疏水网格滤膜技术检测食源性致病菌的研究进展

苏晨曦 ,潘迎捷 ,赵 勇 , Vivian C . H . W u ,孙晓红＊

( 1 .上海海洋大学食品学院,上海 201306 ; 2 .美国缅因大学食品科学与人类营养系,美国 04469 -5735 )

疏水网格滤膜技术检测食源性致病菌的研究进展

苏晨曦1,潘迎捷1,赵 勇1, Vivian C . H . W u2,孙晓红1＊

( 1 .上海海洋大学食品学院,上海 201306 ; 2 .美国缅因大学食品科学与人类营养系,美国 04469 -5735 )

疏水网格滤膜技术利用膜的疏水性黏附细菌细胞,通过膜的过滤作用截留细菌细胞,然后将膜进行选择性培养,达到检测鉴定待测菌的目的。主要概述了疏水网格滤膜技术的原理和特点,以及该技术与分子生物学技术、免疫学技术偶联在食源性致病菌检测中的应用。

疏水网格滤膜;微生物学检测;酶标抗体;DNA探针;菌落杂交

食品中存在的致病性微生物是食物中毒的主要原因之一。据报道,1992～2001年全国食物中毒事件中,微生物引起的食源性疾病事件和涉及人数最多分别占总体的38.5%和50.9%[1]。这些致病性微生物主要有沙门氏菌、肉毒杆菌、大肠埃希菌O157∶H7、副溶血性弧菌、单核细胞增生性李斯特菌等等。如何对致病性微生物进行快速检测一直以来都是食品安全性研究的重要内容。传统的微生物培养鉴定方法是实验室经典常规的检测鉴定方法,但因其操作繁琐,耗时长等缺点不能满足人们对食品样品进行快速准确检测的要求。近年来,随着分子生物技术的发展,分子生物学手段如PCR、DNA探针等已广泛应用到了食源性致病菌的检测中,节约了检测时间,并提高了检测灵敏度。但是分子生物学检测手段都需要经过样品的前处理-增菌阶段,仍然达不到快速检测的要求。疏水网格滤膜技术(Hydrophobic Grid Membrane Filter,HG MF)是利用膜的疏水性黏附细菌细胞,膜的过滤作用截留细菌细胞,然后将膜进行培养,最后检测鉴定目的菌。HG MF可以处理大量样品,节省富集时间,去除抑制因子,达到快速检测目的。同时,HG MF与分子生物学或免疫学方法连用,可准确、快速检测食源性致病菌。目前,在国际上,疏水网格滤膜技术已成功的应用于各种食源性致病菌的检测中,如Brichata等[2]应用HG MF检测了120个食品加工样品中的沙门氏菌,最低检测限达到了1.0 cfu/mL,Valdivieso等[3]应用HG MF和半固体培养基(SS M)连用检测了1654个食品样品中的空肠弯曲杆菌的存在情况。疏水网格滤膜技术自20世纪70年代发展至今,已成为欧美国家实验室常用方法,加拿大将其列为官方正式检测方法,美国FDA也将其作为细菌分析手册采用的通用方法。但在我国,疏水网格滤膜技术在检测方面的研究几乎处于空白阶段。所见报道只有李慧珠等[4]利用HG MF检测饮料中的细菌总数和大肠菌群数。本文拟就HG MF技术在食源性致病菌的检测方面的研究进展作一概述,以期为HG MF以及延伸技术在食源性致病菌的快速检测方面的应用提供新思路。况,结果表明,HG MF-TALO(Thin Agar Layer Oxyrase)可以有效地提高受损致病菌恢复生长的检率(P＜0.05)。Sharpe等[10]研究指出,在葡萄和草莓的样品中,采用普通平板法将样品进行10～15倍稀释可检测到致病菌,而采用HG MF方法去除葡萄和草莓中存在的微生物生长抑制因子,稀释50倍还可检测到致病菌。文中结论指出:HG MF可以去除食品中的抑制因子;④采用HG MF过滤培养后,可直接获得纯培养“菌落”,然后进行菌落计数,可达到定量检测目的。HG MF具有1600个网格,由于网格的栅栏作用将细菌的生长严格限定在一定范围内,每个小的网格小室内仅能截留0～2个细菌细胞,经培养后每个网格小室内便形成比较单一的类似于菌落的“微小菌落”,通过这种方法进行菌落计数,然后

