猪附红细胞体病的诊断与防治

郭 敏

青岛中科基因生物技术有限公司,山东 青岛 266114

0 引言

猪附红细胞体病是由附红细胞体寄生于猪的红细胞表面或者游离于血浆、组织液和脑脊髓液中的一种寄生虫疾病[1]。猪附红细胞体病除了可以感染猪之外,还可以感染人、牛、羊等,是一种人畜共患的血液原虫病[2]。该病一年四季均可发生,主要呈隐性感染,经常和猪其他类型的疾病混合感染,为猪病的诊断和防治带来了极大的困难。基于此,本文对猪附红细胞体的诊断与防治进行了简要综述。

1 病原

猪附红细胞体的病原为立克次氏体目无浆体科的原核生物,病原大小为0.1～2.6 μm,其形态多变,呈圆形、卵圆形、环形、杆状、逗点状等。该病原无明显的细胞核与细胞器,无细胞壁与鞭毛,只有单层界膜,多寄生于红细胞边缘,红细胞病变为突刺状。附红细胞体耐低温,对干燥和消毒剂敏感,例如4 ℃抗凝血中可存活15 d,冰冻血液中可存活30 d,-30 ℃脱纤维血中可存活83 d,-79 ℃含甘油的血液中可存活80 d,冻干环境中可存活2年[3],干燥2 min即可失活,用0.5%石炭酸溶液、75%乙醇、0.1%碘溶液、0.1%苯扎溴铵或0.3%～0.5%过氧乙酸溶液可杀灭。

2 流行特点

猪附红细胞体病具有传染性强、发病率高、流行范围广泛等诸多特点,而且该病对各种年龄、性别、品种的猪均易感,患病猪及隐性感染猪是该病最主要的传染源。该病的潜伏期为2～45 d,一年四季均可发生。临床调查表明,猪附红细胞体病的传播途径非常多样化,摄入含有病原的血液,或接触被血液污染的注射器、医疗器具等物质,都可能导致感染。具体来说,当猪只舔食断尾后的创伤、因互相争斗而受伤,或饮用了被血液污染的水和尿液时,都有可能直接感染上这种疾病。除此之外,一些以吸血为生的昆虫,例如猪虱、蚊虫、疥螨等,也有可能成为该疾病的传播者。猪附红细胞体病还能通过猪的繁殖行为进行传播。

3 诊断方法

3.1 临床症状

猪附红细胞体病因畜种和个体体况不同,临床症状不同。临床上主要表现为发热、黄疸、贫血等症状。仔猪会出现精神萎靡、食欲下降、贫血、腹泻、体温升高、四肢抽搐、皮肤潮红、眼结膜苍白或黄染、急性死亡等症状。保育和育肥猪会出现精神萎靡、食欲下降、便秘、呼吸困难、体温升高、多处皮肤红紫且指压不褪色。母猪会出现高热、厌食、营养不良、尿液颜色加深,眼周、耳背、脊背、外阴四周毛孔渗血,严重的可视黏膜黄染,不发情,流产、死胎、弱胎、胎儿贫血等繁殖障碍,胎儿于不同的发展阶段死亡。

3.2 病理变化

猪附红细胞体病主要病理变化是贫血和黄疸,血液稀薄、脏器黄染。全身肌肉色泽变淡,脂肪及肺、胸腔、胃、肠、膀胱等内脏器官浆膜有不同程度的黄染。脾脏、肝脏、淋巴结肿大[4],肾脏肿大、质地变脆、外观黄染[5]。皮下组织水肿,多数有胸水和腹水。膀胱蓄积浓茶样尿液,黏膜黄染。心包积液,心肌苍白柔软。

