ＣＸＣＬ１６与动脉粥样硬化的关系研究

吕永青　卜培莉

【摘要】 目的 探讨CXCL16与动脉粥样硬化的关系。

方法 对所有参与者进行颈动脉超声检查，分为颈动脉斑块组和健康组，同时经隔夜禁食后，次日清晨抽取肘静脉抗凝血5 ml，分离单个核细胞，采用实时定量RT-PCR方法检测外周血单个核细胞CXCL16及其受体CXCR6基因表达情况。结果 颈动脉斑块组比健康组CXCL16及其受体CXCR6基因表达水平(△Ct26.85±5.04,21.77±4.02;25.30±7.00,20.00±4.48)显著增高（P<0.001） 。结论 CXCL16是动脉硬化发生的危险因子。

【关键词】动脉粥样硬化；CXCL16

To research the relationship between CXCL16 and atherosclerosis

LV Yong-qing,BU Pei-li.Changhong Hospital in Jinan,Shandong 250063,China

【Abstract】 Objective To research the relationship between CXCL16 and atherosclerosis.

Methods In this study,we recruited 60 consecutive subjects with 30 carotid arteries plaque and 30 age-and-sex-matched normal subjects,fasting blood sample was collected from each subjects after 12-14 hours fast.Monocytes in the peripheral blood were isolated，the expression of cxcl16/cxcr6 mRNA were compared using RT-PCR，with beta-actin as internal control.Results The expression of cxcl16/cxcr6 mRNA in the monocytes was significantly higher in plaque patients than in normal subjects(P<0.001）.Conclusion Cxcl16 is a dangerous factor in atherosclerosis.

【Key words】Atherosclerosis; CXCL16

目前研究认为，动脉粥样硬化是一种炎症性疾病，炎症反应在动脉粥样硬化的发生发展中起到非常重要的作用［1］。 而趋化因子是联系炎症及动脉硬化的枢纽［2］。

除了脂质沉浸和血管平滑肌细胞增殖，单核细胞和T淋巴细胞浸润也是动脉粥样硬化斑块形成各个阶段的重要特征，单个核细胞持续的募集到血管壁是动脉硬化形成的关键步骤，越来越多的证据表明［3］趋化因子参与了此过程，并通过激活和引导免疫细胞到达动脉硬化斑块，而发挥其作用。

本研究应用高分辨率外周血管超声技术,检测颈动脉结构和功能的改变。同时应用实时定量RT-PCR方法检测外周血单个核细胞CXCL16及其受体CXCR6基因表达情况。 以期发现CXCL16与动脉硬化的关系。

1 材料和方法

1.1 研究对象 本研究所有参与者均来自本院门诊及住院患者，选取60例进行病例对照研究。其中30例均经颈部超声检查有斑块，30例健康人为对照组(无高血压、糖尿病、腹型肥胖、血脂紊乱及其他炎性反应、免疫性疾病)。两组性别和年龄差异均无统计学意义(P>0.05)。

1.2 主要仪器 ①GE ViVid7彩超:美国通用电气公司生产；

②PCR核酸扩增仪：GeneAmp PCR System9700型，美国ABI公司产品，山东大学心血管病研究中心提供；

③高速离心机：TGL-16型，上海安亭科学仪器厂生产，山东大学心血管病研究中心提供；④ABI 7500 RT-PCR仪：山东大学心血管病研究中心提供。

1.3 主要试剂 ①淋巴细胞分离液；②白细胞裂解液；③TriZOL；④氯仿；⑤异丙醇。

1.4 研究方法

1.4.1 颈动脉超声检查 受检者取仰卧位，颈下垫薄枕，头部偏向检查对侧，充分暴露颈部，依次检查右侧和左侧颈动脉,记录颈动脉长轴和短轴图像，观察颈动脉内膜是否光滑、有无增厚、斑块部位、斑块大小和回声特点。

1.4.2 颈动脉超声测量指标 ①颈动脉内径； ②颈动脉IMT；③斑块指数(plaqueindex)。

1.4.3 外周血单个核细胞的分离 取抗凝血约5 ml，用生理盐水稀释1倍，将稀释后的血液沿管壁加于淋巴细胞分离液上，避免血液冲入分离液，稀释血与分离液的柱高之比为3∶2~2∶1，然后置于水平离心机，2 500转/min×25 min,离心后，将试管中的第二层白膜层，用管口细而平的毛细吸管轻轻插入，吸出置于离心管中，加5倍体积的生理盐水于离心管中，离心，2 000转/min×10 min,弃上清，用生理盐水重悬细胞，与上相同离心2次，弃上清，将管底细胞摇匀，-80℃保存备用。