1 HG MF技术的原理

1924年,Mudd[5]首次报道了细菌微生物细胞表面具有不同程度的疏水性,其物质基础主要有表面蛋白、脂多糖、聚多糖、磷脂等。通过疏水相互作用,细菌细胞可以黏附到疏水性物质表面。疏水网格滤膜技术就是利用细菌的这一特性制成的有1600个疏水网格,孔径为0.45μm的疏水性过滤膜。利用疏水网格滤膜技术,将食品样品中存在的微生物细胞和受损细胞截留在疏水网格膜上,经培养后,对目的菌进行鉴定分析,达到大量快速检测食源性致病菌的目的。

HG MF技术的检测程序:首先,将食品样品进行均质处理,食品表面细菌被拍打到溶液中;将均质液进行预过滤,除去拍打时产生的颗粒性物质,以防影响后续操作;然后,将样品液经疏水网格滤膜抽滤;将膜转移到选择性培养基上进行培养;最后,进行一些相关的检测,鉴定。培养后的疏水网格滤膜还可以做相应的菌落计数,从而可以为食品的安全性检测提供定性定量的数据。

2 HG MF技术的特点

疏水网格滤膜技术的主要特点有:①可以同时处理大量样品,节省劳动力。在对实际样品检测时,有时需要对大量的样品进行检测,做系统分析。这时,采用传统的微生物培养的方法太过于繁琐,任务量大,而采用HG MF抽真空过滤的方法方便快捷,可以批量处理膜,这样就可以节省检测工作量。Entis等[6]采用HG MF方法检测沙门氏菌时,对798株人工污染和265株自然污染的食品样品进行了处理。Doyle等[7]在采用HG MF-immunoblot检测E.coliO157∶H7时,共分析了896个畜禽肉样;②可以节省富集时间。Entis等[6]早在1982年发表的文章中指出,采用HG MF方法缩短检测时间的程序:首先对样品进行均质处理,在非选择性的富集肉汤中过夜培养18～24 h,选择性富集肉汤中培养6～8 h,经HG MF过滤处理后涂布选择性培养基,培养24 h后检测目的菌落,如无蓝色菌落,检测完成;如检出阳性,再进行生化鉴定,确定其为沙门氏菌。运用此方法对食品样品检测沙门氏菌,仅用2～3 d,而采用Health Protection Branch培养方法需要3～4 d才能完成。Peterkin等[8]采用HG MF和酶联免疫分析连用检测葡萄球菌产肠毒株,将样品进行均质处理,HG MF过滤,然后将滤膜置于脑心浸液琼脂上培养24 h后免疫印迹检测,在27 h内完成检测;③HG MF可解除样品中某些成分的抑制作用,使受损细胞恢复生长,从而有效地检测食品中存在潜在危害的微生物。如Vivian等[9]利用HG MF检测细纹牛肉中的受损伤致病菌(Escherichia coli O157∶H7、Listeria monocytogenes、Sal monella Typhimurium和Yersinia enterocolitica)的恢复生长情与HG MF-MPN表比对[11],从而可以对样品中目的菌含量进行初步的定量分析。

3 HG MF技术的研究现状

20世纪70年代,最初的膜过滤(Membrane Filter,MF)技术[12]开始在实验中使用。随后,Peterkin等[13]研究过采用MF检测4种食源性致病菌前,用胰蛋白酶和Tween-20预处理冷冻的食品样品。Entis等[14]在检测副溶血性弧菌时采用了改进的带疏水网格的滤膜(Hydrophobic Grid Membrane Filter,HG MF)进行过滤、选择性培养和复苏性培养。Depaola等[15]比较了2种BAMMPN方法和2种MF方法来检测副溶血性弧菌。检测结果表明,HG MF的检测特异性比BAM-MPN高(P＜0.05)。至此,HG MF技术逐渐成熟起来,并被作为标准检测方法加以推广和应用。AOAC International和American Public Health Association将HG MF技术列为标准好氧菌落计数方法,即将HG MF在含0.025%FCF的TSA培养基上培养48 h进行计数[16-17]。Parrington等[18]基于绿色背景干扰计数结果的考虑,在其基础上又做了相应的改进,将在TSA上培养过的HG MF,加入1～2 mL 0.1%的TTC(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride)在室温下染色15 min,菌落变成红色,用HG MF计数器可以方便地对其进行自动计数。