3.3 试验室诊断方法

1)镜检法。①血液直接涂片镜检。自病猪及健康猪耳静脉或前腔静脉无菌采抗凝血,置光学显微镜下观察。感染猪附红细胞体的猪可见红细胞发生形态学变化,呈锯齿状、菜花状或星芒状等。健康猪红细胞边缘整齐、呈圆形,未见变形。②血液涂片染色镜检。从病猪及健康猪耳静脉或前腔静脉无菌采抗凝血,抹片自然干燥,1%的甲醇固定5 min,浸入盛有姬姆萨或者瑞氏染色液的染色缸中染色,取出水洗,水分干后置光学显微镜下观察。感染猪附红细胞体病的猪只红细胞呈波浪状、星芒状、锯齿状改变且周围有染成紫红色或者淡蓝色的小体。健康猪红细胞形态规则,边缘光滑,染色均匀。③扫描电镜镜检。在无菌环境中分别从患病猪和健康猪的耳部静脉或前腔静脉采集了血液样本,这些样本无需添加任何抗凝物质。按照1：5比例(即1份血液样本与5份3%的戊二醛溶液)将血液样本加入戊二醛中进行初步固定,并谨慎地混合以确保均匀。之后,样本经过离心处理,移除上清液,并加入了1%的锇酸溶液进行二次固定,同样混合均匀。为了进一步处理,使用0.1 mol/L二甲砷酸钠进行混合,并将样本在4 ℃的条件下静置12 h。最终制备涂片,并通过电子显微镜进行详细观察。在电子显微镜下观察到,受猪附红细胞体感染的猪的红细胞出现了显著的形态变化。这些红细胞表面呈现出皱褶和突起,形状极不规则,类似于齿轮或海星的形状。附着在这些红细胞膜上的附红体呈现出多种形状,包括球形、卵圆形等,大小不一。这些附红体有时单个存在,有时多个聚集在一起形成小团状,附着在红细胞表面,甚至有时会在血浆中自由游动。相对之下,健康猪的红细胞在电子显微镜下则呈现出完全不同的景象。它们的形状规则类似于两面凹陷的圆盘,且血浆中完全不存在附红体样的颗粒。

2)血清学检测法。现阶段比较常见的血清学检测试验方法有补体结合法、血凝法、荧光抗体法和酶联免疫吸附试验法。血清学检测有速度快、准确率高、敏感性高和特异性好等特点,不仅可以用来诊断该病,也可以用来进行流行病学诊断及监测[6]。酶联免疫吸附试验在临床上应用较为普遍,其检测样本一般包括血浆、血清、尿液、脑脊液、胸腹水、细胞培养上清等。

3)分子生物学诊断法。从病猪及健康猪耳静脉或前腔静脉无菌采血进行核酸的提取,核酸提取之后通过普通PCR或者实时荧光定量PCR进行疫病的诊断。普通PCR试验结果成立的条件是猪附红细胞体核酸阳性对照的PCR产物在特定的位置有一个特异性条带,同时阴性对照没有条带,如果样品的试验结果同阳性对照一致,则猪附红细胞体核酸阳性,否则为阴性。实时荧光定量PCR试验结果成立的条件是猪附红细胞体核酸阳性对照和阴性对照成立,如果样品的试验结果在阳性CT值判定范围内则为阳性,否则为阴性。

4)动物试验法。从病猪耳静脉或前腔静脉无菌采血注射给健康的试验动物。观察试验动物临床症状、病理变化,采集试验动物的血样,检查是否含有附红细胞体。如果试验动物有相应的临床症状及病理变化,且通过血样检查出有附红细胞体,则为阳性,否则为阴性。

3.4 鉴别诊断

在临床诊断疾病的时候,根据患病猪体的临床症状和病理变化可以对疫病有一个初步的判断,但是猪附红细胞体病的症状在临床和其他一些疫病有些类似,如猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、副猪嗜血杆菌病、猪弓形体病等,只有正确地把握各个疾病的特征,才可以精准的对疾病进行鉴别诊断。

1)猪瘟的鉴别。猪瘟无贫血和黄疸症状,猪瘟病毒导致机体高热稽留,各脏器出血(喉头、膀胱),肾脏贫血性出血(麻雀卵肾),淋巴结大理石状出血,脾脏有梗死灶,回盲口钮扣状溃疡。

2)猪繁殖与呼吸综合征的鉴别。猪繁殖与呼吸综合征无贫血和黄疸症状,呼吸道症状明显比较明显,肺部有明显病变,胎儿常在怀孕后期死亡,胎衣点状或斑状出血,脐带动脉壁出血。

3)副猪嗜血杆菌病的鉴别。副猪嗜血杆菌病无贫血和黄疸症状,有五炎两白症状(关节炎、腹膜炎、胸膜炎、心包炎、脑膜炎、皮肤白、淋巴白)、熊猫眼、绒毛心、皮下水肿多发生于后肢。

4)猪弓形体病的鉴别。猪弓形体病无贫血和黄疸症状,病猪会出现流鼻涕、痉挛等症状,伴随肺部异常,还有出血点与淡红膨大等症状。在病死猪的解剖中,猪弓形体可从多个器官中发现,而猪附红细胞体病仅在血液中可以检出虫体。

4 预防与治疗措施

4.1 加强饲养管理

猪附红细胞体病是由多种因素引起的疾病,应激可导致该病暴发[7]。过度拥挤、长途运输、天气变化、饲养管理不当、更换圈舍或饲料及其他疾病感染时,常引起呈隐性感染的猪抵抗力下降,进而引起猪群发生附红体病[8]。猪舍要加强饲养管理,保证空气通畅,保持猪舍、饲具干净卫生,定期对猪舍进行清洗消毒,对猪群进行疫病检测,对猪舍服务人员进行健康检查并建立健康档案,尽量减少一切外来人员及车辆的进入,减少不良应激,防止猪附红细胞体病的传入和发生。

