CPNE1、ZWILCH在肺腺癌进展及预后中的临床意义

[摘要]目的分析钙离子依赖性磷脂结合蛋白1（calciumdependentphospholipidbindingprotein1，CPNE1）、ZWILCH表达与肺腺癌进展及预后的相关性。方法收集2020年1月至2021年3月湖州市中心医院首次确诊的125例肺腺癌患者的癌组织、癌旁组织标本，免疫组织化学法检测CPNE1、ZWILCH阳性表达强度，分析其在肺腺癌中的表达差异。随访并记录肺腺癌患者的生存情况，分析影响其预后的危险因素，明确CPNE1、ZWILCH预测肺腺癌患者预后的效能。结果肺腺癌组织患者的CPNE1、ZWILCH阳性率均显著高于癌旁组织（P<0.05）。临床分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有胸膜侵犯、有脉管癌栓、有淋巴结转移的肺腺癌患者的CPNE1、ZWILCH阳性率显著升高（P<0.05）。CPNE1、ZWILCH阳性表达的肺腺癌患者的总生存率显著低于CPNE1、ZWILCH阴性表达者（P<0.05）。Cox多因素分析显示，家庭人均月收入、贫血、低蛋白血症、临床分期、分化程度、营养免疫与系统炎症指标、免疫功能、CPNE1、ZWILCH均是影响肺腺癌患者预后的危险因素（P<0.05）。CPNE1联合ZWILCH预测肺腺癌患者预后的曲线下面积为0.934，敏感度为91.09%，特异性为87.89%。结论CPNE1、ZWILCH表达随肺腺癌进展逐渐升高，是影响患者生存的危险因素，或可作为预测患者预后的参考指标。

[关键词]肺腺癌；钙离子依赖性磷脂结合蛋白1；ZWILCH；预后

[中图分类号]R734.2[文献标识码]A[DOI]10.3969/j.issn.1673-9701.2024.25.001

ClinicalsignificanceofCPNE1andZWILCHintheprogressionandprognosisoflungadenocarcinoma

YEBei，LIUShunlin

DepartmentofRespiratoryandCriticalCareMedicine，HuzhouCentralHospital，AffiliatedCentralHospitalofHuzhouUniversity，Huzhou313000，Zhejiang，China

[Abstract]ObjectiveToanalyzecorrelationofcalciumdependentphospholipidbindingprotein1（CPNE1）andZWILCHexpressionintheprogressionandprognosisoflungadenocarcinoma.MethodsCancertissueandparacancertissuespecimensof125patientsdiagnosedwithlungadenocarcinomaforthefirsttimeinHuzhouCentralHospitalfromJanuary2020toMarch2021werecollected.ThepositiveexpressionofCPNE1andZWILCHinlungadenocarcinomawasdetectedbyimmunohistochemistry，anddifferenceofitsexpressioninlungadenocarcinomawasanalyzed.Thesurvivaloflungadenocarcinomapatientswasfollowedupandrecorded，theriskfactorsaffectingtheprognosisofpatientswereanalyzed，andtheefficacyofCPNE1andZWILCHinpredictingtheprognosisoflungadenocarcinomapatientswasclarified.ResultsThepositiveratesofCPNE1andZWILCHinlungadenocarcinomatissuesweresignificantlyhigherthanthoseinparacancertissues（P<0.05）.ThepositiveratesofCPNE1andZWILCHwereincreasedinlungadenocarcinomapatientswithstageⅢ-Ⅳ，lowdifferentiation，pleuralinvasion，vascularcancerthrombus，andlymphnodemetastasis（P<0.05）.TheoverallsurvivalrateofpatientswithCPNE1andZWILCHpositiveexpressionwassignificantlylowerthanthatofpatientswithCPNE1andZWILCHnegativeexpression（P<0.05）.Coxmultivariateanalysisshowedthatpercapitamonthlyincome，anemia，hypoalbuminemia，clinicalstage，degreeofdifferentiation，nutritionalimmunityandsystemicinflammationindicators，immunefunction，CPNE1，andZWILCHwereriskfactorsaffectingtheprognosisoflungadenocarcinomapatients（P<0.05）.TheareaunderthecurveofCPNE1combinedwithZWILCHpredictedtheprognosisoflungadenocarcinomapatientswas0.934，thesensitivitywas91.09%，andthespecificitywas87.89%.ConclusionCPNE1andZWILCHexpressiongraduallyincreasewiththeprogressionoflungadenocarcinoma，whichareriskfactorsaffectingthesurvivalofpatients，andmaybeusedasareferenceindicatortopredicttheprognosisofpatients.

