用微波技术处理肾穿组织的新方法

王宏艳，王玉国，孙红年，张淑东

（1.黑龙江省大庆油田总医院病理科，黑龙江大庆 163000；2.黑龙江省大庆市东海医院急诊科，黑龙江大庆 163000）

肾活检组织病理检查在肾活检病理诊断中具有重要价值。使用多种病理学检查方法，如光学显微镜、免疫荧光检查和电子显微镜下的超微结构检查等，对病理切片制作质量要求很高。根据肾脏生理特殊的形态、结构，在常规病理技术的基础上，吸收、保留、创新形成一套独特的适应肾活检病理诊断需要的技术，一般皮肾穿刺的肾脏组织标本体积很小，通过特殊染色可以显现标本中特殊的物质，如基底膜、免疫复合物等，除了常规HE染色外，还需要多种特殊染色方法，PSA法、Masson法和过碘酸六胺银 （periodic acid-silver methenamine，PASM）染色。大部分医院处理肾穿组织的方法常常是将肾穿组织与常规标本放在一起，在同一台脱水机中进行处理，病理活检报告至少需要3 d。因此，常规的特殊染色制作比较费时，尤其是，控制不好往往失败。我们将微波辐射技术应用于肾活检组织的过程中，快速优质的处理只需要1 h，则可以得出病理诊断结果。临床实践证明，其具有快速省时，染色效果好，不易脱片等优点，现介绍如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集我院每天的肾穿标本。使用天津产的MS2586DTS型微波炉。4%中性福尔马林、90%乙醇伊红、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、2%松香石蜡。

1.2 方法

1.2.1 固定

常规方法是将送检的肾活检标本浸入4%中性福尔马林溶液中固定8～10 h，用时较长。该技术是将取材后的肾穿标本放入15 ml的小玻璃标本瓶内，向标本瓶内注入10 ml 4%中性福尔马林后放入微波炉中，同时放入一烧杯水，大约100 ml，有利于调节炉内温度。使用中档火力，输出功率为60 W，恒温75℃，3～5 min，组织由红变白后即为固定完成。因为肾组织标本体积小，易黏附于容器壁而影响固定效果，所以置入固定液后，应适当摇晃使标本充分浸泡于固定液中。

1.2.2 脱水

肾组织固定后用乙醇作为脱水剂，为了避免脱水过程中引起组织的强烈收缩和变形，应采用由低向高梯度渐进式乙醇浓度配合微波脱水。具体如下：

1.2.2.1 标本瓶取出后，倒出瓶中液体，注入90%乙醇伊红煤染，放入微波炉中，同样功率加热3 min。

1.2.2.2 标本瓶取出后，倒出瓶中液体，注入95%乙醇，放在微波炉中，同样功率加热3 min，并重复操作1次。

1.2.2.3 标本瓶取出后，倒出瓶中液体，注入无水乙醇，放在微波炉中，同样功率加热3 min，重复操作2次。

1.2.3 透明

透明剂选用二甲苯。取出标本瓶后，倒出瓶中液体，向标本瓶中注入二甲苯进行透明，放在微波炉中用中高档火力，输出功率为80%，恒温90℃，加热3 min。此过程时间不宜过长，否则容易使组织收缩变脆。

1.2.4 浸蜡

浸蜡是组织处理中较为重要的一步，注意控制石蜡液体的温度，应选择熔点为58～60℃的石蜡，浸蜡温度控制在比石蜡熔点高5～6℃，因为石蜡温度过高会导致肾组织干脆，切片容易出现龟裂现象，浸蜡次数不应少于三缸，否则透明剂去除不干净，影响切片质量。该技术的操作是将标本瓶取出后，倒出瓶中液体，注入2%松香石蜡浸蜡，放在微波炉中，中档火力，输出功率为60 W，恒温75℃，加热5～7 min。包埋、切片、染色、封片同常规，此方法可以一次同时处理20～30个标本。

2 结果

肾穿组织经过微波脱水、透明、浸蜡等处理后，与常规制片对照，细胞收缩无差别，微波温度控制在90℃以下，酶不会失去活性。因此不影响免疫组化和特殊染色的结果。

3 讨论

微波是一种高频电磁波，近来已成功地应用于光镜、电镜及免疫学的研究，特别是在组织固定、脱水及免疫组织化学技术中的应用已日益广泛。笔者采用微波辐射技术与常规制片技术相比较，在肾活检组织的切片中取得了良好的效果。与常规法相比，微波制片具有较大的优势。

肾脏组织结构致密，细胞成分多，皮肾穿刺的肾脏组织标本体积很小，常规方法制片时切片容易碎，易脱片，组织切片质量不好，影响正常诊断。尤其是在大部分医院中，常规处理肾穿组织需要3 d，笔者采用微波快速处理肾穿组织，既缩短了时间，又避免了常规用同一台脱水机同时处理大小标本的不理想效果。由于肾脏组织结构致密，细胞成分多，要求组织切片厚度2～3μm为宜，太厚会造成细胞成分重叠，出现假象，影响正常诊断，而常规的方法在脱水机中处理时，由于使肾穿组织脱水、透明、浸蜡等过程相对时间过长，造成组织脆硬，切片时如果过厚造成细胞成分重叠，切片过薄容易使切片破碎、易脱片等现象，而用微波处理的肾穿标本大大缩短了脱水、透明、浸蜡等过程所用的时间，克服了组织脆硬缺点，使组织结构、细胞内成分保持良好，特别是抗原得到良好保存，从而不影响切片及免疫组化和特殊染色效果。因此，微波对肾穿组织的快速处理是一种简单、快捷、经济、实用、理想的常规病理制片的新技术。

[1]龚志锦,詹熔洲.病理组织制片和染色技术[M].上海:上海科学技术出版社,1994:3-24.

[2]胡小安,卢静,张润.介绍一种肺穿刺组织的制片方法[J].诊断病理学杂志,2009,12(3):474.

[3]印志琪,王正禄,张学义,等.一种改良的肝穿刺活检标本快速制片方法[J].诊断病理学杂志,2007,14(1):80.

[4]程国平,徐建勤,胡锦林,等.超声及微波辐射技术在制备穿刺活检组织切片中的应用[J].诊断病理学杂志,2007,14(6):475.

[5]孙保存,赵秀兰,章明放,等.微波抗原修复法在免疫组织化学双标记技术中的应用[J].中华病理学杂志,1996,25(4):249-250.

[6]熊正文,王伯,史景泉.微波修复抗原技术在免疫组织化学染色中的应用现状[J].临床与实验病理学杂志,1998,14(2):177.