丙型肝炎患者HCV RNA与转氨酶的关系

叶剑荣 袁利群

丙型肝炎患者HCV RNA与转氨酶的关系

叶剑荣 袁利群

目的了解丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)与天冬氨酸转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)之间的关系。方法对119例(自2008年1月～2009年5月)来自湖南省人民医院住院和门诊丙型肝炎患者进行HCV RNA、抗-HCV及AST、ALT检测。采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测标本中的HCV RNA，同时采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测抗-HCV，用全自动生化检测仪测定AST、ALT水平。分析分别在HCV RNA大于临界值组和HCV RNA小于临界值组的病人血清中转氨酶与其的关系。结果本研究的119例标本中有116例抗-HCV均为阳性，其中HCV RNA高于上限值(≥1000copies/mL)87例，二都有很好的相关性；共有70例存在ALT异常，73例存在AST异常，ALT、AST水平与HCV RNA含量对数值无显著相关性，但ALT、AST阳性率与HCV RNA大于临界值有一定的吻合关系。结论HCV RNA是反映HCV复制的可靠指标。结合AST、ALT结果可帮助临床了解HCV在体内的复制状况及肝脏的损伤情况。RT-PCR法检测HCV RNA具有非常好的临床应用价值。

丙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒抗体；天冬氨酸转移酶；丙氨酸氨基转移酶；聚合酶链反应

丙型肝炎由丙型肝炎病毒(HCV)感染所致，主要由血液/体液传播，占输血后肝炎的70%，HCV感染是全世界范围内造成慢性肝病的主要原因。WHO估计全球有1.7亿人感染丙型肝炎病毒[1]。在我国健康人群中抗-HCV阳性率为0.7%～3.1%，约3800万人[2]。HCV感染易导致慢性化，50%～80%的成人急性感染易发展为慢性肝炎。其20%～30%将发展成肝硬化。而其中肝硬化患者中每年有1%～4%发展成肝细胞癌[3]。目前发现的HCV感染多见于非输血人群间经破损的皮肤和黏膜的传播。因此HCV的检测除针对供血者外，也应对所有疑似丙肝感染的患者进行检测，以减少继发性感染的发生[4]。笔者对本院住院和门诊119例丙型肝炎患者同时进行抗-HCV、HCV RNA、ALT和AST的检测，以探讨它们相互之间的关系。

1 资料与方法

1.1 标本来源 2008年1月～2009年5月湖南省人民医院住院和门诊的119例丙肝患者标本。无菌抽取患者空腹静脉血3ml，4h内分离血清，进行各项检测，不能及时检测的，置于-40℃保存，一周内检测。

1.2 检测试剂 HCV-RNA检测试剂由深圳匹基生物工程股分有限公司提供。HCV-Ab由珠海丽珠试剂有限公司提供。AST、ALT试剂由上海科华东菱诊断用品有限公司提供。

1.3 检测仪器 Bio-Radi Cycler PCR基因扩增仪，美国伯乐公司提供；FAME 24/20全自动酶免分析仪，来自瑞士哈美顿公司(HAMILTON)；OLYMPUS AU640全自动生化分析仪，由日本OLYMPUS公司生产。

1.4 检测方法 各检测项目严格按照说明书操作。

1.5 数据处理 本研究HCV RNA检测试剂盒的定量检测线性范围为1.0×103～5.0×107，以HCV RNA拷贝数=1000copies/mL作为临界值，当≥1000copies/mL时提示病人体内带有一定的HCV，该病人具有一定的传染性。

抗-HCV按照试剂盒说明要求：阳性对照A值应≥0.5，阴性对照A值应≤0.12，临界值(C.0.)=0.12+阴性对照平均A值。故以样品A值≥临界值(C.0.)判为HCV抗体阳性，样品A值＜临界值(C.0.)判为HCV抗体阴性。

ALT，AST均以试剂盒说明要求结果≥40U/L为阳性结果。

所收集整理得到的数据采用SPSS13.0统计软件进行处理，统计学分析采用x2检验与多元线性回归分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

