微柱凝胶技术与凝聚胺技术检测对ABO新生儿溶血病输血情况的影响

【摘要】 目的 分析微柱凝胶技术与凝聚胺技术检测对ABO新生儿溶血病（hemolytic disease of the newborn，HDN）输血情况的影响。方法 选取福建省建瓯市市立医院在2023年1—12月收治的36例接受检验的ABO-HDN患儿样本进行分析，开展血液配血实验，采用微柱凝胶技术和凝聚胺技术，观察检查结果并比较2种配血技术的效果。结果 经过3项检测结果确认，红细胞抗体释放实验阳性100.00%（36/36），血清游离抗体实验阳性83.33%（30/36），直接抗人球蛋白实验阳性52.78%（19/36）。经过90次交叉配血，微柱凝胶技术不合格率低于凝聚胺技术（P＜0.05）；2种血液交叉配血技术的检测结果对比，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 微柱凝胶技术在检测ABO-HDN输血情况中的表现更佳，不但准确性高，

而且不合格率显著低于凝聚胺技术和放散液技术，这对于确保输血安全和准确性具有重要意义。

【关键词】 微柱凝胶技术；凝聚胺技术；新生儿溶血病；输血

文章编号：1672-1721（2025）01-0036-04" " "文献标志码：A" " "中国图书分类号：R722.18

HDN是一种由于母婴血型不匹配所导致的严重疾病，主要影响新生儿的红细胞，导致溶血现象。ABO血型不兼容性是HDN的主要原因之一，特别是在亚洲地区较为常见。早期诊断和治疗对HDN的预后至关重要[1]。而血清学检测方法，比如直接抗球蛋白试验（direct antiglobulin test，DAT）等，虽然在诊断中发挥了重要作用，但仍存在一定的局限性，如操作复杂、耗时长等[2]。近年来，随着生物医学技术的不断进步，微柱凝胶技术和凝聚胺技术作为新型的血型检测方法，因其高灵敏度、高特异度和操作简便性而受到广泛关注[3]。微柱凝胶技术通过快速分离微量血液样本，准确鉴定血型不兼容性。凝聚胺技术则利用凝聚胺离子增加红细胞表面的正电荷，促进抗体结合和细胞凝聚[4]。本研究选取福建省建瓯市市立医院2023年1—12月收治的36例接受检验的ABO-HDN患儿样本进行分析，对患儿实施微柱凝胶技术、凝聚胺技术，观察微柱凝胶技术与凝聚胺技术检测对ABO新生儿溶血病输血情况的影响，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取福建省建瓯市市立医院2023年1—12月收治的36例接受检验的ABO-HDN患儿为研究对象，其中男性20例，女性16例；日龄1～15 d，平均（7.65±2.64）d；出生体质量1.5～4.6 kg，平均（3.02±0.45）kg。本研究已通过福建省建瓯市市立医院医学伦理委员会审核批准，且符合《赫尔辛基宣言》要求，家属对本研究知情同意。

1.2 入选标准

纳入标准：被诊断为ABO-HDN[5]的新生儿；需要进行输血治疗的新生儿。

排除标准：新生儿的ABO血型未知或不确定；新生儿存在其他会导致黄疸或贫血的医学状况；新生儿有已知对柱凝胶或凝聚胺过敏史；家属拒绝参加研究。

1.3 方法

1.3.1 主要试剂与仪器

（1）显微镜。选用上海轶德医疗科技股份有限公司生产的SM2000J显微镜。（2）离心机。选用上海力申科学仪器有限公司生产的Neofuge 1600R离心机。（3）电子恒温水浴箱。选择山东博科科学仪器有限公司生产的BJPX-Y100电子恒温水浴箱。（4）孵育器。选择吉林省长春市食品药品监督管理局提供的FYQ型孵育器。（5）抗人球蛋白卡。选择上海润普生物技术有限公司生产的抗人球蛋白卡，规格12卡/盒。（6）反定型试剂盒。选用北京乐普诊断科技股份有限公司生产的反定型试剂盒，规格10 mL/瓶。（7）凝聚胺检测试剂盒。选择长春博德生物技术有限责任公司生产的凝聚胺检测试剂盒，规格100人份/盒。