1.4.4 RT-PCR 将每个装有PBMC的EP管加入1 ml白细胞裂解液，混匀，加200 μl氯仿颠倒混匀，离心，12 000转/min×10 min，缓慢吸上清至一新EP管，再加等体积异丙醇颠倒混匀，离心，15 000转/min×10 min，去上清，加入1 ml无水乙醇，离心，15 000转/min×10 min，按RNA量溶解，0.5~1.0 μg/ml,然后，分别加入相关试剂，进入RT和PCR反应体系。按软件程序进行分析，得出相关的△Ct值。

1.5 统计学方法 计量资料用均数±标准差 (x±s)表示，两组间参数比较采用两组独立样本资料的t检验 。采用SPSS 16.0 软件包进行统计处理，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对照组与斑块组颈动脉超声指标的比较 与对照组相比，斑块组平均IMT、最大IMT、Ds、Dd、斑块指数明显升高 (P<0.001)(表1)。

2.2 对照组与斑块组外周血PBMC CXCL16及其受体CXCR6基因表达情况的比较; 与对照组相比，斑块组CXCL16及其受体CXCR6基因表达水平差异有统计学意义(P<0.001)。(表2)。

3 讨论

趋化因子是一组具有趋化作用的细胞因子，能吸引免疫细胞到达免疫应答局部，参与免疫调节和免疫病理反应。CXCL16是近年在人的动脉硬化损伤部位的巨噬细胞中发现的一种趋化因子，同时也是一种膜结合蛋白［8］。CXCL16在T细胞的迁移中起重要作用［4］。血管内皮细胞同时表达功能性地分泌型CXCL16和膜结合性CXCL16分子［9］，分泌型CXCL16参与激活T淋巴细胞趋化，膜结合型CXCL16作为粘附分子，通过它的趋化因子活性区参与活化T淋巴细胞与血管内皮细胞之间的识别和直接黏附，促进大量的特异性炎性细胞浸润。趋化因子通过与相应受体结合而发挥作用。目前已知的趋化因子受体中只有CXCR6对CXCL16配体发生功能性应答，是CXCL16的惟一受体［5］。其主要在T细胞、B细胞、NKT细胞及DC中表达，趋化试验显示，只有高表达Cxcr6的细胞才能发生对CXCL16的趋化应答［10］。

CXCL16/SR-PSOX参与了AS斑块形成的炎性反应和免疫学说，可能在人类动脉粥样硬化性疾病中发挥前炎症因子的作用，归结起来可能有3个方面的病理生理功］：①结合并吞噬ox-LDL,参与了AS细胞内脂质聚集,促进巨噬细胞和平滑肌细胞形成泡沫细胞；②强烈趋化激活CD8+T细胞。有学者推测，CD8+T细胞的激活会导致AS斑块部位细胞的调亡，杀伤平滑肌细胞；促使效应性T细胞定向迁移至AS病变处，这是在动脉硬化前炎性反应发展中的重要一步；③作为血管源性因子，CXCL16/SR-PSOX可以显著诱导血管形成，可能促进斑块的发生、发展，甚至诱发斑块出血和斑块破裂，成为在动脉硬化性疾病中的核心事件。

Minami等对动脉粥样硬变和无病变动脉进行CXCL16/SR-PSOX mRNA检测,发现CXCL16/SR-PSOX mRNA高度表达在粥样硬化斑块内,而在正常动脉内膜未检出其表达,免疫组化也显示CXCL16/SR-PS/X显著表达于粥样硬化斑块的血管内膜巨噬细胞上；以高脂饮食喂养的敲除ApoE鼠的斑块病变处也有CXCL16/SR-PSOX大量存在。另外研究表明，干扰素-γ、激活的T细胞产生的细胞因子上调CXCL16/SR-PSOX，已证实CXCL16/SR-PSOX在AS斑块的免疫炎症反应中起正反馈作用。

本研究对颈动脉粥样硬化斑块组与健康人进行了颈动脉结构的超声检查，发现斑块组颈动脉结构发生了显著的变化，表现为IMT增厚、斑块指数增大、管径扩大。同时对其外周血单个核细胞CXCL16、Cxcr6 mRNA的表达水平进行了检测，发现颈动脉斑块组比健康组CXCL16及其受体Cxcr6基因表达水平显著增高（P<0.001）。

总之,CXCL16在动脉粥样硬化中的作用毋庸置疑,但确切的生理功能还有待进一步研究,努力探索CXCL16的功能和发病机制,在动脉硬化性疾病的防治中可能具有重要意义。

参考文献

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