大承气汤治疗重症急性胰腺炎大鼠的实验研究

唐 晋,宋孟龙,程 飞,张献全

(重庆医科大学第二附属医院肿瘤科 400010)

大承气汤治疗重症急性胰腺炎大鼠的实验研究

唐 晋,宋孟龙,程 飞,张献全△

(重庆医科大学第二附属医院肿瘤科 400010)

目的探讨大承气汤治疗重症急性胰腺炎(SAP)的作用机制。方法健康Wistar大鼠50只随机分成5组,分别为:假手术组(A组),SAP模型组(B组),SAP+乌司他丁治疗组(C组),SAP+大承气汤治疗组(D组),SAP+大承气汤+乌司他丁治疗组(E组)。采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠法建立SAP大鼠模型,于制模后24 h收集样本,检测大鼠肺组织、回肠和血浆中促炎因子白细胞介素-6(IL-6)、内毒素(ET)和抑炎因子白细胞介素-10(IL-10)的含量变化。结果SAP+乌司他丁治疗组、SAP+大承气汤治疗组、SAP+大承气汤+乌司他丁治疗组与SAP模型组比较血浆及组织ET、IL-6含量明显降低(P＜0.05),IL-10含量明显升高(P＜0.05);SAP+大承气汤+乌司他丁治疗组与SAP+乌司他丁治疗组、SAP+大承气汤治疗组比较血浆及组织ET、IL-6含量明显降低(P＜0.05),IL-10含量明显升高(P＜0.05)。结论大承气汤可能通过减少致炎因子 ET、IL-6和增加抑炎因子IL-10来影响SAP的炎症反应,大承气汤和乌司他丁对大鼠SAP具有相加或协同的抗炎作用。

重症急性胰腺炎;大承气汤;炎症因子

△通讯作者。

重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是临床常见的急危重症之一,是指急性胰腺炎伴有其他器官功能障碍或胰腺出现坏死、脓肿或假性囊肿等局部并发症者,Ranson评分大于3分,APACHEⅡ评分大于8分,Balthazar CT分级在Ⅱ级或以上者。SAP具有起病急、变化快、并发症多等特点,常伴发休克、呼吸功能不全、肾功能不全、感染等并发症,死亡率高达20%～30%。SAP发病机制复杂,近年研究显示,炎症因子参与SAP的发病,临床应用大承气汤治疗SAP可以降低死亡率,但其机制尚不清楚。本实验研究大承气汤治疗SAP大鼠炎症因子的变化情况,探讨大承气汤治疗SAP的机制。

1 材料与方法

1.1 动物及分组 健康Wistar大鼠50只(购自重庆医科大学实验动物中心,清洁级)体质量 220～250 g,随机分成5组,每组10只。分为A组:假手术对照组;B组:SAP模型组;C组:SAP+乌司他丁治疗组;D组:SAP+大承气汤治疗组;E组:SAP+大承气汤+乌司他丁治疗组。

1.2 药物 乌司他丁(ulinastatin,UTI,天普生物化学制药有限公司);大承气汤(重庆医科大学附属第二医院中药房提供),配方为大黄20 g,枳实10 g,厚朴10 g,芒硝15 g,熬制成W/V为1∶1的药液。

1.3 主要仪器和试剂 SP-100型微量注射泵(日本JMS公司);TGL-16G恒温高速离心机(上海安亭科学仪器厂);LP-4000型酶标仪(法国Basture公司);BX50生物光学显微镜(日本Olympus公司);超低温冰箱(日本 SANYO公司);牛磺胆酸钠(美国Sigma公司);大鼠IL-6 ELISA测试药盒(中国晶美生物工程公司);大鼠IL-10 ELISA测试药盒(中国晶美生物工程公司);内毒素(ET)检测采用上海市医学化验所生产的鲎试剂盒(Ⅱ)。

1.4 动物模型的制备 参照 Frossard和Pastor[1]的方法,采用胰管内逆行注入5%硫磺胆酸钠0.1 mL/100 g建立大鼠SAP模型。

1.5 实验动物处理 假手术组(A组):大鼠开腹后翻动胰腺数次后关腹;乌司他丁治疗组(C组):制模后30 min以4万u/kg静脉注入乌司他丁;大承气汤治疗组(E组):制模后12 h灌入熬制好的大承气汤1 mL/100 g;乌司他丁+大承气汤治疗组(F组):用两种药物治疗 SAP大鼠,方法同上。术后24 h取静脉血标本分离血浆置冰箱备用,取大鼠胰腺、左肺、回肠末端组织行病理检查,右肺组织、部分回肠组织液氮速冻后提取组织匀浆,置-70℃保存备用。

