归,回归方程:Y=8.569×106X+7.986×104;γ=0.9999。表明金雀异黄素在0.02032~2.032 mg范围内线性关系良好。
2.3.2 重复性试验 取同一样品(1号样品)6份,按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液,按色谱条件测定。结果平均含量为0.8649mg.g-1。RSD为0.3%(n=6)。检出限(LOD)按信噪比(S/N)为3计算,对照品溶液稀释至0.01μg . ml-1,进样20μl,本法检出限为0.01μg.ml-1。定量限(LOQ)按信噪比(S/N)为10计算,对照品溶液稀释至0.027μg.ml-1,进样20μl,本法定量限为0.03μg.ml-1。
2.3.3 回收率试验 取已知含量的样品(1号样品)0.5g置100ml量瓶中,加入0.2032mg.ml-1的金雀异黄素对照品溶液2ml,加甲醇-水(80:20)50ml,超声处理30min,放冷,加甲醇-水(80:20)至刻度,摇匀,以0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液。以上述色谱条件测定,按外标法计算。测得平均回收率99.33%,RSD为0.4%(n=6)。
2.3.4 稳定性试验 取同一份供试品溶液,自配制后分别在0,1,2,4,8,12,24h测定峰面积值,结果峰面积平均值为1548771,RSD为0.6%(n=7),说明供试品溶液在配制后24h内稳定。
2.3.5 样品测定 取样品,分别按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液,测定。按外标法计算,批号20090803、20090918含量分别为0.086 g.100g-1、0.107g.100g-1;RSD分别为1.91%、1.80%。
3.1 金雀异黄素(Genistein,又称染料木素)是来源于豆类植物和齿状植物的异黄酮类化合物,其化学名为4,5,7-三羟异黄酮,是大豆异黄酮的主要活性成分,为一种天然的植物雌激素,具有防止早期动脉粥样硬化及慢性血管疾病等多种药理作用及生物活性。体内外实验及流行病学均显示,其对多种肿瘤均有抑制作用[2]。故有必要对制剂中金雀异黄素行质量控制。
3.2实验考察结果表明,应用“保健食品中金雀异黄素的测定”是可行的,样品提取方法简化使其更快速、简便、准确可靠。