枸杞多糖与丹参酮延缓小鼠皮肤衰老的实验研究

梁　杰　李　响

【摘要】 目的 比较枸杞多糖与丹参酮对衰老小鼠皮肤的抗衰老作用。方法 60只雌性昆明种小鼠，随机分为4组(n=15)：正常对照组皮下注射生理盐水；其余3组每日颈背部皮下注射 D-半乳糖［1000 mg/(kg•d)］ 造成小鼠衰老模型，同时各组分别灌胃生理盐水(衰老模型组)、枸杞多糖［200 mg/(kg•d)］、丹参酮［1 500 mg/(kg•d)］。42 d后，测定小鼠背部皮肤组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活力、过氧化脂质代谢产物丙二醛(MDA)含量和皮肤羟脯氨酸(Hyp)含量。结果 枸杞多糖可使衰老模型小鼠皮肤中MDA含量显著降低,较丹参酮组明显； 但SOD活力显著升高,不及丹参酮组改变显著；枸杞多糖和丹参酮均可使羟脯氨酸含量升高，且效果相当。结论 枸杞多糖与丹参酮都有显著的抗小鼠皮肤衰老作用，枸杞多糖清除皮肤中脂质过氧化代谢产物方面较丹参酮明显,而提高皮肤抗氧化酶活力则不及丹参酮显著，在增强成纤维细胞活性方面两者效果相当。

【关键词】皮肤衰老；枸杞多糖；丹参酮

Experimental research on the skin aging function of tanshinoneand lycium barbarum polysaccharides

LIANG Jie，LI Xiang.Department of Plastic Surgery，Affiliated Hospital of Guangdong Medical College,Zhanjiang,Guangdong 524001，China

【Abstract】 Objective To compare the anti-aging effects of Lycium barbarum polysaccharides and Tanshinone on the skin of D-galactose-induced mice aging model．Methods 60 female mice were randomly divided into 4 groups (n=15):Mice in normal control group received subcutaneous injection of normal saline and mice in the other 3 groups received cervicodorsal injection of D-galactose［1000 mg/(kg1•d)］ for 42 d to establish subacute aging model.The experimental groups included agingmodel group (without further treatment)，Lycium barbarum polysaccharides ［200 mg／(kg•d)group，Tanshinone ［1 500 mg／(kg•d)］ group．Forty two days later，the dorsal skin samples were collected to determine SOD activities、MDA and hydroxyproline contents． Results The effect of Lycium barbarum polysaccharides isbetter than Tanshinone significantly in decrease the content of MDA，but in increase the SOD activity Tanshinone have better effection.Both of them can increaseing the hydroxyproline contents，but these is no different.Conclusion Both Lycium barbarum polysaccharides and Tanshinone have noticeable anti-skin aging effects，Lycium barbarum polysaccharides is better than Tanshinone in clearing skin lipid peroxidation metabolites aspects，but Tanshinone have better effection in enhancing Oxidase activity，they have no different effection in enhanceing fibroblasts.

【Key words】Skin aging；Lycium barbarum polysaccharides；Tanshinone

当今社会由于老龄化的加速到来以及人们对美的强烈追求，希望借助医学手段延缓衰老，永保青春。枸杞为茄科植物枸杞成熟果实，明朝李时珍在《本草纲目》中记载：枸杞有“久服，坚筋骨，轻身不老，……，令人长寿” 等功效。枸杞多糖(lycium barbarumpoysaccharides，LBP) 是枸杞子的主要活性成分之一，有抗氧化延缓皮肤衰老的作用。丹参酮是唇形科植物(salvia miltorrhiza Bge)的有效成分，有明显抗衰老作用［1］。笔者在D-半乳糖所致小鼠衰老模型基础上分别灌服枸杞多糖或丹参酮，比较二者对衰老小鼠皮肤中某些抗衰老指标的影响。

1 材料与方法

1.1 动物 3月龄清洁级雌性昆明种小鼠60只，平均体质量(25±2) g购自广东医学院实验动

物中心，随机分为4组，正常对照组、D-半乳糖衰老模型组、枸杞多糖组、丹参酮组，每组15只。

1.2 方法

1.2.1 实验步骤 灌胃、皮下注射均按无菌操作进行。42 d 后，小鼠断颈处死，背部皮肤取下后迅速冰冻保存，拟作皮肤组织匀浆及测定皮肤抗衰老指标用。正常对照组：每日颈背部皮下注射生理盐水0．2 ml，同时灌服生理盐水(0．1 ml /10 g)；D-半乳糖(衰老模型)组：每日颈背部皮下注射D-半乳糖［1000 mg/（kg•d）］，同时灌服生理盐水(0.1 ml / 10 g)；枸杞多糖组：每日颈背部皮下注射D-半乳糖［(1000 mg/（kg•d)］，同时灌服枸杞多糖［200 mg/（kg• d)］； 丹参酮组：每日颈背部皮下注射D-半乳糖［1000 mg/（kg•d)］，同时灌服丹参酮 ［1 500 mg/（kg•d)］。

1.2.2 10%皮肤匀浆的制备 取脱毛后背部皮肤组织0.5 g左右，经预冷生理盐水漂洗，除去皮下脂肪和其他结缔组织，滤纸拭干，称重，量筒量取该组织块9倍重量预冷生理盐水，先取2/3量倒入装有组织块烧杯中，剪碎组织块后倒入匀浆管中，将剩余1/3生理盐水冲洗烧杯壁，一起倒入匀浆器中进行匀浆，上下转动研磨数10次(10~15 min)，充分研磨，使组织浆液化。再将制备好的10%匀浆用低温低速离心机以转速3000转/min离心15 min，取上清液备用。

