国标滤膜法检验桶装饮用水中铜绿假单胞菌的关键控制点及预防措施研究

摘 要：国标滤膜法是指《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》（GB 8538—2022）中提出的饮用天然矿泉水中铜绿假单胞菌的检验方法。该方法具有操作简便、结果可靠等特点，被广泛应用于各类水的铜绿假单胞菌检验。本文分析国标滤膜法检验桶装饮用水中铜绿假单胞菌的关键控制点，并提出有效的预防措施，以显著降低桶装饮用水中铜绿假单胞菌的污染风险，保障人们的饮水安全。

关键词：国际滤膜法；桶装饮用水；铜绿假单胞菌；关键控制点；预防措施

Study on the Critical Control Points and Preventive Measures of Pseudomonas aeruginosa in Barreled Drinking Water by National Standard Filter Membrane Method

MAI Miao

（Hezhou Inspection and Testing Center， Hezhou 542899， China）

Abstract： The national standard filtration method refers to the test method for Pseudomonas aeruginosa in drinking natural mineral water proposed in GB 8538—2022. The method has the characteristics of simple operation and reliable results， and has been widely used in the detection of Pseudomonas aeruginosa in all kinds of water. This paper analyzes the key control points of the national standard filtration method for detecting Pseudomonas aeruginosa in barreled drinking water， and puts forward effective preventive measures to significantly reduce the risk of Pseudomonas aeruginosa contamination in barreled drinking water and ensure people’s drinking water safety.

Keywords： national standard filtration membrane method; barreled drinking water; Pseudomonas aeruginosa; critical control point; preventive measure

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，广泛存在于自然环境中，如土壤、水、空气以及医院等场所。这种细菌具有较强的环境适应能力和生存能力，能够在多种条件下生长繁殖，对消毒剂、干燥和紫外线等理化因素具有很强的抵抗力。该菌存在于食品或水体中会威胁人体健康，尤其是免疫力低下人群，可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病[1-5]。铜绿假单胞菌是桶装饮用水中最主要的微生物污染源之一[6]。随着桶装饮用水市场需求的不断扩大，近年来国内外关于铜绿假单胞菌污染桶装水的报道屡见不鲜，引起了诸多学者、消费者及生产企业的普遍关注[7-9]。由铜绿假单胞菌污染造成的饮用水中毒案件也有报道[10-12]。这不仅影响了消费者的饮水安全，也对生产企业的声誉和经济利益造成了严重损害。《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》

（GB 8538—2022）对饮用天然矿泉水中铜绿假单胞菌的检验方法（简称国标滤膜法）进行了详细规定。国标滤膜法具有操作简便、结果可靠等特点，被广泛应用于各类水的铜绿假单胞菌检验，故分析其检验的关键控制点和有效防控手段至关重要。

1 国标滤膜法的操作步骤

采用国标滤膜法时，用无菌镊子夹取无菌滤膜边缘部分，帖放在已灭菌的滤头上，通过微孔滤膜过滤水样，将水中的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜贴在假单胞菌琼脂培养基上进行培养，计数滤膜上的典型微生物菌落数。该方法操作简便、灵敏度高，适用于检测饮用水中的铜绿假单胞菌。

2 关键控制点

2.1 样品的采集与处理

样品采集是检测的第一步，也是影响检测结果的首要因素。桶装水体积大、取样口小，导致桶装水检验时采样难度非常大。采样时应先用消毒水消毒桶壁四周，特别是用于取样的部位，并确保采样容器和器具清洁无菌，避免交叉污染。采样人员应注意手部消毒，确保无菌。同时，采样时应充分振荡水样，使细菌均匀分布，确保采样的均匀度，以提高检测的准确性。

2.2 培养基及试剂的选择、制备与接种

培养基自身质量的好坏、保存是否妥当、制备与使用是否正确都会直接影响检验结果的准确性。因此，加强培养基的质量控制与使用管理是保证桶装水铜绿假单胞菌检测准确性的关键。实验室应结合工作实际选择合适的培养基质控标准、制定相应的质量控制作业指导书。培养基的选择与制备应严格按照《食品安全国家标准 食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》（GB 4789.28—2013）进行，确保培养基营养成分的比例和pH值符合要求。同时，应注意对培养基配制用水、验证试剂加强质量控制。实验室在使用检测铜绿假单胞菌的相关培养基时，应选择适宜的制备方法、灭菌方式、储存方式等，并按照标准要求进行质量控制，以确保最终检测结果的准确性[13]。接种过程中，应确保无菌操作并将滤膜紧密贴合在培养基上，避免气泡产生，以确保铜绿假单胞菌能够充分接触培养基并生长。此外，应注意合理控制培养箱的温度和湿度，以保证铜绿假单胞菌正常生长。