HCV RNA和抗-HCV相关性：在检测的119例标本中，116例为抗-HCV阳性。而在整个抗-HCV阳性标本中进一步应用HCV RNA定量检测判定大于临界值有84例，为原抗-HCV阳性标本75%。由此可见抗-HCV阳性者与HCV RNA有较好相关性。结果见表1。

在HCV RNA大于临界值或抗-HCV阳性标本中多伴有AST、ALT升高，采用多元线性回归分析后发现ALT水平与HCV RNA含量对数值无显著相关性(P=0.328)，AST水平与HCV RNA含量对数值也无显著相关性(P=0.156)。

在119例分析样本中，共检测出ALT异常者70例，其中HCV RNA含量＜1000Copies/mL时ALT异常为11例(34%)，≥1000Copies/mL时，ALT异常者为59例(68%)，在HCV RNA含量≥1000Copies/mL组明显高于HCV RNA含量＜1000Copies/mL组。同样119例分析样本中，共检测出AST异常者73例，其中HCV RNA含量＜1000Copies/mL时AST异常为15例(47%)，≥1000Copies/mL时，AST异常者为58例(67%)。

ALT、AST在HCV RNA含量＜1000Copies/mL和≥1000Copies/mL两个区间范围中的阳性率各自比较差异有统计学意义(均P＜0.05)。见表2，表3。

表1 HCV RNA在抗-HCV不同组中的比较(n=119)

表2 ALT在HCV RNA不同组中的比较

表3 AST在HCV RNA不同组中的比较

3 讨论

抗-HCV和HCV RNA是目前诊断HCV感染的主要病原学指标，抗-HCV间接反映HCV的感染和既往感染，而HCV RNA是诊断HCV病毒血症的“金标准”[6]。文献报道，采用PCR检测方法可将HCV窗口期缩短41～60D，从而提高HCV诊断率[7]。李竹萍等[8]认为，患者虽处于血液中带有感染病毒，但病毒未产生相应抗体期时或HCV病毒变异、异常亚型等原因，加之ELISA试剂因受原材料所限，不同厂家的试剂所包被的抗原片段不同，均可造成漏检。

据文献报道，抗-HCV和HCV RNA符合率一般60%～70%，本文中二者符合率为75%，说明两者间具有较好的一致性。在所检测的119例标本中有35例标本抗-HCV和HCV RNA检测结果不符，其中抗-HCV阳性而HCV RNA小于临界值标本32例，这可能是由于患者已处于感染恢复期或经抗病毒治疗，病毒复制减弱或停止，HCV RNA已消失或含量很低而检测不出，而此时抗体仍持续存在。本组中另有3例患者抗-HCV阴性而HCV RNA大于临界值，这可能是由于患者处于感染的“窗口期”，或患者免疫功能低下，机体尚未产生抗体或产生的抗体很少而检测不出。有临床资料显示，在急性丙型肝炎的恢复期，丙型肝炎病毒复制停止致HCV RNA检测值低于临界值以下，而抗-HCV仍可存在一段时间，这也可能是抗HCV阳性而RNA检测低于临界值的原因。对于抗-HCV和HCV RNA有较好的相关性的慢性丙型肝炎，尽管肝内丙型肝炎病毒持续存在，但病毒血症可能出现波动即血清HCV RNA呈波浪状起伏，当HCV RNA达到波谷时，HCV RNA检测小于临界值，该情况的患者建议应随访复查。

Adinolfi[9]认为，血清HCV RNA水平与肝损伤程度相关。本组中表2、表3结果说明此结论。Zechini[10]认为，转氨酶水平特别是AST的水平，与肝损伤的程度有关。本组中表3结果支持此结论。Lshikawa[11]也报道ALT和TBIL的水平高低与HCV在体内复制的活跃程度有一定的相关性。Sabin等[12]曾对输血后丙肝进行研究认为HCV RNA水平与ALT水平正相关。本文经统计学分析显示，ALT、AST异常率在HCV RNA大于临界值组中明显高于HCV RNA小于临界值组，但ALT、AST水平与HCV RNA含量对数值无显著相关性，说明HCV RNA水平与肝损伤程度相关，便是不能反映肝脏损伤的程度，即HCV RNA水平与ALT、AST水平无相关性，与赵辉等[5]的研究结果一致。这有可能与病例分布的差异有关，表明病毒含量不能反映肝脏组织的损伤程度，也有可能与HCV发病机制有关。