[Keywords]Lungadenocarcinoma;Calciumdependentphospholipidbindingprotein1;ZWILCH;Prognosis

肺癌是一种常见恶性肿瘤，具有高发病率、高死亡率的特点，是人类恶性肿瘤死亡的首要原因[1]。肺腺癌为肺癌的主要组织学亚型，发病率逐年升高，极易出现远处转移，预后较差[2-3]。Copines蛋白家族是新近发现的保守钙离子依赖性磷脂结合蛋白（calciumdependentphospholipidbindingprotein，CPNE），CPNE1作为此家族的重要蛋白定位于第20号染色体，被认为是肺癌的原癌基因，其表达升高可引起细胞癌变、肿瘤细胞增殖、迁移，显著缩短患者的生存期[4]。另外，肺腺癌的发生与肿瘤免疫微环境相关基因改变密切相关，Zhang等[5]基于癌症基因组图谱数据库分析发现，ZWILCH高表达所介导的肺腺癌免疫微环境改变与低存活率相关。现阶段对CPNE1、ZWILCH在肺腺癌发展过程中的表达变化报道较少。本研究拟探讨CPNE1、ZWILCH在肺腺癌组织中的表达及与疾病发展、预后的相关性，以期为改善患者预后提供参考。

1资料与方法

1.1临床资料

收集2020年1月至2021年3月湖州市中心医院首次确诊的125例肺腺癌患者的癌组织、癌旁组织标本，患者男68例，女57例，年龄33～75岁，临床分期：ⅠA期24例、ⅠB期20例、Ⅱ期35例、Ⅲ期27例、Ⅳ期19例。纳入标准：①病理证实为肺腺癌，为原发性病灶；②未接受任何抗肿瘤治疗；③美国东部肿瘤协作组（EasternCooperativeOncologyGroup，ECOG）评分0～1分。排除标准：①肺鳞癌；②既往恶性肿瘤治疗史；③合并其他类型恶性肿瘤；④重要脏器功能不全；⑤合并心脑血管疾病；⑥合并全身感染性疾病、自身免疫性疾病。所有患者均签署知情同意书，本研究经湖州市中心医院伦理委员会批准（伦理审批号：202209022-01）。

1.2免疫组织化学检测

癌组织、癌旁组织石蜡包埋后切片，常规脱蜡，使用95%、85%、75%乙醇水化，0.01mol/L枸橼酸钠缓冲液（pH6.0）抗原修复，磷酸盐缓冲液洗涤后加1∶2000的CPNE1、ZWILCH兔抗人单克隆抗体，4℃下过夜。磷酸盐缓冲液洗涤加二抗孵育，30min后二氨基联苯胺显色，苏木精复染，中性树脂封片，在显微镜下观察。CPNE1阳性：胞质或胞膜为棕褐色或棕黄色；ZWILCH阳性：胞质棕黄色。进一步根据阳性细胞占比、细胞染色强度判断CPNE1、ZWILCH阳性表达强度，阳性细胞占比≤5%计0分，6%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，>75%计4分；细胞染色强度：不着色0分，淡黄色1分，黄色2分，棕黄色3分；两项乘积<2分为阴性，2～3分为弱阳性，4～9分为中等阳性，10～12分为强阳性。

