丹顶鹤人工授精的研究

何相宝，吕文鹏，李晓敏

（哈尔滨北方森林动物园，黑龙江 哈尔滨 150322）

丹顶鹤（Crus japonensis）属鹤型目、鹤科鸟类，主要分布于我国东北地区及俄罗斯、日本和朝鲜，是我国一级保护动物。据估计，目前全世界丹顶鹤野外数量为2 500只左右，人工饲养数量约1 800只。关于丹顶鹤人工孵化和人工育雏的研究较多[1，2]，但对丹顶鹤进行人工授精的研究则较少[3]。人工授精技术的应用不仅弥补了自然授精的不足，同时对人工饲养下丹顶鹤的种群增殖，基因保存及遗传多样性有着重要的意义。本文对丹顶鹤的人工授精技术进行了系统的研究，以求为丹顶鹤的人工增殖提供科学的依据。

1 人工授精前的准备

首先，选择的雄鹤应是体质健康，羽毛丰满，繁殖期头部裸露皮肤呈鲜红色，并有性行为表现的。采精的雄鹤和输精的雌鹤要单笼饲养在较安静的笼舍内，避免外界干扰。笼舍不宜太大以便捕捉。采精和输精前1天种鹤要停喂饲料和饮水，防止采精时污染精液。器材有集精杯（小量杯）、1 mL卡介苗注射器（1次性塑料注射器更好）、针头、恒温干燥箱、生物显微镜、蒸馏水、生理盐水、脱脂棉等。人工授精器材不能用消毒液浸泡消毒，因消毒液如残留在器具上能杀死精子。应用清水或蒸馏水清洗干净后，高压灭菌消毒、干燥后备用。操作人员在采精（输精）前要用碘溶液洗手消毒，防止疾病的传播。

2 采精

2.1 采精方法

采精需要3人或2人进行。捕捉鹤时操作人员要精力集中，动作灵敏准确，以防止鹤及操作人员受到伤害。第1操作人员首先抓住鹤头下方的颈部及一侧翅膀的肱骨部位，然后倒跨在鹤的背上，使鹤背向操作者，夹在操作者双腿间，将鹤固定住，鹤的双翅放在两腿外侧，任其放松。按摩先从鹤体两侧开始，双手从上往下按摩其背及股骨的外侧。重复按摩几次后，鹤表现出尾羽向上翘，泄殖孔外翻和收缩，并发出“咕咕、咕咕”低沉的叫声。这时第2操作者站在鹤的尾部右侧用手轻轻抚摸鹤的腹部几次，然后将右手拇指与食指分开放在泄殖孔的下部，双手指放在泄殖孔的周围，同时轻轻向中间挤压，鹤精液即排出。第3操作人立即用集精杯对准泄殖孔下部收集精液，再将泄殖孔残留的精液刮入杯内。在采精过程中要避免精液被粪尿污染，保证精液质量。

2.2 采精时间

在人工饲养条件下，丹顶鹤的采精时间为每年的4月初至6月中旬；每次采精应在上午6：00-9：00时进行，此时是鹤类发情的最佳时期。同时为了避免精液被污染，应在喂食前采精。

2.3 精液品质的评定

精液质量是影响人工授精效果的重要因素，也是人工授精成功的关键。采到精液后，1～2 min内完成检测，观察精液的浓度、色泽及清洁度。质量好的精液呈半透明或灰白色，黏稠状。如混有粪尿，则呈黄色。较稀薄的精液，质量不佳。评定品质时可取一滴精液（该精液是用1 mL卡介苗注射器按1∶10生理盐水或经稀释液稀释的精液），滴在载玻片上，用低倍镜（400倍）检查精子所占的百分比。

精液品质标准分为 5个等级，用 A、B、C、D、E 来代表不同密度的呈直线前进的精子和污染程度。A级：精子密集，80%以上精子呈直线运动，无杂质。B级：精子间稍有空隙，70%以上的精子呈直线运动，偶见畸形精子及极少杂质。C级：精子间隙稍大，50%以上的精子呈直线运动，有少量畸形精子及少量粪尿杂质成分。D级：精子量少，精子运动不活泼，畸形精子及杂质较多。E级：偶见精子缓慢活动，杂质极多。

2.4 精液稀释与稀释剂

一般人工授精多采取输新鲜精液，采完精液立即输精。所以多用生理盐水或5%葡萄糖溶液做稀释液。稀释液的用量，可根据采到精液量的多少来决定稀释液用量，一般为2～10倍。稀释时，用消毒过的1 mL的卡介苗注射器注入2～10倍的稀释液，抽吸2～3次，使精子均匀混入在稀释液内备用。

目前，用于鹤类的人工授精及精液的冷冻保存的稀释液有美国帕图克森特中心使用的贝茨维尔家禽精液稀释液，简称BPSE液。另外，还有醋酸盐（Acetate）稀释液。

3 输精及精液保存

3.1 输精

输精时采用A、B、C级精液，D级和E级不可用。输精需两人操作，用采精的方法捕捉保定雌鹤。当雌鹤出现类似雄鹤的反应时，在泄殖孔的右上方可看到输卵管末端开口（鲜红海绵状的组织）。右手将稀释好精液的输精器轻轻插入输卵管口1～5 cm，然后将精液缓慢的推入，使输卵管有足够的时间接受输入的精液并能吸入深处。关于给雌鹤进行输精的部位正确与否，是提高人工授精成功率的关键。根据实践证明，将精液输到雌鹤输卵管内比输到泄殖腔受精率要高，每隔1天输精1次（每周输3次），在产卵的当天（最好产完卵后不超过12 h）就输精，可保证较高的受精率。

3.2 精液的保存

3.2.1 冷冻保存技术 冷冻技术是将精液由液态变成固态。冷冻精液应选择无粪尿污染的精液，精子活力在0.7以上，精液量不能少于0.02 mL。稀释液采用BPSE液，保护液选用二甲基亚矾（DMSO），分别以2%、4%、6%和8%的不同浓度，按稀释后精液1∶2的比例做活力比较试验。

3.2.2 精液的液态保存 将释稀的精液在2～5℃低温下保存，称为液态保存。具体地说，精液液态保存方法是选择一种精液稀释液稀释精液，然后将装稀释精液的容器用棉花包裹，放入2～5℃电冰箱中或盛有冰的保温瓶中保存。实际工作中通常选用BPSE稀释液，保存时间一般不超过24 h。

4 注意事项

要进行人工授精前的驯化工作。种鹤经过驯化，方便捕捉，人工授精时比较配合，减低了鹤的应激反应，减少对鹤可能造成的伤害，有利于提高人工授精的质量。

采精前一定让鹤保持安静，因受惊后往往采不到精液。大风、阴雨天停止采精。

采精人员须固定，不要经常更换。因每个人的手势和力度有所不同，更换人员易引起种雄鹤应激而影响精液质量，按摩刺激时应适度。

[1] 李拥军.丹顶鹤人工孵化的研究[J].中国家禽，2004，24（2）:19-20.

[2] 陈浩.丹顶鹤雏鹤的饲养技术[J].中国畜牧杂志，2002，（38）1:52-53.

[3] 谢高基.丹顶鹤人工授精的探索 [J].黑龙江畜牧兽医，2005，276（1）:56-57.