综上所述，HCV RNA是反映HCV复制的可靠指标，结合LAT、AST结果可帮助临床了解HCV在体内的复制状况及肝脏的炎性反应状态。但由于约有20%～30%的HCV慢性感染病人ALT持续正常，临床症状缺失或非常轻微，造成ALT、AST水平与HCV RNA含量相关性较低，其作用有限，个别病人有时肝脏炎性反应状态与病毒含量及ALT、AST水平并不平行，所以在临床诊疗的过程中应结合其他临床指征具体病例具体分析治疗。

[1]Alberti A,Benvegnu L.Management of hepatitis C[J].Hepatol,2003,38(suppl 1):104-118.

[2]Lau GKK,Zhuang H.Tpo hepatology ?issue in China[J].Gastroent Hepatol,2003,17 (suppl):A9.

[3]邵圣文,于建国,武文斌,等.丙型肝炎病毒F蛋白磷酸化位点突变与细胞内分布[J].微生物与感染,2007,2(2):78-82.

[4]庄爱周,钱丰,林甲进.手术前和受血前血液传染病相关指标的检测及意义[J].现代中西医结合杂志,2005,14(10):1356.

[5]赵辉,谢尧,李明慧,等.慢性肝炎患者的血清HCV基因型和RNA含量与ALT和AST水平不相关[J].中华检验医学杂志,2007,30(6):631-634.

[6]杨东亮.丙型肝炎的病毒学检测指标及其临床意义[J].中华肝脏病杂志,2004,12(2):14.

[7]刘伟雄,王坚,宋正敏.PCR检测病毒核酸在血制品生产中的应用[J].中国输血杂志,2004,17(6):415-417.

[8]李竹萍,薛敏,吴敏慧.ELISA二代三代试剂与PCR试剂检测抗-HCV的比较[J].临床输血与检验,2002,4(2):52.

[9]Adinolfi LE,Utili R,Andreana A,et al.Serum HCV RNA levels correlate with histological liver damage and concur with steatosis in progression of chronic hepatitis C[J].Dig Dis Sci,2001,46(8):1677-1683.

[10]Zechini B,Pasquazzi C,Aceti A.Correlation of serum aminotransferases with HCV RNA levels and histological findings in patients with chronic hepatitis C:the role of serum aspartate transaminase in the evaluation of disease progression[J].Eur J Gastroenterol Hepatol,2004,16(9):891-896.

[11]Lshikawa T,Ichida T,Yamagiwa S,et al.High viral laods,serum alanine aminotransferase and gender are Predictive factors for the development of hepatocellular carcinoma from viral compensated livercirhosis[J].J Gantroentrol Hepatol,2001,16(11):1274-1281.

[12]Sabin CA,Emery V,Devereux HL,et al.Long-term patterns of hepatitis C virus RNA concentrations in a cohort of HIV seronegative men with bleeding disorders[J].J Med Virol,2002,68(1):68-75.

Objective To evaluate the relationship of hepatitis C virus RNA (HCV RNA) and AST and ALT. Methods One hundred and nineteen hospitalized and clinical hepatitis C patient s were enrolled in this study. HCV RNA was qauantitated by FQ-RT-PCR. Anti-HCV was detected byenzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and AST, ALT level was measured by automatic biochemical detection system. Results Among 119 patients,116 patients with positive anti-HCV, 87 patients were positive of HCV RNA, 70 with higher ALT, 73 with higher AST, there was some relationship between HCV RNA, anti-HCV and the positive rate of AST, ALT. Conclusion HCV RNA is a reliable marker of replication. AST, ALT level refiect replication status and infiammation state of the liver. HCV RNA detected by FQ-RT-PCR is clinically practical.

hepatitis C virus; Anti-HCV; AST; ALT; PCR

10.3969/j.issn.1009-4393.2010.12.058

410005 湖南省人民医院检验科 (叶剑荣 袁利群)