2.3 滤膜的选择与使用

滤膜是滤膜法检测桶装水中铜绿假单胞菌的关键耗材，滤膜的质量会直接影响细菌的截留效率和检测结果的准确性。应选择孔径适中、质地均匀、质量好的滤膜，并确保其在有效期内使用。滤膜采购回来后，先对滤膜进行阴性和阳性质量控制，确保滤膜的截留效率和铜绿假单胞菌在滤膜上的显色情况。使用前对滤膜进行灭菌处理或直接使用一次性滤膜，以避免引入外源性污染。同时，操作过程中应注意保持滤膜的完整性，避免滤膜破损导致细菌无法完全截留。

2.4 确证试验的准确性

确证试验是判断疑似菌落是否为铜绿假单胞菌的重要依据，常用的确证方法有绿脓菌素试验、产氨试验、42 ℃生长试验、氧化酶试验及荧光试验等。在进行这些试验时，应严格按照检验标准和试剂说明书进行操作，并确保试剂的有效性和操作的准确性。同时，应注意观察试验结果的时间点和颜色变化，正确判断菌落是否为铜绿假单胞菌。

2.5 实验室质量控制

实验室质量控制是保证检测结果准确性和可靠性的重要手段。应通过参加能力验证、定期校准仪器、检查试剂有效期等方式，确保实验室的设备、人员、环境、检测能力和水平符合国家标准要求。还应建立完善的记录制度和审核机制，对检测过程进行全面监管。此外，实验室应建立完善的质量管理体系，对检测过程中的每个环节进行严格监管，包括但不限于样品的接收、处理、分析和结果的报告。质量控制人员应定期统计分析实验室的检测数据，及时发现并纠正偏差，确保检测数据的准确性。同时，实验室应定期对检测人员进行培训和考核，提高其专业技能和操作水平，以减少人为误差。

3 预防措施

3.1 加强水源管理

桶装水的水体来源通常有公共供水系统的自来水、地下水或地表水。由于自然环境复杂多变，地下水或地表水的微生物负载较高，水体普遍存在铜绿假单胞菌。所以，为保障桶装饮用水安全，需要采取如下水源管理措施：①选择水质优良、无污染的水源作为原料水体，并对水源地进行严格的保护，防止工业排放、农业污染等外部因素对水源造成污染；②定期对原水池进行清洗消毒，以去除池壁和池底的污垢、微生物等，并减少原水在池中滞留的时间，避免长时间滞留导致水质恶化；③定期检查原水池的密封性和完整性，防止外部污染物进入；④对水源进行精滤或超滤，去除水中的悬浮物、胶体、细菌、病毒等污染物。

3.2 完善桶装水的生产工艺

桶装水生产企业应加强优化生产工艺流程，减少灌装次数，确保一次灌装完成，避免混合半产品水的再次灌装。还应加强设备管道、灌装系统、成品水罐的清洗消毒和维护，并要求员工在生产前进行手部清洁消毒，穿戴符合要求的防护用品，在生产过程中严格遵守操作规程，避免人为带入污染源[14]。

在桶装水的生产过程中，臭氧混合灭菌是去除水中铜绿假单胞菌等有害微生物的主要手段。为了提升灭菌效果，可以适当提高水体中臭氧的浓度，并增加臭氧与水的接触面积。然而，需要注意的是，过高的臭氧浓度可能会产生溴酸盐等有害物质，因此需要在保证溴酸盐不超标的前提下调整臭氧的浓度。除了臭氧浓度和接触面积外，杀菌时间也是确保水质安全的关键因素。在生产过程中，需要根据臭氧的浓度、水的流量及目标杀菌效果严格控制臭氧灭菌的时间。同时，桶装水生产企业需要建立完善的监测系统，以实时监测水体中的微生物含量和臭氧浓度，及时发现并处理异常情况。

3.3 强化周转桶消毒

周转桶内壁容易沾染绿藻孢子，一旦遇到合适的环境就会大量繁殖、污染水体。因此，周转桶为引入铜绿假单胞菌的最大风险点[15]。桶装水生产企业回收的周转桶应先去除桶盖，人工检查确认其能否继续使用。不能继续使用的进行报废处理；能够正常使用的周转桶进入外洗、内洗、灯检流程，在灯检过程中发现不合格的就剔除。能使用的周转桶要特别注重桶内壁清洗消毒，选择合适的高效消毒剂杀灭残留的细菌和孢子。桶装水生产企业可使用自动化设备清洗消毒周转桶内部，清洗消毒工位（含沥干工艺）不少于10个，包括预清洗、洗涤剂清洗、消毒剂清洗、水清洗、成品水清洗等。同时，桶装水生产企业应注意桶盖的清洁消毒。周转桶灭菌时应注意合理使用消毒剂，不同种类、不同品牌消毒剂的使用方法和剂量不同，需要按照说明书的要求使用，确保周转桶的灭菌效果。

