不同产地连钱草药材中总黄酮成分含量测定

杨曦亮　肖玉秀

(1.武汉科技大学医学院，湖北 武汉 430065；2.武汉大学药学院，湖北 武汉 430072)お

摘 要：目的：建立连钱草药材中总黄酮成分含量的测定方法。方法：分光光度法。结果：7个湖北产地连钱草的总黄酮含量平均为64.78mg•g^-1，三个混淆品的总黄酮含量平均为34.37mg•g^-1。总黄酮含量的不同可在一定程度上区别连钱草和其混淆品。结论：连钱草的总黄酮含量与其栽培方式、采收时间密切相关；多数产地的连钱草与其混淆品相比，总黄酮含量显著增加，故总黄酮的含量测定可作为连钱草真伪鉴别的参考依据。

关键词：连钱草；分光光度法；黄酮；含量测定

中图分类号：R284文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）01-0021-03オ

连钱草Herba Glechomae，别名活血丹、铜钱草等，《中国药典》收载为唇形科植物活血丹Glechoma longituba(Nakai)Kupr的干燥地上部分，具有利湿通淋、清热解毒、散瘀消肿的功能^[1]，主治尿路感染、尿路结石、胃及十二指肠溃疡、黄疸性肝炎、肝胆结石等症，在治疗胆结石、跌打损伤及断肢再造方面有独特作用^[2-3]。我国连钱草资源极为丰富，除新疆、甘肃、青海、西藏以外其它各省均有连钱草分布^[4]。本实验^[5-7]测定了10种不同来源连钱草药材（7种湖北产地连钱草，3种连钱草的混淆品种）中总黄酮的含量，并进行了比较分析，为连钱草药材的质量控制提供了评价依据。

1 材料

1.1 仪器

UV-2101PC紫外可见分光光度计（日本岛津）；CQ250超声波清洗仪(上海超声波仪器厂)。

1.2 试药

芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号0080-9705）；亚硝酸钠(分析纯，太仓化工二厂，批号20001201)；三氯化铝（分析纯，中国金山区兴塔美兴化工厂，批号990829）；氢氧化钠（分析纯，威尔昆化学试剂有限公司上海华美药房经销，批号20020130）；连钱草样品见表1。

2 方法

2.1 对照品溶液的配制

精密称取120℃常压干燥至恒重的芦丁对照品0.0110g，置于100mL容量瓶中，用60mL 60%乙醇超声溶解（容量瓶密塞），放冷，用60％乙醇定容，得到0.11mg•mL^-1芦丁对照品溶液。

2.2 供试品溶液的配制

精密称取经干燥的连钱草粉末约0.5g，置100mL具塞容器中，精密加60mL 60%乙醇，密塞，称重，超声提取30min。放冷，密塞，再称重，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液即得供试品溶液。

3 结果与讨论

3.1 测定波长的选择^[7]

精密称取芦丁对照品5mg，置于25mL容量瓶中，加60%乙醇约15mL，超声使其溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀，得芦丁标准溶液（0.2mg•mL^-1）。精密吸取芦丁标准溶液8mL，置于25mL容量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，放置6min，加三氯化铝试液1mL，摇匀，放置6min，再加5%的氢氧化钠10mL，加水至刻度，摇匀，于波长200~800nm范围内扫描，发现在510nm处有一最大吸收峰。精密称取2g连钱草粗粉，置于具塞锥形瓶中，加50mL 60%乙醇，超声50min，过滤，取续滤液，不显色，直接于波长200~800nm范围内扫描；再取续滤液1mL，照对照品芦丁一样显色后，于波长200~800nm范围内扫描，发现在504nm处有一最大吸收峰。见图1。

3.2 标准曲线

精密量取芦丁对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、7.0mL，置于10mL容量瓶中，分别加入60%乙醇使成7mL，精密加入5%亚硝酸钠0.3mL，摇匀，放置6min；精密加入10%三氯化铝0.3mL，摇匀，放置6min；加入1mol/L的氢氧化钠2mL，用60%乙醇定容，摇匀，以不加芦丁对照品溶液其它同法操作得到的溶液作为空白对照，在504nm处测定吸光度。求得回归方程为：C(mg•mL^-1)=0.075215A+0.001532(r=0.9996，n=6)；芦丁对照品在0.01~0.07mg•mL^-1范围内呈良好的线性关系。