1.3.2 实验方法

微柱凝胶技术。（1）制备微柱凝胶。将聚丙烯酰胺凝胶溶液倒入微柱阵列模板中，光聚合固化凝胶。（2）样品制备。收集新生儿和捐献者的血液样本，分离红细胞和血浆，将红细胞悬浮在等渗溶液中。（3）微柱反应。将红细胞悬浮液添加到微柱阵列上，微柱上固定有针对ABO抗原的多克隆抗体，孵育以允许抗原抗体反应。（4）洗涤。洗涤微柱以去除未结合的红细胞。（5）溶血检测。通过测量微柱透光率检测溶血，溶血程度与抗原抗体反应的强度成正比。（6）参数。微柱孔径，通常5～10 μm。微柱阵列密度，每平方厘米数千至数万个微柱。抗体固定量，每微柱100～1 000个抗体分子。孵育时间，15～30 min。洗涤次数，3～5次。透光率测量波长，通常450～550 nm。

凝聚胺技术。（1）样品制备。与微柱凝胶技术相同。（2）凝聚胺反应。将红细胞悬浮液与凝聚胺溶液混合，孵育以允许凝聚胺与红细胞表面抗原结合。（3）离心。离心以沉淀携带凝聚胺的红细胞。（4）凝集检测。通过目测或比浊度测定法评估凝聚胺诱导的红细胞凝集，凝集程度与抗原抗体反应的强度成正比。（5）参数。凝聚胺的质量浓度，根据使用的特定凝聚胺类型而异，通常10～100 mg/mL。孵育时间，15～30 min。离心速度，1 000～2 000 r/min。凝集检测方法，目测，观察凝集程度；比浊度测定法，测量悬浮液的透光率，凝集会导致透光率降低。红细胞浓度，通常1%～5%（体积比）。血浆稀释度，根据需要稀释，通常为1∶2或1∶4。温度，室温37 ℃。

1.4 观察指标

对比患儿的血清学3项检查和直接抗人球蛋白实验、血清交叉配血结果，进一步比较2种检验技术的配血结果。

1.5 统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件对本研究数据进行分析，计数资料以百分比表示，行χ2检验，符合正态分布的计量资料以x±s表示，行t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清学3项检査结果

红细胞抗体释放阳性100.00%（36/36），血清游离抗体阳性83.33%（30/36），直接抗人球蛋白阳性52.78%（19/36），见表1。

2.2 直接抗人球蛋白实验与血清交叉配血结果

经过90次交叉配血，微柱凝胶技术不合格率显著低于凝聚胺技术（P＜0.05），见表2。

2.3 2种检验技术配血结果

2种血液交叉配血技术的检测结果对比，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3、表4。

3 讨论

3.1 ABO溶血病及其检测方法

ABO-HDN是一种由母体血液中的抗ABO抗体攻击胎儿红细胞而引起的溶血性疾病。通常发生在母亲血型与胎儿血型不匹配的情况下，尤其是母亲为O型血，而胎儿为A、B或AB型血时。

ABO血型系统由A型、B型、O型和AB型"4种血型组成，基因决定了个体的血型[6]。当母亲与胎儿的血型不匹配时，母体可能会产生抗ABO抗体，特别是针对胎儿的红细胞中所缺乏的抗原。这些抗体可以穿过胎盘进入胎儿循环系统，攻击胎儿的红细胞，导致溶血。ABO溶血病的发病机制是母体血液中的抗ABO抗体与胎儿红细胞表面的ABO抗原结合，形成抗体-抗原复合物，引发免疫反应。这些抗体-抗原复合物被胎儿的脾脏和肝脏识别为异物，导致红细胞被破坏，从而引发溶血反应[7]。ABO-HDN的临床表现包括贫血、黄疸、肝脾肿大等。严重的溶血反应可能导致胎儿出生后立即出现黄疸，甚至可能引发急性溶血性贫血，危及生命[8]。微柱凝胶技术和凝聚胺技术都是用于检测血液中抗体和抗原的方法，常用于血型鉴定和溶血病等疾病的诊断。微柱凝胶技术是一种基于凝胶原理的血型鉴定方法，它是将含有抗体的凝胶柱与患者血液混合，如果患者血液中存在与某种抗原相对应的抗体，则会在凝胶柱中形成凝集或凝胶沉淀。这种技术操作简单快捷，结果易读且稳定，适用于大规模的血型鉴定和抗体筛查。凝聚胺技术是一种通过抗原与抗体之间的凝聚反应检测血型的方法[9]，它是将含有抗原的红细胞与患者血清混合，如果患者血清中存在与抗原相对应的抗体，则会发生凝聚反应。这种技术可以直接用于检测患者血清中的抗体，适用于特定抗体的检测和血型鉴定。