随着这项技术广泛的使用,人们也不断对其进行创新和发展,并将其与实际研究工作相结合,联合多种检测技术用于食源性致病菌的检测,达到优势互补的目的。借助HG MF技术中膜的载体作用,将其与目的菌的选择性培养基联用便是实验室进行快速检测的常规方法。此外,HG MF和一些分子生物学和免疫学技术联用,可以达到更方便、快捷、灵敏检测目标微生物的目的。

3.1 HGM F与选择性培养基联用的研究

HG MF从在食源性致病菌的检测方面开始应用就与诸多选择性培养基连用。Valdivieso等[3]根据嗜热弯曲杆菌的特殊生长要求,采用HG MF和半固体培养基(SS M)连用检测了1654个食品样品中的空肠弯曲杆菌的存在情况。在16～18 h之后,可以得到纯培养的弯曲杆菌,而采用FSPM (Food Safety Procedures Manual)要用48 h才能得到同样的结果。Jericho等[19]采用HG MF-TSA培养后,喷雾1.0%TTC,检测水平显著提高(P＜0.001)。Rosa Capita等[20]用EF-18Agar-HG MF分析了来自于禽肉中沙门氏菌,和标准方法的比较发现,EF-18Agar-HG MF在检测禽肉中的沙门氏菌时灵敏度和特异性是不够的。这说明只是通过选择性平板进行检测目的菌是不完善的。Mannig等[21]采用HG MF-Miller-Mallinson Agar和红外光谱分析结合,在检测实际的食品样品(包括牛奶、鸡蛋、西红柿、鸡肉等)时,沙门氏菌属水平检测达100%,菌株水平检测达90%。

3.2 HGM F与免疫学技术联用的研究

疏水网格滤膜偶联酶标抗体着色(HG MFEnzyme Labeled Antibody)是利用细菌的表面抗原与特异性抗体的物理结合能力,根据酶标抗体的显色反应,达到检测已吸附在膜上的细菌细胞的目的。

Cerqueira-Campos等[22]研究了HG MF-ELA在检测沙门氏菌时的应用,并与HPB方法进行了比较。将经过滤处理的滤膜浸HRP-protein A Spicer-Edwards混合液,然后着色处理,可观察到紫色菌落。经比较发现,HG MF可以直接浸抗体液,且着色深浅在对比明显的背景下均可见,重现性好,但是在对54株沙门氏菌和11株非沙门氏菌的检测过程,Citrobacter freundii出现了假阳性现象。Todd等[23]为了找到在沙门氏菌中能进行HMGF-ELA的最佳抗血清,筛选了566株来自于11个血清型的沙门氏菌。实验中,他们将经过滤培养的HG MF用多种化学试剂处理,以便能更好地暴露菌体细胞表面的抗原决定簇,方便其和多抗或单抗的特异性结合。实验结果表明,2个单克隆抗体S.typhi 42和M105表现出了和沙门氏菌属细菌强的结合特异性。

随着免疫学技术的发展,单克隆抗体得到更加广泛的使用。Szabo等[24]利用单克隆抗体进行HG MF-ELA检测E.coliO157∶H7得到了比较好的检测灵敏度(≤cfu/g),是传统涂平板法的10倍。但是又出现了新的问题,由于被检样品的颜色污染,混淆了阳性菌株的筛选,因此将HG MF转印到新的培养基上,复苏率可重新获得提高。Todd等[25]利用针对O抗原的单克隆抗体与HG MF技术偶联来检测食品样品中的E.coli O157∶H7。检测结果与预期相符合,在对人工污染样品的检测中,E.coliO157∶H7的复苏率达到了95%。

3.3 HGM F与分子生物学技术联用的研究

疏水网格滤膜偶联菌落原位杂交(HG MFColony Hybridization)是直接将经过处理的滤膜进行DNA杂交的后续操作,即裂解细胞、释放DNA、去除蛋白的干扰、加入带有标记的DNA探针,从而对目的菌进行特异性检测。