1.2.3 皮肤SOD活力测定 参照南京建成生物工程公司SOD试剂盒说明书方法测定SOD活力，单位以U/ ml表示。

1.2.4 皮肤MDA含量测定 硫代巴比妥酸（TBA）法测定MDA含量［2］。

组织中MDA (μmol/g) = (测定管吸光度-测定空白管吸光度)/(标准管吸光度-标准空白管吸光度)×标准品浓度(10 μmol/L)/蛋白含量(g / L)

1.2.5 皮肤羟脯氨酸含量测定参见文献［3］。

1.3 统计学方法 采用SPSS 11.0统计分析软件，计量资料均以均数±标准差x±s表示，多个样本均数的比较用方差齐性检验，当总体方差齐同时选择LDS法分析；方差不齐时选择Dunnet C法分析。P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

小鼠皮肤SOD活力及MDA含量检测结果见表1。小鼠皮下注射D-半乳糖42 d后皮肤SOD活力较正常对照组显著降低(P<0.01)，MDA含量较正常对照组显著升高(P<0.01)，提示造模成功；与半乳糖组相比，枸杞多糖组和丹参酮组小鼠皮肤组织匀浆中SOD含量均明显升高，丹参酮组升高尤为明显(P<0.01)，超过正常组水平，提示丹参酮可明显增强皮肤抗氧化和清除自由基的能力，其作用较枸杞多糖显著；两组小鼠皮肤组织匀浆中MDA含量较D-半乳糖组显著降低，且枸杞多糖组降低较丹参酮组更为显著(P<0.01)，提示枸杞多糖清除过氧化脂质(LPO)能力较VE更强；两组小鼠皮肤组织匀浆中Hyp含量均明显升高，且两组之间没有统计学意义(P>0.05)，说明枸杞多糖和丹参酮均能增强成纤维细胞活性，促进皮肤胶原蛋白合成。

3 讨论

皮肤是最早反应机体衰老的组织，已经引起众多学者对皮肤皱纹、弹性及营养变化等的防治研究［4］，因此预防和延缓皮肤衰老已成为医学和美容的研究热点［5］。本实验结果证实，枸杞多糖和丹参酮均有显著的抗皮肤衰老作用，但枸杞多糖提高D-半乳糖所致衰老模型小鼠皮肤中SOD活力作用不及丹参酮显著。SOD作为体内天然的抗氧化酶之一，有清除自由基的作用，其活力的提高有益于机体抗氧化能力的［6，7］，其机制可能为丹参酮有明显扩张小血管、抑制血小板聚集、降低血粘度、改善微循环的作用,从而使毛细血管网开放,血流加速,动脉血氧分压和血氧饱和度升高,组织新陈代谢增强,ATP合成增加,促进抗氧化酶类合成,皮肤中SOD活力增强,提高细胞清除H₂O₂和-O₂能力,保护细胞免受自由基损伤,而延缓衰老进程；丹参酮又有Ca²⁺拮抗剂作用,可阻止Ca²⁺进入细胞内,抑制黄嘌呤脱氢酶向黄嘌呤氧化酶转变,减少自由基产生；另外,丹参酮又有轻微雌激素作用,对皮肤衰老亦有改善作用。枸杞多糖降低D-半乳糖所致衰老模型小鼠皮肤中MDA含量作用却较丹参酮显著，其机制可能为枸杞多糖有很强的抗氧化作用，能保护细胞内抗氧化酶类活性，从而阻止多价不饱和脂肪酸的过氧化反应，抑制过氧化脂质生成，维持生物膜正常脂质结构和生理功能而发挥抗衰老作用。枸杞多糖和丹参酮均可使成纤维细胞活性增强,胶原蛋白合成增加,而延缓衰老进程。总之，枸杞多糖和丹参酮均有显著抗皮肤衰老作用,但二者侧重点不同。

参考文献

［1］ 王红丽,吴铁,陈垦，等．丹参酮抗D-半乳糖所致小鼠皮肤衰老作用.中国医院药学杂志，2005，25(2):130-132.

［2］ 梁杰,张陈威,李建赤,等．小鼠皮肤超氧化物歧化酶活性与枸杞多糖的干预．中国组织工程研究与临床康复，2007,11(36):7207-7210.

［3］ 徐叔云,陈修.药理实验方法学.人民卫生出版社,2002：1464.

［4］ Li SP，Zhang GH，Zeng Q，et al．Hypoglycemic activity polysacohadde，with antioxidation，isolated from cultured Cordyceps mycelia．Phytomedicine,2006，13(6)：428-433.PMID:16716913.

［5］ Kagan VE，Kisin ER，Kawai K，et al.Toward mechanism-based antioxidant interventions:lessons from natural antioxidants.Ann N Y Acad Sci,2002,959:188-198.PMID:11976196.

［6］ Lin AD，Mannikarottu A，Kogan BA，et al．Effect of bilateral in vivo ischemia/ reperfusion on the activities of superoxide dismutase and catalase:response to a standardized grape suspension．Mol Cell Biochem，2007，296(1-2):11-16.PMID:17203243.

［7］ Li XM，Shi YH，Wang F，et al．In vitro free radical scavenging activities and effect of synthetic oligosaccharides on antioxidant enzymes and lipid peroxidation in aged mice．J Pharm Biomed Anal，2007,43(1):364-370.PMID:16876976.