GC测定莪术残油中莪术醇、吉马酮和莪术二酮的含量

刘姝畅， 孙艳涛， 李 想， 张振秋

(辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600)

莪术为姜科植物蓬莪术(Curcuma phaeocaulis Valeton)、广西莪术(C.kwangsinensis S.G.Lee et C.F.Liang)和温莪术(C.wenyujin Y.H.Chen et C.Ling)的干燥根茎，具行气破血、消积止痛的功效，始载于《唐本草》［1］。莪术油具有抗癌、抗菌、抗病毒、抗癫痫等活性。莪术油的抗肿瘤作用已被药理实验和临床应用所证实［2－4］，本文采用GC，对10批次莪术残油样品进行分析，并建立以毛细管气相色谱法测定莪术残油中莪术醇、吉马酮和莪术二酮含量的方法，为莪术残油的应用奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 HP－5气相色谱仪(Agilent Technologies 6890N);FID检测器;METTLER AB135－S十万分之一电子天平(瑞士)

1.2 试药 购得市售莪术残油10批，样品编号依次为批1－10。莪术醇对照品(购于中国药品生物制品检定所，批号:100185－200506);吉马酮对照品(购于天津奎青商贸有限公司);莪术二酮对照品(购于上海沪云医药开发有限公司，批号:13657－68－6)。水杨酸甲酯对照品(购于中国药品生物制品检定所，批号:110707－200710)。甲醇(天津市科密欧化学试剂有限公司，色谱纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 HP－5(0.32 mm×30 m)石英弹性毛细管柱，5%苯基甲聚硅氧烷为固定相;程序升温:柱初始温度为100℃，以4℃/min升至140℃，以13℃/min升至170℃，保持8 min，以5℃/min升至200℃;氢火焰检测器(FID)280℃，进样口温度250℃;载气为高纯度氮(纯度 ＞99.999%);前柱压 42 kPa，载气流速 1 mL/min，进样量4 μL，不分流进样。

2.2 内标物溶液的制备 精密称取水杨酸甲酯适量，加甲醇溶解并稀释制成3.971 mg/mL的溶液，即得。

图1 对照品(A)、样品(B)的GC图谱

2.3 对照品贮备液的制备 精密称取莪术醇、吉马酮和莪术二酮适量，加甲醇溶解并稀释成分别含5.489、5.725和2.715 mg/mL的溶液，即得。

2.4 供试品溶液的制备 称取莪术残油约0.5 g，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加内标液稀释至刻度，摇匀，即得。

2.5 线性关系考察 精密吸取莪术醇对照品贮备液10 mL，吉马酮对照品贮备液2 mL，和莪术二酮对照品贮备液10 mL，置同一25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，滤液作为混合对照品母液。再分别精密吸取母液1、2、3、4、5 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密量取不同浓度的混合对照品溶液5 mL，置10 mL量瓶中，加内标液稀释至刻度，即得。分别进样5 μL，以进样量(μg)为横坐标(X)，峰面积比值(对照品/水杨酸甲酯)为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表1。

表1 线性关系结果

2.6 精密度考察 取批10号样品，按2.4项下方法制备，连续进样5次，每次4 μL，不分流进样，计算各组分与内标峰面积比值的RSD。莪术醇、吉马酮和莪术二酮的RSD分别为1.8%、1.7%、1.2%，精密度良好。

2.7 稳定性考察 取批10号样品，按2.4项下方法制备，分别于 0、2、4、8、10 h 各进样 4 μL，不分流进样，计算各组分与内标峰面积比值的RSD。莪术醇、吉马酮和莪术二酮的RSD分别为2.2%、1.7%、1.6%，表明样品在10 h内稳定。

2.8 重复性考察 取批10号样品5份，按2.4项下方法制备，分别进样4 μL，不分流进样，计算各组分含量的RSD。RSD分别为2.2%、1.8%、1.4%，重复性良好。

2.9 加样回收率 取已知含量的样品5份莪术醇(47.33 mg/g)、吉马酮(5.30 mg/g)和莪术二酮(15.73 mg/g)，每份约0.1 g，置25 mL量瓶中，各精密加入莪术醇对照品贮备液0.9 mL、吉马酮对照品贮备液0.1 mL和莪术二酮对照品贮备液0.6 mL，按2.4项下方法测定，计算加样回收率。结果莪术醇、吉马酮和莪术二酮的加样回收率分别为99.0%、100.3%、99.2%;RSD分别为1.0%、1.4%、2.2%。

2.10 样品测定 分别取不同批号莪术残油，按2.4项下方法制备，按上述色谱条件测定各样品莪术残油中莪术醇、吉马酮、莪术二酮的含量，结果见表2。

表2 样品测定结果(mg/g，n=3)

3 讨论

3.1 莪术残油为莪术油提取β－榄香烯后的残余物质。本实验对β－榄香烯成分也进行了考察，部分批号能检测出但含量很低，部分批号未检测出，故不作为测定指标。

3.2 不同批号的莪术残油中3种成分的含量差异不显著，说明莪术残油质量相对稳定。

3.3 莪术二酮遇热不稳定，加热后互变异构为一烯醇式中间体，同时发生两个σ－键的迁移和一个氢原子的1，3－迁移而形成了莪术醇，相同条件下，莪术醇不能转化为莪术二酮。测定莪术残油中莪术二酮含量低于莪术油中含量，而莪术醇含量则高于莪术油中含量，分析此结果可能由于莪术油经高温加热提取β－榄香烯过程中部分莪术二酮转化成莪术醇。

3.4 在GC测定过程中，对汽化室和柱温箱的温度进行了考察，温度过高不仅影响柱子的使用寿命，还影响莪术油中指标性成分的检测。经摸索汽化室温度确定为250℃，柱温箱温度确定为200℃，莪术残油中指标性成分能达到很好的分离并均能被检测出。

［1］中国药典2005年版［S］一部.2005:194.

［2］丁玉玲，徐爱秀.莪术油及其有效组分抗肿瘤研究［J］.中药材，2005，28(2):152－155.

［3］黄亚东，项 琪.莪术油喷雾剂的研制及抗病毒作用的实验研究［J］.中药材，2007，30(3):342－345.

［4］杨 威，张树和.毛细管气相色谱法测定莪术油中吉马酮和β－榄香烯的含量［J］.沈阳药科大学学报，2006，23(12):785－787.

［5］朱亚尔，朱晓平.毛细管气相色谱法测定莪术中莪术醇的含量［J］.中国中药杂志，2006，31(5):389－390.