1.3临床特征及预后判断

临床特征包括肿瘤直径、临床分期、分化程度、有无胸膜侵犯、有无脉管癌栓、有无淋巴结转移等。患者术后定期随访，以电话或门诊复查等方式连续随访3年，第1年每3个月随访1次，而后每6个月随访1次，以随访截止日期及全因死亡或失访作为随访终点，评价患者的生存情况。统计不同预后患者的临床资料，包括性别、年龄、体质量指数、受教育程度、家庭人均月收入、肿瘤家族史、吸烟史、饮酒史、有无贫血、有无低蛋白血症、肿瘤临床特征、营养免疫与系统炎症指标[中性粒细胞与淋巴细胞比值（neutrophiltolymphocyteratio，NLR）、血小板与淋巴细胞比值（platelettolymphocyteratio，PLR）、预后营养指数（prognosticnutritionalindex，PNI）、全身免疫炎症指数（systemicimmuneinflammation，SII）]、免疫功能[T淋巴细胞亚群（CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）、免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）A、IgG、IgM]等。

1.4统计学方法

采用SPSS25.0软件对数据进行统计分析。符合正态分布的计量资料以均数±标准差（）表示，两组间比较采用独立样本t检验；计数资料以例数（百分率）[n（%）]表示，比较采用χ2检验；绘制受试者操作特征曲线（receiveroperatingcharacteristiccurve，ROC曲线）分析CPNE1、ZWILCH判断预后的截断值，以曲线下面积（areaunderthecurve，AUC）表示预测效能，AUC>0.7为预测效能较好。Kaplan-Meier法绘制生存曲线，采用log-rank检验进行生存分析。单因素及多因素Cox回归分析模型验证影响患者预后的危险因素。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1肺腺癌组织、癌旁组织的CPNE1、ZWILCH表达比较

肺腺癌组织的CPNE1、ZWILCH阳性率均显著高于癌旁组织（P<0.05），见表1、图1。

2.2CPNE1、ZWILCH在不同临床特征肺腺癌中的表达

临床分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有胸膜侵犯、有脉管癌栓、有淋巴结转移的肺腺癌患者的CPNE1、ZWILCH阳性率显著升高（P<0.05），见表2。

2.3肺腺癌中CPNE1、ZWILCH阳性表达与预后的关系

根据肺腺癌患者的CPNE1、ZWILCH阳性表达情况将其分为CPNE1阳性组（n=89）、CPNE1阴性组（n=36）、ZWILCH阳性组（n=76）、ZWILCH阴性组（n=49）。进一步分析CPNE1、ZWILCH与肺腺癌患者预后的相关性，结果显示CPNE1阳性组患者的总生存率显著低于CPNE1阴性组[60.67%（54/89）vs.88.89%（32/36），χ2=8.942，P<0.05]，ZWILCH阳性组患者的总生存率显著低于ZWILCH阴性组[59.21%（45/76）vs.83.67%（41/49），χ2=7.439，P<0.05]，见图2、图3。

2.4影响肺腺癌患者预后的危险因素分析

Cox单因素分析显示，体质量指数、受教育程度、家庭人均月收入、贫血、低蛋白血症、临床分期、分化程度、胸膜侵犯、脉管癌栓、淋巴结转移、NLR、PLR、PNI、SII、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IgA、IgG、IgM、CPNE1、ZWILCH均是肺腺癌患者预后的影响因素（P<0.05），见表3。Cox多因素分析显示，家庭人均月收入、贫血、低蛋白血症、临床分期、分化程度、NLR、PLR、PNI、SII、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IgA、IgG、IgM、CPNE1、ZWILCH均是影响肺腺癌患者预后的危险因素（P<0.05），见表4。

