高效液相法测定骨筋丸胶囊中血竭素的含量

彭 禹 李文春 赛春梅 刘文亮

（1、黑龙江中医药大学2007级在职硕士研究生课程班，黑龙江 哈尔滨，150040 2、哈药集团中药有限公司研发中心，黑龙江 哈尔滨150078）

骨筋丸胶囊收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第十三册[1]，由血竭、三七、秦艽、白芍、马钱子、乳香、没药、独活、牛膝等十四味药组成，具活血化瘀，舒筋通络，祛风止痛的功效。其中血竭为进口药，并且价格昂贵为保证药品质量，避免厂商少投或不投血竭，笔者建立了血竭的含量测定指标，该方法操作简单，灵敏，结果准确可靠。

1 仪器与试药

仪器：Waters515-2487高效液相色谱仪；色谱工作站：N2000（浙江大学）；TU-1901型 紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；KQ500B型超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司）；对照品：血竭素高氯酸盐110811-200203（中国药品生物制品检定所提供）；骨筋丸胶囊(哈药集团三精制药诺捷有限责任公司)；乙腈为色谱纯，水为纯化水；其他试剂为市售分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色 谱 柱：Hypersil BDS 5μm.4.6mm×150mm；流动相：乙腈-0.05 moloL-1磷酸二氢钠溶液(40:60)，流速：1.0mL·min-1；检测波长：440nm；柱温：室温;进样量:10μL；理论板数：按血竭素高氯酸盐峰计算应不低于2000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取血竭素高氯酸盐对照品10.0 mg于100mL棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解并稀释至刻度;摇匀，精密量取4 mL至10mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1mL中含血竭素高氯酸盐40.0μg，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备[2]

取内容物约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加3%磷酸甲醇溶液50ml，称重，超声处理30分钟，放置至室温，加3%磷酸甲醇溶液补至原重，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 最大吸收波长的确定

血竭素高氯酸盐（3%磷酸甲醇溶液）的紫外扫描图谱显示，其最大吸收峰位于440.1nm处，因此将检测波长定为440nm。见图1

按处方比例，制成不含血竭的阴性样品，同法制成阴性样品的供试品溶液。

2.6 干扰试验

取对照品、供试品及缺血竭的阴性对照样品，各进样10μL测定。结果血竭素峰与其它组分峰分离度良好，缺血竭的样品对测定无干扰，见图。

2.7 线性关系考察

精密量取血竭素高氯酸盐对照品溶液(浓度:0.080mgomL-1)，1、2、4、6、9mL于10mL量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液至刻度，摇匀。进样10?L测定，记录峰面积。以对照品的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，回归方程为：Y=2172953.706X+38020.767 γ=0.999 9(n=5)。结果表明血竭素高氯酸盐在0.08~072?g范围内，进样量与峰面积呈现良好的线性关系。

2.8 精密度试验

精密吸取对照品溶液(浓度：40.0μg·mL-1)10μL，进样测定峰面积，重复进样5次，用峰面积计算均值与SD值，结果RSD=1.60%(n=5)，说明精密度符合含量测定要求。

2.9 重复性试验

取供试品6份(批号：071001)，每份约1.5 g，精密称定，照2.3项下方法制备供试液，进样10?L测定含量，血竭素高氯酸盐含量为0.768mgog-1，RSD为1.24%(n=6)，说明精密度符合含量测定要求。

2.10 稳定性试验

取同一份供试品(批号:071001)，分别于0、2、4、6、8、10 h进样10?L测定峰面积，用峰面积计算均值与SD值，结果血竭素室温条件下，棕色瓶中密闭保存10 h内稳定，RSD=0.93%(n=6)。

2.11 加样回收率试验

精密称取已知含量 (批号:071001，0.768mgog-1)的样品0.75 g，分别精密加入血竭素高氯酸盐0.5mg，按2.3项下方法制备供试品溶液，进样10μL测定，结果见表1

?

2.12 样品的测定

取样品照2.3项下方法制备供试液，进样10μL测定，照外标法计算样品中血竭素高氯酸盐的含量，并按公式计算成血竭素的含量。血竭素重量＝血竭素高氯酸盐重量/1.377。结果见表2

?

3 讨论

3.1 骨筋丸胶囊临床主要应用［3］风湿关节炎等的抗炎镇痛及由各种原因引起的骨质增生、关节和神经部位的疼痛。中医学认为，与风寒湿邪、劳损、外伤有关，还与年老体衰、元气不足密切相关，内外相合，致气血痹阻，经脉失养，久病入络而引发。骨筋丸胶囊由血竭、三七、乳香、没药、制马钱、延胡索、秦艽、红花、独活、牛膝等组成，有活血化瘀、舒筋通络、祛风止痛的作用。骨筋丸以三七为君药，对改善机体内环境，促进椎间的稳定性有重要作用；以活血化瘀、行气止痛的药为臣佐药；以牛膝引诸药入络为使药。方中三七、延胡索、牛膝、血竭活血化瘀，改善血液循环障碍，马钱、独活、桂枝、秦艽祛风湿，温经，通络止痛，消除神经根水肿，从而解除神经受压刺激症状，达到临床治愈或改善。该药配伍恰当，使气血旺行、脉络通畅、行气止痛，达到了标本同治，内外因兼顾。

3.2 血竭［4］为传统中药，味甘、咸；性温、平；归心、肝经；具活血化瘀、消肿止痛、收敛止血，生肌敛疮、补血之功效，常用于内外诸科及妇科的各种血症。如：跌打损伤、瘀血、出血、痈疽溃疡、疮面久不愈合、胃肠炎症、肢体麻木、闭经痛经、血瘀、瘀阻等病症。血竭历来是许多中医古方和经验方的重要组成药材，被喻为“和血之圣药”（《本草纲目》），近代主要为来自印度尼西亚和马来西亚产的苏门达腊血竭。建立其贵细药血竭的含量指标对保证临床疗效有重要意义。

3.3 在供试品制备过程中，作者通过热回流提取与超声波提取的对比，结果发现血竭素的热稳定性较差，回流提取的含量较超声波提取含量少约30%，参照药典血竭的含量测定供试品制备方法，采用3%磷酸甲醇提取，该供试品溶液在棕色玻璃容器中，室温放置10小时稳定性良好。

3.4 通过文献报道，骨筋丸胶囊的含量研究报道较多，其中测芍药苷、人参皂苷Rg1、龙胆苦苷、士的宁、马钱子碱等，且各厂家执行各自的注册标准，执行含量标准也各不相同，致使有的厂家不控制血竭投料，或仅按鉴别水平投料致使市售药品质量偏差较大，不能保证临床用药的有效性与安全性，故建议各厂家统一质量标准。

[1]国家药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂第十三册［S］.1997：139

[2]国家药典委员会.中国药典2005年版一部［S］.化学工业出版社，北京，2005：296

[3]贺芬，李艳春.骨筋丸片治疗颈椎病疗效观察［J］.美国中华临床医学杂志，2006，8（3）:329-330.

[4]郑庆安，陈江，张颖君等.著名民间药物血竭的起源与传播［J］.云南植物研究，2003，增刊16：102-107.