1.6 大鼠肺、回肠组织匀浆的获取 参照Tulzo等[2]的方法制作组织匀浆,肺、回肠组织匀浆分别以1∶8和1∶10的比例加入PBS缓冲液(0.1 mmol/L,pH=7.4)并用匀浆器搅匀,于低温高速离心机(4℃,8 000 r/min,30 min)分离出上清液分装置于小离心管于-70℃冰箱保存用于检测蛋白。

1.7 观察指标及方法

1.7.1 胰腺、左肺、回肠组织病理学检查 10%中性甲醛固定,石蜡包埋切片,HE染色后,光镜下观察各组动物病理变化。

1.7.2 内毒素、IL-6、IL-10测定 内毒素采用鲎试剂偶氮基质显色法定量检测,IL-6、IL-10采用酶联免疫测定(ELISA)试剂盒测定。

1.8 统计学方法 所有数据采用±s来表示,统计学分析采用SAS8.0软件行单因素方差分析,组间均数比较用t检验。

2 结 果

2.1 病理学变化 模型组胰腺腺泡细胞肿胀,可见灶性坏死,腺泡细胞间有大量炎症细胞浸润;小叶排列紊乱,其间有大量炎性渗出;坏死区内腺泡结构消失,胞核溶解;叶间隙增宽,间质微血管破裂,大量红细胞溢出;肺脏及回肠组织均有程度不同的充血、水肿及间质白细胞浸润,并可见白细胞贴附于血管内膜。各治疗组均有不同程度的改善,炎症细胞浸润减少。

2.2 ET检测结果 B组ET表达水平明显高于A组,E组与B、C组比较,ET表达水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05)。见表 1。

表1 各组大鼠血浆、肺和回肠内毒素的浓度比较(Eu/mL,x ±s)

2.3 IL-6检测结果 B组IL-6表达水平明显高于假手术组(A组),E组与 B、C组比较,IL-6表达水平明显降低,P＜0.05。见表2。

表 2 各组大鼠血浆、肺和回肠IL-6比较(pg/mL,x ±s)

2.4 IL-10检测结果 模型组IL-10表达水平明显高于A组,E组与B、C组比较,IL-10表达水平明显升高,P＜0.05。见表3。

表3 各组大鼠血浆、肺和回肠组织IL-10的浓度比较(pg/mL,±s)

表3 各组大鼠血浆、肺和回肠组织IL-10的浓度比较(pg/mL,±s)

★:与B组比较,P＜0.05;☆:与 C、D 组比较,P＜0.05。

组别 血浆 肺组织 回肠组织A 组 0.68±0.15 10.21±0.22 14.04±2.95 B组 11.50±1.28 46.89±4.08 27.40±4.17 C组 16.30±2.04★ 56.96±4.47★ 36.34±2.30★D 组 20.70±2.99★ 60.30±5.00★ 39.85±2.30★E组 32.12±4.30★☆ 73.81±8.42★☆ 45.16±1.81★☆

3 讨 论

大承气汤治疗SAP的疗效已在临床得到证实并广泛应用,但其确切机制至今尚不明确。大承气汤为临床经验方制剂,主要由柴胡、大黄、芒硝、枳实等组成,具有通里攻下、清热解毒、活血化淤之功效。柴胡、枳实可促使胃排空,枳实、厚朴增加小肠蠕动,芒硝有清热泻下之功效,可以降低肠管压力,协助大黄通腑泄浊。生大黄促使结肠蠕动,改善胃肠黏膜微循环,降低血清和小肠组织肿瘤坏死因子、磷脂酶A2和血小板激活因子(PAF)的含量,从而减轻上述介质引发的其他炎症介质的释放和炎症反应[3]。本实验发现,SAP大鼠分别经大承气汤治疗、乌司他丁治疗和大承气汤+乌司他丁治疗24 h后,大鼠血清、肺组织和回肠末端组织的内毒素水平明显降低,与陈海龙等[4]和王春妍等[5]研究相似,表明大承气汤具有减少内毒素的生成和吸收、加快灭活和排泄等作用,并因此减轻内毒素引起的全身炎性反应综合征和急性肺损伤以及内毒素引起的肠黏膜屏障的损害。本研究还发现,SAP大鼠应用大承气汤治疗后血浆、肺和回肠组织的IL-6水平明显下降,与乌司他丁治疗结果相似,但大承气汤结合乌司他丁治疗IL-6水平较单独应用乌司他丁或大承气汤明显下降,提示二者对治疗SAP大鼠有相加或者协同作用。IL-6是炎症反应中一个非常重要的因子,可以作为促炎因子引起炎症反应的一系列连锁反应和放大效应,导致全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)和多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)的发生。最近的研究显示,IL-6在SAP的发病中起重要作用,其升高的幅度与SAP的严重程度密切相关,发病后24 h内检测血浆IL-6含量预测SAP是目前早期评价SAP严重程度的较好指标[6]。实验还发现,经大承气汤、乌司他丁和大承气汤+乌司他丁分别治疗后,大鼠血浆、肺和回肠组织中的抑炎因子IL-10的水平明显升高,与吕冠华等[7]研究结果相一致,表明大承气汤具有双重调节作用,即具有降低致炎因子IL-6和内毒素和提高抑炎因子IL-10的双向作用,提示大承气汤可能是通过参与炎症反应的调控而发挥治疗SAP的作用的。何俊等[8]研究也发现,应用生长抑素联合柴芍承气汤鼻饲和生大黄灌肠治疗SAP,可更快改善患者腹痛、腹胀症状,恢复心率、呼吸,降低死亡率。由于大承气汤的成分不是很单一,加上SAP的发病机制复杂,调控炎症反应可能只是大承气汤治疗SAP一条比较重要的途径。