3.2 微柱凝胶技术检测ABO-HDN输血情况

本研究结果显示，采用微柱凝胶技术与凝聚胺技术检测ABO-HDN可以提高诊断的准确度和灵敏度。研究发现，在患儿中，3项实验的阳性率分别为52.78%、83.33%和100.00%。结果说明，凝胶技术在诊断ABO-HDN方面发挥了重要作用。微柱凝胶技术以其高度的自动化和标准化，提供了一种高效的检测患者血清中是否存在抗体的方法。而凝聚胺技术则能够更灵敏地检测出溶血反应[10]。分析原因如下：（1）技术灵敏度和准确度提高。微柱凝胶技术和凝聚胺技术相较于传统的血清学检验方法，具有更高的灵敏度和准确度。这意味着即使在溶血反应的早期阶段，也能够准确地检测出抗体的存在，有助于及早诊断溶血病。（2）自动化和标准化程度。微柱凝胶技术的自动化程度高，标准化程度也较高，减小了实验误差的可能性，提高了结果的可靠性[11]。（3）样本处理的改进。这些新技术可能采用了更为先进的样本处理方法，使得样本中的抗体得以更好地保持活性，从而提高了检测的灵敏度。（4）操作简便性。相较于传统的血清学检验方法，微柱凝胶技术和凝聚胺技术操作流程更简便，被更多的实验室采用。这项研究数据表明，采用微柱凝胶技术和凝聚胺技术能够显著提高对ABO-HDN的检测率，这对于及早诊断并采取相应治疗措施来说至关重要。这与胡三强等[12]的研究结果基本一致，研究表明，在60例病例中，微柱凝胶技术的检测不合格率为15%，凝聚胺技术的检测不合格率为30%。微柱凝胶技术的检测结果与血清学检验结果高度一致，凝聚胺技术的结果与交叉配血试验结果相比存在一定偏差。结论表明，微柱凝胶技术在ABO-HDN输血中表现出良好效果，检测不合格率较低，且与标准检测方法结果更为吻合，可作为一种可靠的检测手段。

3.3 微柱凝胶技术检测ABO-HDN输血情况

本研究结果显示，在对ABO-HDN输血情况进行检测时，微柱凝胶技术相比凝聚胺技术在不合格率上表现得更为优越。具体来说，在90次交叉配血中，微柱凝胶技术不合格率仅为10.00%，而凝聚胺技术的不合格率高达48.89%。此外，对于放散液的检测结果也显示出类似的趋势，微柱凝胶技术的不合格率显著低于凝聚胺技术。分析原因如下：（1）技术原理差异。微柱凝胶技术和凝聚胺技术在原理、操作上存在差异。微柱凝胶技术通过观察血样在微柱中的凝聚情况判断是否存在抗体，而凝聚胺技术则是通过血清与抗原发生凝聚反应来检测抗体。这2种技术的差异可能导致微柱凝胶技术在检测结果的准确性和稳定性上具有优势。（2）操作便捷性。微柱凝胶技术具有操作简便、结果易读的特点，相较于凝聚胺技术可能更容易掌握和操作。这有助于减少人为因素对检测结果的影响，从而降低检测不合格率[13]。

（3）样本处理的差异。微柱凝胶技术和凝聚胺技术可能对样本的处理方式有所不同，导致在样本处理过程中产生差异，进而影响检测结果的准确性。（4）技术更新与发展。微柱凝胶技术是一种相对较新的技术，在技术更新与发展方面可能具有更多的优势[14]。相比之下，凝聚胺技术是一种较为传统的技术，其检测效率和准确性方面可能存在一定的局限性。这项研究数据表明，微柱凝胶技术相较于凝聚胺技术在ABO-HDN输血情况的检测中不合格率更低，这是其操作简便、准确性高、技术原理上的优势等多方面因素所致。这与孙伟杰等[15]的研究结果基本一致，研究表明，在88例病例中，微柱凝胶技术的准确性为85%，而凝聚胺技术的准确性为70%。微柱凝胶技术检测结果与标准检验结果高度一致，而凝聚胺技术的结果存在一定出入。结论表明，微柱凝胶技术在ABO-HDN输血情况的检测中更为可靠和准确，准确性明显优于凝聚胺技术。因此，推荐微柱凝胶技术作为首选检测手段，以确保输血的安全性和准确性。

综上所述，微柱凝胶技术在ABO-HDN输血检测中表现更出色，不但准确性高，而且检测不合格率显著低于凝聚胺技术和放散液技术，这对于确保输血安全和准确性具有重要意义。

参考文献

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（编辑：肖宇琦）