3.3.1 单核细胞增生李斯特菌的检测 单核细胞增生李斯特菌(L.m onocytogenes)是一种人畜共患病的病原菌,广泛存在于自然界中,且在4℃的环境中仍可生长繁殖,是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。将HG MF与菌落原位杂交技术偶联应用于对L.m onocytogenes的研究始于1989年,Peterkin等[26]采用HG MF技术从L. m onocytogenes基因库的7个克隆的β-溶血素基因中筛选特异性的DNA探针,结果表明该筛选方法有潜在的应用价值。1991年,Peterkin等[27]又比较了采用纤维素膜和疏水网格滤膜做为探针杂交载体的不同。研究结果表明,HG MF-CH和传统的菌落原位杂交方法无差距,但因HG MF-CH技术集合了疏水网格滤膜的特点,与后者相比具有明显的优势。随后,他们又比较了应用HG MFCH方法和HPB方法检测人工污染的食品样品中L.m onocytogenes的存在情况。将食品样品分别与L.m onocytogenes、L.innocua、L.welshim eri或L.seeligeri进行培养(人工污染水平为1～100 cells/g),HG MF计数结果表明,与HPB方法相比没有显著差异(a=0.05)[28]。W.Yan等[29]采用地高辛标记的DNA探针和HG MF连用,检测200个食品样品中的L.m onocytogenes,与HPB方法相比,检测特异性达到了100%,灵敏度达到了94%。

3.3.2 空肠弯曲杆菌的检测 Lai-King等[30]采用1475 bp的基因探针pDT1720和孔径为0.22 μm的HG MF联用对Cam pylobacter进行菌落原位杂交。在对来自于环境和临床菌株以及310株其他菌株的检测中,C.jejuni和C.jejunisubsp. doylei isolates在严格的杂交条件下可以和探针产生杂交信号。Haiyan Wang等[31]也比较过HG MF-ELA和HG MF-DNA hybridization等快速检测技术在对食品样品中的嗜热性Campylobacter spp.和C.jejuni的应用。

3.3.3 其他食源性致病菌的检测 Todd等[32]采用地高辛标记的志贺式样毒素基因的特异性探针与HG MF连用检测Verotoxigenic Escherichia coli (VTEC),纯培养菌株和人工污染的菌株检测限都达到了0.1 cfu/g。文中还指出,对于食品样品中低水平存在的VTEC可有效检出。

在对产气荚膜梭状芽胞杆菌的研究中,Annamari等[33]成功地利用HG MF-CH技术在粪便中分离得到cpe-positive Clostridium perfringens孢子。文中指出,在来自于健康人体的7份粪便中,有2份检测到HG MF-CH杂交信号,并且成功分离到了cpe-positive C.perfringens菌株。HG MFCH方法对cpe-positive C.perfringens菌株的检出分辨率达到了6×10-6或更高。

4 HG MF技术发展展望

食源性致病菌是危害公共卫生安全的重要隐患。快速的微生物检测是评价食品安全的重要手段之一。微生物检测与食品中其他的化学物质检测不同的一点是,微生物检测的操作步骤中需要增菌的过程,任何检测方法都不能省略此步骤,但是其所耗时间却是可以缩短的。而目前,国内在食源性致病菌快速检测方面的研究主要集中于对检测方法的改进和创新,且在富集增菌方面缩短时间的免疫磁珠法也并不能解决处理批量样品的问题。疏水网格滤膜技术除具有缩短富集培养时间,处理大量样品外,还可以获得纯培养菌落,消除食品样品中的抑制因子,使受损细胞得以生长并被检出,从而为食源性致病菌的安全风险评估提供可靠的数据。而且HG MF的检测对象不仅仅局限于流质性样品如饮料、饮用水等,同时也适用于可采用均质处理的其他样品,如蔬菜、乳制品、畜禽肉、以及肠内容物等。另外,HG MF技术和其他的技术的偶联效果更是不容忽视。目前,基于HG MF过滤富集过程之上,采用什么方法对其进行菌株的鉴定和检测是研究的方向。前人的研究中,DNA-CH的方法比较耗时,现在利用菌落原位杂交的特异性和省时的特点,设计新的思路结合二者的优点在快速检测的时间限和灵敏度上有所突破应是今后改进该系统的一套新思路。

利用新型的生物技术手段,联合这种基于传统微生物分析方法之上的富集分离技术,不仅能给检测方法的研究带来新的启发,而且能够解决实际样品检测的繁重任务,是未来发展的一条新思路。

[1]刘秀梅,陈艳,王晓英,等.1992～2001年食源性疾病暴发资料分析—国家食源性疾病监测网[J].卫生研究,2004,6 (33):725-727.

[2]Brichta-Harhay D M,Arthur TM,Koohmaraie M.Enumeration of Salmonellafrom poultry carcass rinses via direct plating methods[J].Applied Microbiology,2008,46:186-191.

