干燥方式对银杏叶黄酮含量影响试验

苏定昌

摘要为探讨不同干燥方式对银杏植物中黄酮含量的影响,以高效液相色谱分析法测定以不同干燥方式处理后的银杏叶总黄酮醇苷含量。结果表明,以晒干、阴干、烘干和微波干燥处理后,银杏叶总黄酮含量分别为0.751%、0.849%、0.826%和0.884%,干燥方法以微波最好,阴干次之,晒干最差。直射光线对黄酮含量影响较大,在银杏采集加工中,应避免用晒干的方法处理。

关键词银杏叶;总黄酮;干燥方式;含量测定

中图分类号 S664.3 文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)14-0078-02

银杏(Ginkgo biloba)又名公孙树,属侏罗纪植物,被誉为植物界的“活化石”,是我国的特产植物,在湖北省恩施自治州种植十分广泛,据统计,截止2008年底,恩施州银杏实有面积已达9 053.2hm2,产量达2 218t。银杏树在用材、绿化环境方面作用巨大,银杏的种子又名白果,是传统的滋补药物和食物;其果、叶含有丰富的银杏双黄酮、异银杏双黄酮、去甲基银杏双黄酮及二萜内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C等,均可作药用,其中银杏叶中所含的槲皮素、山萘素、异鼠李素等黄酮化合物具有活血化淤、降低血脂、扩张脑血管、清除自由基和抗衰老等功效和作用,已广泛用于治疗冠心病、心绞痛、治疗老年痴呆症和增强记忆功能、防治皮肤病、脱发等多种疾病[1]。如何更好地开发利用银杏植物是当前生物化学研究中的一大热门,本研究采用高效液相色谱分析法测定以不同的干燥方式处理后银杏叶总黄酮醇苷含量,探讨银杏采集加工中直射光线对黄酮含量的影响。

1材料与方法

1.1材料和仪器

1.1.1材料。银杏叶于2008年6月下旬采于恩施州利川市团堡镇银杏基地内,分别采用晒干、阴干、烘干和微波干燥4种方法进行干燥处理。

1.1.2仪器。为美国PerKinElmer公司Series200高效液相色谱仪(包括Series200紫外检测器、Series200二元泵、600Series接口及色谱工作站)。

1.1.3供试药剂。槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品(中国药品生物制品检定所,批号分别为10081200406、110861200405、110860200407),甲醇(色谱纯,天津市科密欧化学试剂开发中心),磷酸(分析纯,天津市化学试剂一厂),水为饮用纯净水(杭州娃哈哈集团生产)。

1.2测定方法

1.2.1色谱条件。SymmetryC18色谱柱(4.6mm×250.0mm,5μm,美国Waters公司),流动相为甲醇∶0.4%磷酸水溶液(52∶48),流速1mL/min,检测波长370nm,柱温35℃,进样量20μL。

1.2.2溶液制备。①对照品溶液。精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素、山萘素、异鼠李素对照品适量(分别为15.6mg、17.0mg、10.0mg)置100mL量瓶中,加甲醇微热使溶解并稀释至刻度,摇匀,备用。②样品溶液。分别称取经4种方法进行干燥处理后的银杏样品各1.50g,60℃水浴回流提取8h,过滤,滤液定容分别至50mL,摇匀后各取lmL,置于10mL刻度试管中,用甲醇稀释至刻度,供分析用。

1.2.3标准曲线。分别精密量取对照品贮备液2mL、4mL、8 mL,置于100mL容量瓶中,充分混匀,用甲醇稀释至刻度,制成3份对照品溶液(浓度分别为槲皮素:12μg/mL、24μg/mL、48μg/mL;山柰酚:6μg/mL、12μg/mL、24μg/mL;异鼠李素:2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL),按上述色谱条件进样测定。以对照品浓度C(μg/mL)为横坐标,峰面积A为纵坐标,绘制标准曲线,得线性回归方程:

槲皮素:A=80 074C-52 255,r=0.999 4,线性范围为15.6~78.0μg/mL;山萘素:A=63 168C+35 558,r=0.998 2,线性范围为17.0~85.0μg/mL;异鼠李素:A=60 465C+20 840,r=0.999 6,线性范围为10.0~50.0μg/mL。范围内与各自的峰面积积分值呈良好线性关系。