3.4 控制生产环境条件

企业生产过程中生产环境控制不严格会导致铜绿假单胞菌超标。因为铜绿假单胞菌在潮湿、室温条件下极易生长繁殖，所以生产车间环境应保持清洁和干燥，使用紫外灯杀菌或其他有效方式杀菌，并定期进行监测，确保生产环境条件符合相关国家标准的要求。

3.5 提升检测水平

目前除了传统的国标滤膜法外，检验机构还可以引入聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）和环介导等温扩增（Loop-mediated Isothermal Amplification，LAMP）等分子生物技术，用于大批量水样的快速检测和结果初筛。这些技术具有快速灵敏的优点，配合国际滤膜法能够显著提高检测效率和准确性。同时，检验机构应针对检测人员开展有关铜绿假单胞菌检验技术的相关培训，确保检验员的检测水平与检验国标要求相匹配。

4 结语

国标滤膜法是一种准确可靠的检测方法，可用于饮用水中铜绿假单胞菌的检测。检验检测机构严格把控样品的采集与处理、培养基和试剂的选择和制备、滤膜的选择与使用、确证试验的准确性以及实验室质量控制等关键控制点，以确保检测结果的准确性和可靠性。同时，采取加强水源管理、完善桶装水的生产工艺、强化周转桶消毒、控制生产环境条件以及提升检测水平等预防措施，以有效降低桶装水中铜绿假单胞菌的污染风险。未来，随着科技的进步和行业的发展，相信会有更多更高效的方法和技术应用于桶装饮用水中铜绿假单胞菌的检测和预防工作中，为保障人类健康做出更大的贡献。

参考文献

[1]李静.包装饮用水中铜绿假单胞菌检验方法相关问题的探讨[J].食品工程，2019（4）：5-7.

[2]刘珊珊，杨铮，杜伟，等.包装饮用水中铜绿假单胞菌检验不确定度的评定[J].饮料工业，2017，20（3）：8-11.

[3]周鹤，张国利，傅志丰，等.桶装水铜绿假单胞菌污染原因及检测方法[J].检验检疫学刊，2019，29（6）：135-137.

[4]韦云，陈佩虹，周露.矿泉水中铜绿假单胞菌的测定能力验证结果分析[J].食品安全质量检测学报，2020，11（16）：5398-5402.

[5]朱渊，戴云山，王俊虎，等.基于聚合酶螺旋反应技术快速检测铜绿假单胞菌[J].微生物学通报，2019，46（5）：1246-1256.

[6]章志超，吴鑫，于帆，等.我国包装饮用水中铜绿假单胞菌检验方法标准问题分析及其质量控制探讨[J].食品安全质量检测学报，2021，12（10）：4257-4262.

[7]刘思超，徐励琴，罗泽燕，等.223份桶装天然矿泉水和包装饮用水中铜绿假单胞菌的检测结果分析[J].预防医学情报杂志，2016，32（10）：1071-1075.

[8]王文娟，颜瑛，罗玉彬，等.江西省矿泉水和包装饮用水中铜绿假单胞菌污染情况分析[J].中国卫生检验杂志，2017，27（3）：419-421.

[9]陈万胜，王督，王静怡，等.2016—2019年包装饮用水中铜绿假单胞菌检出情况分析及对策[J].河南预防医学杂志，2020，31（10）：806-808.

[10]姜庆，尤部美，张华，等.659份包装饮用水中铜绿假单胞菌的检测结果分析[J].现代食品，2022，28（16）：

190-192.

[11]关大庆.沈阳市于洪区某学院饮用水污染事故调查[J].中国校医，2014，28（9）：645-646.

[12]闫芳，隋英杰，孙静，等.桶装饮用水污染引起学生食物中毒的调查分析[J].中国卫生检验杂志，2011，21（8）：2082.

[13]杨云斌，杜斐颖，牛涛.食品微生物检验用培养基的使用及质量控制探讨[J].食品安全质量检测学报，2018，9（5）：1055-1058.

[14]王珍，王川丕，夏慧丽，等.2016—2019年我国包装饮用水中铜绿假单胞菌的抽检分析[J].生物加工过程，2023，21（3）：346-354.

[15]李蒙蒙.桶装饮用水中铜绿假单胞菌污染情况分析[J].现代食品，2024，30（10）：190-192.