[3]Valdivieso-Garcia A,Harris K,Riche.Novel Campylobacter Isolation Method Using Hydrophobic Grid Membrane Filter and Semisolid Medium[J].Journal of Food Protection,2007,8 (70):355-362.

[4]李慧珠,关嵘.用疏水滤膜技术快速检测饮料等食品中的细菌总数和大肠菌等细菌[J].现代商检科技,1998,4(8 ):24-27.

[5]Mudd S,EmilyB H.The penetration of bacteria through capillary spaces[J].The Journal of Experimental Medicine,1924, 5(40):633-645.

[6]Entis P,Brodsky M H,Sharpe A N,et al.Rapid Detection of Salmonellaspp.in Food byUse of the ISO-GR I D Hydrophobic Grid Membrane Filter[J].Applied and Environmental Microbiology,1982,43(2):261-268.

[7]Doyle M P,Schoeni J L.Isolation of Escherichia coliO157∶H7 from Retail Fresh Meats and Poultry[J].Applied and Environmental Microbiology,1987,53(10):2394-2396.

[8]Peterkin P I,Sharpe A N.Rapid Enumeration of Staphylococcus aureusin Foods by Direct Demonstration of Enterotoxigenic Colonies on Membrane Filters by Enzyme I mmunoassay[J].Applied and Environmental Microbiology,1984,47(5):1047-1053.

[9]Wu,V C H,FungD Y C.An improved method for Iso-Grid Hydrophobic Grid Membrane Filter(HG MF)system to detect heat-injured foodborne pathogens in ground beef[J].Food Science,2004,69(3):85-89.

[10]Sharpe A N,Peterkin P I,Malik N.Improved Detection of Coliforms and Escherichia coliin foods by a Membrane Filter Method[J].Applied and Environmental Microbiology,1979,38 (3):431-435.

[11]Brichta-HarhayD M,Arthur TM,Bosilevac J M,et al.Enumeration of Salmonella and Escherichia coliO157∶H7 in ground beef,cattle carcass,hide and faecal samples using direct plating methods[J].Journal of Applied Microbiology,2007,103:1657-1668.

[12]Sharpe A N.Machine for Printing Hydrophobic Grids on Membrane Filters[J].Applied and Environmental Microbiology, 1975,30(1):110-112.

[13]Peterkin P I,SharpeA N,Warburton A D W.Inexpensive Treatment of Frozen Dairy Products for Membrane Filtration[J].Applied and Environmental Microbiology,1982,43(2):486-487.

[14]Entis,P,Boleszczuk P.Overnight enumeration of Vibrio parahaemolyticusin seafood by hydrophobic grid membrane filtration [J].Journal of Food Protection,1983,46:783-786.

[15]Depapla A,Hopkins L H,Mcphearson R M.Evaluation of Four Methods for Enumeration of Vibrio parahaemolyticus[J].Applied and Environmental Microbiology,1988,54(2):617-618.

[16]Association of Official Analytical Chemists.Aerobic plate count in foods,hydrophobic grid membrane filter method[J].Journal of Association of Official Analytical Chemists,1986,69:376-378.

[17]Association of Official Analytical Chemists.Official methods of analysis of the Association of Official Analytical Chemists,15th ed.Association of Official Analytical Chemists,Arlington,Va. 1990.

[18]Parrington L J,SharpeA N,Peterkin P I.Improved Aerobic Colony Count Technique for Hydrophobic Grid Membrane Filters [J].Applied and Environmental Microbiology,1993,59(9): 2784-2789.

[19]Jericho1 KW F,Kozub G C,Loewen K G,et al.Comparison of methods to determine the microbiological contamination of surfaces of beef carcasses by hydrophobic grid membrane filters, standard pour plates or flow cytometry[J].Food Microbiology, 1996,13,303-309.

[20]Capita R,Álvarez-Astorga M,Alonso-Calleja C,et al.Evaluation of the EF-18Agar-Hydrophobic Grid Membrane Filter (HG MF)Method to Isolate Salmonellafrom Poultry Products [J].The Journal of Microbiology,2001,39(3):202-205.

[21]Mannig A,Baldauf N A,Rodriguez-Romo L A,et al.Differentiation of Salmonellaenterica serovars and strains in cultures and food using infrared spectroscopic and microspectroscopic techniques combined with soft independent modeling of class analogy pattern recognition analysis[J].Journal of Food Protection, 2008,71(11):2249-2256.