1.2.4重复性试验。取样品溶液各3份作试品溶液,按上述色谱条件测得槲皮素、山萘素和异鼠李素的含量,按下式[2]换算成总黄酮醇苷的含量。

总黄酮醇苷=(槲皮素含量+山萘素含量+异鼠李素含量)×2.51。

1.2.5稳定性实验。取样品溶液,每隔1h按上述方法测定1次。结果含量分别为:0h为35.37%,1h为35.70%,2h为35.36%,4h为35.25%,5h为35.21%,6h为35.10%,标准偏差(RSD)为0.6%,结果表明样品溶液在6h内稳定。

2结果与分析

2.1流动性的选择及pH值对色谱分离的影响

银杏叶经酸水解后,含有3种主要黄酮甙元,由于黄酮甙元的酚羟基易于电离,组分峰拖尾,加入磷酸调整流动相pH值为2.5,组分峰的对称性良好,色谱图见图1。

2.2不同干燥方法对叶中银杏黄酮含量的影响

从表1可以看出,干燥方法以微波干燥最好,阴干次之,晒干最差,微波与晒干相比, 黄酮苷含量相1.33 mg/mL。

3结论与讨论

3.1测定银杏叶中黄酮化合物的方法

银杏叶中黄酮类物质主要有槲皮素(Quercetin,Q)、山萘酚(Kaempferal,K)和异鼠李素(Isorhamntein,I)3种,它们主要以葡萄糖、鼠李糖等结合而成的糖苷形式存在[2]。测定银杏叶中黄酮化合物的方法很多,如导数光谱法、近红外光谱法、分光光度法、示波极谱法、荧光光度法、库仑滴定法、毛细管电泳法和高效液相色谱法等[2]。本试验采用高效液相色谱法(HPLC)测定银杏叶中的槲皮素、山萘素、异鼠李素等黄酮化合物的含量,结果表明,采用上述方法对复方银杏叶片中主要活性成分槲皮素、山萘素、异鼠李素等黄酮化合物的含量进行测定,方法简便、结果准确、精确度高、分离效果良好。取对照品溶液和阴性对照溶液分别进行紫外扫描,在200~300nm两者均有较强吸收,在300~400nm阴性对照溶液吸收较小,在370nm波长下,这3种黄酮几乎有相同的定量因子f值(单位峰面积),相对误差不大于0.6%,故选择在370nm作为槲皮素、山萘素、异鼠李素的测定波长。试验过程中选择甲醇∶0.4%磷酸水溶液作为流动相,并对流动相组成比例进行选择,结果表明,各色谱峰分离度良好,峰型尖锐,保留时间适中。

3.2干燥方法的影响

银杏叶黄酮类化合物在受热时容易发生酚性氧化反应,从而使活性成分的含量降低,黄酮类化合物的物理化学变化在提取分离时已经开始,并延续至浓缩干燥过程。在银杏叶的采集加工中,干燥方法的选用非常重要,实验室常用的干燥方法有喷雾干燥、真空干燥、微波干燥、常压烘干等方法。其中,喷雾干燥因受热时间短,有效成分破坏较少,微波干燥利用高速旋转的水分子,达到加热的同时,也加速对苷类成分的水解,可减少黄酮损失[4]。这2种方法都是较先进的干燥方法。本试验结果也验证了这一点。但在生产实践中,大规模采集加工银杏叶选用喷雾干燥、真空干燥、微波干燥、常压烘干都不太现实,相比之下,以阴干和在60℃条件下烘干比较好。这是因为直射光线对黄酮含量影响较大,采集加工银杏叶应避免用晒干的方法,可采用阴干的方式处理。

4参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)(2005年版)[M].北京:化学工业出版社,2005.

[2] 沈洁,任世禾.复方银杏叶胶囊质量标准的研究[J].上海中医药杂志,2007,41(6):79.

[3] 傅亚,刘火安.银杏黄酮柱层析提取新工艺研究[J].四川食品与发酵,2005(3):45-47.

[4] 朱平华.银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究[J].化工生产与技术,2006,13(6):25-27.