3.3 精密度实验

取芦丁对照品溶液适量，配成高、中、低三个浓度，每个浓度3份，分别显色后测定吸收度。结果表明，测定方法的精密度良好（表2）。

3.4 稳定性试验

取对照品溶液3.0mL，进行显色，每隔5min测定一次吸收度，共测定至40min，计算总黄酮的平均含量为0.0297mg•mL^-1，RSD=0.96%(n=9)，结果表明显色后的溶液在40min内稳定。

3.5 重复性试验

取同一产地（湖北武汉）的连钱草粉末5份，每份约0.5g，精密称定，按“2.2供试品溶液配制”项下的方法提取。精密量取供试品溶液0.5mL，显色后测定吸收度，测得总黄酮的平均含量为56.67mg•g^-1，RSD=0.68%(n=5)，结果表明该方法重复性良好。

3.6 加样回收率试验

取3批已知总黄酮含量的连钱草粉末（恩施）约0.1g，加入芦丁对照品适量，精密称定，按“2.2供试品溶液配制” 项下的方法提取。精密量取供试品溶液1mL，按“3.2”项下方法测定总黄酮的含量，结果见表3。实验结果表明，该测定方法准确性高。

3.7 不同产地连钱草中总黄酮含量测定

取不同产地的连钱草约5g，按“2.2供试品溶液配制”项下的方法提取。精密吸取供试品溶液0.5mL，按“3.2”项下方法测定不同产地连钱草中总黄酮的含量，结果见表4。

从表4可知，除荆州2外，湖北产地连钱草的总黄酮含量均高于连钱草混淆品种的总黄酮含量；7个湖北产地连钱草的总黄酮含量平均为64.78mg•g^-1，三个混淆品的总黄酮含量平均为34.37mg•g^-1。总黄酮含量的不同可在一定程度上区别连钱草和其混淆品。

两种湖北荆州连钱草的产地相同，栽培方式和采收时间不同（家种，5月；野生，8月），但在7个湖北产地连钱草中，荆州1(92.85mg•g^-1)总黄酮含量最高，而荆州2（36.35mg•g^-1）最低。两个采收时间不同（5月，9月）的湖北恩施野生连钱草中总黄酮含量也有较大差异。除武汉和丹江产地连钱草的总黄酮含量比较接近外，其它湖北产地连钱草的总黄酮含量都有一定差异。这说明栽培方式、采收时间和湖北省内不同地区的生长环境均影响连钱草的总黄酮含量。

4 结论

七种湖北产地连钱草的总黄酮含量差异较大。连钱草的总黄酮含量不仅与栽培方式、采收时间密切相关，而且湖北省内不同地区的生长环境对连钱草的总黄酮含量也有影响。 因此在选用连钱草时一定要注意具体产地和用量，以确保疗效；同时要合理栽培、采收连钱草。多数产地的连钱草与其混淆品相比，总黄酮含量显著增加，故总黄酮的含量测定可作为连钱草真伪鉴别的参考依据，对保证其药材质量、指导其栽培生产，以及相关制剂产品的质量控制具有重要意义和应用价值。

参考文献：

［1］ 国家药典委员会.中国药典（一部）［M］.北京:化学工业出版社，2005：117.

［2］ 曾细生.用连钱草断指(肢)再植30例［J］.中国中医药科技，2004,11（2）:125.

［3］ 曹萍,褚小兰,范崔生.金钱草类中药的研究概论［J］.江西医学院学报，2005，45（1）：110-113.

［4］ 宋•唐慎微.证类本草［M］.北京：华夏出版社,1993：265.

［5］ 祝德秋,罗启剑,崔岚.分光光度法测定连钱草中熊果酸的含量［J］.药学服务与研究,2003,3(4):268-269.

［6］ 王庆，段金庆，钱大玮.不同产地连钱草中三菇酸类及黄酮类成分的分析与评价［J］.南京中医药大学学报，2006，2（1）：44-46.

［7］ 祝德秋,罗启剑,崔岚.连钱草中总黄酮的含量测定［J］.药学服务与研究，2003,3(1):62-63.（责任编辑：姜付平）