[1] Frossard JL,Pastor CM.Experimental acute pancreatitis:new insights into the pathophysiology[J].Front Biosci,2002,7(1):257.

[2] Tulzo YL,Shenkar R,Kancko D,et a1.Hemorrhage increase cytokine expression in lung mononuclear cells in mice[J].Clin Invest,1997,99(7):1516.

[3] 刘峰,高士杰,胡慧刚,等.大黄治疗休克后胃肠功能障碍的研究[J].中国急救医学,2003,23(1):38.

[4] 陈海龙,吴咸中,关凤林,等.大承气汤对 MODS时肠道细菌微生态学影响的实验研究[J].中国微生态学杂志,2007,19(2):132.

[5] 王春妍,杨世忠,迟宝荣.大承气汤对急性肝损伤大鼠肠源性内毒素血症生物学效应的阻断作用[J].中西医结合肝病杂志,2006,16(6):356.

[6] Garg PK,Prasad H,Tandon RK.Elevated level of interleukin-6 predicts organ failure and severe disease in patients with acute pancreatitis[J].J Gastroenterol Hepatol,2007,22(4):550.

[7] 吕冠华,王长洪,王立新,等.大承气汤对重症急性胰腺炎大鼠细胞因子及外周血γ δ T细胞的影响[J].中国中西医结合消化杂志,2008,16(6):355.

[8] 何俊,何庆玲,陈忠华,等.生长抑素联合柴芍承气汤鼻饲和生大黄灌肠治疗重症急性胰腺炎50例分析[J].重庆医学,2008,37(22):2603.

Effects of Dachengqi Decoction on rats with severe acute pancreatitis

T ANGJ in1,SONG Meng-long1,CHENG Fei1,et al.

(Departmentof Oncology,Second Af f iliated Hospital,Chongqing Medical University,Chongqing400010,China)

ObjectiveTo observe the effects of Dachengqi Decoction on rats with severe acute pancreatitis(SAP).MethodsFifty Wistar rats were randomly divided into sham operation group(A group),SAP group(B group),SAP+ulinastatin group(C group),SAP+Dachengqi Decoction group(D group)and SAP+Dachengqi Decoction+ulinastatin group(E group).SAP was induced by retrograde injection of 5%sodium taurocholate,the levels of IL-6,IL-10 and ET from lung,ileum and blood plasma were detected after 24 h since SAP induced.ResultsThe levels of IL-6 and ET of lung,ileum and blood plasma in SAP+ulinastatin group,SAP+Dachengqi Decoction group,SAP+Dachengqi Decoction+ulinastatin group decreased significantly than that in SAP group(P＜0.05),and they were significantly lower in the SAP+Dachengqi Decoction+ulinastatin group compared with other two group(P＜0.05);but the levels of IL-10 increased significantly(P＜0.05).ConclusionDachengqi Decoction could affect inflammatory reaction of SAP by reducing proinflammatory factors of ET and IL-6 and increasing anti-inflammatory factor of IL-10.Dachengqi Decoction and ulinastatin have additive or synergetic effects on anti-inflammatory action in rats with SAP.

severe acute pancreatitis;Dachengqi Decoction;inflammatory factor

R365.576

A

1671-8348(2010)09-1051-02

2009-10-19

2009-11-12)

◦论 著◦