[22]Cerqueira-Campos M L,Peterkin P I,Sharpe A N.Improved Immunological Membrane Filter Method for Detection of Food-Borne Salmonella Strains[J].Applied and Environmental Microbiology,1986,52(1):124-127.

[23]Todd E C D,Mackenzie JM,Parrington L J,et al.Evaluation of Salmonellaantisera for an optimum enzyme-linked antibody detection of Salmonellausing hydrophobic grid membrane filters [J].Food Microbiology,1991,8(4):311-324.

[24]Szabo R A,Todd E C D,Mackenzie J M,et al.Increased Sensitivity of the Rapid Hydrophobic Grid Membrane Filter Enzyme-Labeled Antibody Procedure for Escherichia coliO157 Detection in Foods and Bovine Feces[J].Applied and Environmental Microbiology,1990,56(11):3546-3549.

[25]Todd E C D,Szabo R A,Peterkin P I,et al.Rapid Hydrophobic Grid Membrane Filter-Enzyme-Labeled Antibody Procedure for Identification and Enumeration of Escherichia coliO157 in Foods[J].Applied and Environmental Microbiology,1988,54 (10):2536-2540.

[26]Peterkin P I,Idziak E S,Sharpe A N Screening DNA probes using the hydrophobic grid-membrane filter[J].Food Microbiology,1989,6(4):281-284.

[27]Peterkin P I,Idziak ES,Sharpe A N.Detection of Listeria monocytogenes by Direct Colony Hybridization on Hydrophobic Grid-Membrane Filters by Using a Chromogen-Labeled DNA Probe [J].Applied and Environmental Microbiology,1991,57(2): 586-591.

[28]Peterkin P I,Idziak E S,Sharpe A N.Use of a hydrophobic grid-membrane filter DNA probe method to detect Listeria monocytogenesin artificially-contaminated foods[J].Food Microbiology,1992,9(2):155-160.

[29]YanW,Malik M N,Peterkin P I,et al.Comparison of the hydrophobic grid-membrane filter DNA probe method and the Health Protection Branch standard method for the detection of Listeria monocytogenesin foods[J].International Journal of Food Microbiology,1996,30:379-384.

[30]Lai-KingN G,William Y,Diane E,et al.Specific Detection and Confirmation of Campylobacter jejuni by DNA Hybridization and PCR[J].Applied and Environmental Microbiology,1997,63 (11):4558-4563.

[31]Wang Haiyan.Rapid Methods for Detection and Enumeration of Campylobacterspp.in Foods[J].Jurnol of AOAC international,2002,85(4):996-999.

[32]Todd E C D,Szabo R A,Mackenzie J M,et al.Application of a DNA Hybridization-Hydrophobic-Grid Membrane Filter Method for Detection and Isolation of Verotoxigenic Escherichia coli [J].Applied and Environmental Microbiology,1999,65(11): 4775-4780.

[33]Annamari Heikinheimo,Miia Lindström,Hannu Korkeala. Enumeration and Isolation of cpe-Positive Clostridium perfringens Spores from Feces[J].Journal of Clinical Microbiology, 2004,42(9):3992-3997.

The Advances of Hydrophobic Grid Membrane Filter Technology and Its Application in Foodborne Pathogens Determination

SU Chen-xi1,PAN Ying-jie1,ZHAO Yong1,Vivian C.H.Wu2,SUN Xiao-hong1
(1.Coll.of Food Sci.&Technol.,Shanghai Ocean Uni.,Shanghai201306; 2.Dept.of Food Sci.&Human Nutrition,Uni.of M aine,M E04469-5735,USA)

Based on the hydrophobic interaction,the hydrophobic grid membrane filter(HG MF)could filter food samples,and capture bacterial cells which then were incubated on the selective medium for testing and identifying them.The principle and features of the HG MF were mainly summarized.The application of HG MF coupling with molecular biology and immunology in detection of foodborne pathogens was also introduced in this paper.

hydrophobic grid membrane filter(HG MF);microbiological detection;enzyme labeled antibody;DNA probe;colony hybridization

Q93-332

A

1005-7021(2010)06-0076-06

霍英东教育基金会第十一届高等院校优选资助课题(114035);上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字2009年第6-1号);上海市教育委员会重点学科建设项目(J50704)

苏晨曦 女,硕士研究生。研究方向为食品生物技术。E-mail:chenxisu2010@163.com

＊通讯作者。E-mail:xhsun@shou.edu.cn

2010-04-29;

2010-11-01