4.2 加强对疫病的监测

定期对猪舍内的猪进行实验室的检查,对该病进行监测预警。坚持自繁自养,必须引入猪时要从非疫区引入,并对引入的猪进行实验室检查,确定无猪附红细胞体才可引入。引入后的猪进行一段时间的隔离饲养后再进行一次实验室的检查,检查结果为阴性才能混群饲养。

4.3 科学进行免疫接种

要制定科学合理、切合实际的免疫程序,做好猪伪狂犬病、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、副猪嗜血杆菌、猪腹泻类病等疫苗的免疫接种,确保猪处于高度的免疫状态,有效预防猪附红细胞体病与其他常见疫病的混合感染或并发感染。

4.4 药物治疗

4.4.1 中药治疗

随着对青蒿素研究的不断深入,发现青蒿素在治疗寄生虫病、抗炎、调节免疫和抗肿瘤等方面有显著的疗效。程富盛 等[9]研究表明,青蒿素对猪附红细胞体病有很好的治疗效果,用青蒿素新制剂按照猪体质量2 mg/kg,分点肌内注射,1次/d,连用3 d,对病猪治疗有效率达95%,治愈率达82%。

猪附红细胞体病的致病机理是通过破坏血液中的红细胞,从而导致机体免疫力下降。黄芪等中草药对红细胞免疫功能具有增强作用,用黄芪粉末3～4 g/kg拌料,连续饲喂5 d左右,每月循环1次,可预防该病。因红细胞中存在着许多与免疫功能相关的物质,为此可从提高红细胞免疫功能方面采取中草药辅助治疗该病。

4.4.2 西药治疗

用西药新砷凡纳明按照猪体质量10～15 mg/kg,进行一次静脉注射即可,注射后2～24 h,病原可从血液中消失,3 d内可消除症状。使用过程中需要注意剂量,剂量过大有可能造成动物砷中毒。也可以使用血虫净(二脒那泰)。这种药物能特异性地干扰原虫动基体的DNA合成和复制过程,同时与细胞核发生不可逆的结合反应,从而有效地清除原虫和动基体,阻断其繁殖周期。在具体应用时,剂量为按照病猪的体质量5～10 mg/kg进行肌内注射。治疗时,将血虫净用生理盐水稀释至5%的浓度,然后选择合适的注射部位进行肌内注射。治疗的频率是1次/d,连续进行3 d即可达到预期的治疗效果。

土霉素和强力霉素都是广谱抗菌药。土霉素除杀细菌外,对衣原体、各种立克次氏体、螺旋体和某些原虫有抑制作用,按体质量10 mg/kg口服、肌内注射或者静脉注射,连用7～14 d,但长期使用会造成细菌耐药性升高和毒副作用;强力霉素可在饲料中添加进行治疗,添加量150～300 mg/kg,连用3～5 d。

4.4.3 中西药结合治疗

有研究表明,中草药与西药合用有协同增效作用,对猪附红细胞体病的治疗具有更好的效果。中西联合用药通过西药对猪附红细胞病原体对因治疗,然后按照中医理论查找机体功能失调的病机对症治疗。王天坤[10]的研究也表明了单独用西药(贝尼尔按体质量5～7 mg/kg进行深部肌内注射)或者单独用中药(生地20 g,配以金银花30 g、青蒿15 g、野菊花30 g、鱼腥草20 g以增强疗效、常山30 g、芒硝20 g、大黄20 g,以上药材水煎后服用。可根据症状加减药量,如出现腹泻,应减少大黄、芒硝的用量;若高热不退,可加知母、生石膏以清热;若呼吸困难,应增加鱼腥草的用量以缓解症状。但是单独使用中草药或西药的效果都没有两者结合的杀灭力强。中西药结合中,中药的用药具体还需要结合病猪的临床症状分析进行用药。

5 结束语

猪附红细胞体病是现代养猪生产过程中常见的一类疾病,该病多呈隐性感染且易与其他疾病混合感染,不易被发现,但其流行范围广、传染性强,易造成猪群大面积感染,可严重影响养殖场的经济效益。养殖户应给予高度重视,树立科学的养殖意识,早发现、早确诊、早治疗,并结合自身条件合理开展防控措施,确保在短时间内控制病情,切断传播途径,全面保障养殖场的健康,避免猪场遭受更大的经济损失。