2.5CPNE1、ZWILCH预测肺腺癌患者预后的效能分析

ROC曲线显示，CPNE1联合ZWILCH预测肺腺癌患者预后的AUC为0.934，敏感度为91.09%、特异性为87.89%，见表5、图4。

3讨论

肺癌是癌因性死亡的第一恶性肿瘤。目前，肺癌的致病机制尚未完全明确。CPNE1作为最先发现的Copines蛋白家族成员，可编码537个氨基酸，在N端有一对C2结构域，具有钙离子依赖的磷脂结合活性，可影响钙与磷酸结合，其C端有一个A结构域，主要通过促进CPNE1与多种细胞内蛋白结合来发挥相应生物学功能[6-8]。一旦组织癌变，CPNE1表达升高，经多条信号通路参与包括肺癌、乳腺癌、骨肉瘤、前列腺癌等多种恶性肿瘤的发生进展[9-10]。本研究发现，在肺腺癌发展过程中CPNE1阳性率逐渐升高，即CPNE1高表达于Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有胸膜侵犯、有脉管癌栓、有淋巴结转移的患者，提示CPNE1可能参与肺腺癌的进展。研究证实CPNE1在泛素-蛋白酶体、自噬-溶酶体途径中参与细胞癌变，认为泛素连接酶神经前体细胞表达的发育下调样基因4可通过介导CPNE1泛素化和降解来引起肺癌细胞异常增殖和转移[11]。此外，CPNE1还可通过与活化蛋白激酶C受体1相互作用和激活上皮间质转化因子信号传导来促进肺癌进展[12]。通过分析CPNE1影响非小细胞肺癌细胞增殖、迁移的机制，认为其可能通过调节表皮生长因子受体信号通路、蛋白激酶B信号通路发挥作用[13]。以上均证实CPNE1参与肺腺癌进展，或可作为肺腺癌患者预后的评估指标。本研究发现，CPNE1阳性患者总生存率处于较低水平，提示CPNE1与患者预后有一定关联，CPNE1高表达经上述信号通路诱导癌细胞增殖、迁移从而影响预后。

随着对恶性肿瘤研究的不断深入，发现有丝分裂异常是引起细胞癌变的主要原因，在有丝分裂过程中每对姐妹染色体着丝与两极微管连接以保证遗传信息平均分配，临床认为此过程由动粒蛋白中RZZ[Roughdeal（Rod）、Zeste-white10（Zw10）和ZWILCH]复合体等纺锤体组装检验点的重要组分实时监控[14-16]。ZWILCH作为一种新发现的原癌基因，主要通过RZZ复合体将Mad1-Mad2、dynein/dynactin募集至着丝粒，以避免细胞提前退出有丝分裂，确保动粒-微管连接装置的稳定[17]。研究发现，当ZWILCH突变后纺锤体组装检验点失活，无法实时监控有丝分裂过程，极易引起染色体错误分离，诱导细胞异常增殖癌变[18]。现阶段对ZWILCH在肺癌中的作用机制尚不可知，但孙亚敏等[19]发现，ZWILCH升高可诱导脑胶质瘤细胞异常增殖。Blatkiewicz等[20]研究证实ZWILCH上调不仅与肿瘤细胞有丝分裂率和患者生存率有关，还参与细胞增殖的基因激活和与免疫系统相关基因的抑制。本研究发现，ZWILCH在肺腺癌组织中阳性率升高，并随着疾病的进展而加剧，且ZWILCH阳性患者的总生存率明显降低，提示ZWILCH可能通过某一途径参与肺腺癌的进展和预后转归。

本研究结果显示，肺腺癌患者的预后受多种因素影响，除家庭人均月收入、贫血、低蛋白血症、临床分期、分化程度、营养免疫与系统炎症指标、免疫功能等因素外，CPNE1、ZWILCH同样是影响肺腺癌患者预后的危险因素，提示CPNE1、ZWILCH阳性者死亡风险更高，且二者联合预测肺腺癌患者预后的效能较优，临床可通过检测肺腺癌组织中CPNE1、ZWILCH的表达情况评估死亡风险。

综上所述，CPNE1、ZWILCH参与肺腺癌的进展，其高表达是引起患者死亡的独立危险因素，与患者预后密切相关。

利益冲突：所有作者均声明不存在利益冲突。

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