发酵花生粕对肉鸡肝脏抗氧化指标、基因表达和经济效益的影响

冯 冲，李 伟

（南阳农业职业学院，河南南阳 473000）

花生粕是花生油榨取后的副产品，其蛋白和糖类营养物质含量极高，被广泛用作蛋白饲料（孟桂元等，2020）。有研究指出，优质花生粕中粗蛋白质含量可达50% 以上（李建军等，2012）。同时，花生粕中含有畜禽生长发育所有必需氨基酸，特别是精氨酸，含量可达5% 以上（赵朝阳等，2015）。尽管花生粕营养丰富，但由于其中含有一定抗营养因子，严重影响其饲用价值。柳杰等（2010）研究指出，花生粕中含有的抗营养因子，如蛋白酶抑制因子、血球凝集素和植酸，不仅严重影响动物的消化吸收，同时其刺激较强，极易造成肠道损伤；其次，尽管花生粕粗蛋白质含量较高，但其氨基酸组成严重不均衡，蛋氨酸、苏氨酸，尤其是赖氨酸含量较低，难以满足动物的生长需要。有研究指出，赖氨酸不足会对动物生长发育产生显著负面影响（任晓静等，2013）；第三，因富含油脂，花生粕极易受黄曲霉菌污染，导致黄曲霉毒素B1累积（徐运杰，2011）。因此，目前大量研究使用物理、化学和生物等方法对花生粕进行前处理，以增强其饲用价值。有研究指出，酶菌协同发酵能有效提高花生粕的营养价值，降解抗营养因子和黄曲霉毒素含量（盖云霞等，2007）。肝脏是畜禽三大代谢（糖、脂和蛋白）途径的枢纽，同时也是畜禽最重要的解毒器官，可发挥重要的抗氧化作用（鲁鑫涛等，2020）。据此，本试验以菌酶制剂发酵处理花生粕，探究对肉鸡肝脏抗氧化机能和经济效益的影响，为行业研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料 花生粕购自河北某饲料公司，根据杨树梅（2021）所述方法进行菌酶协同发酵处理，根据花生粕重量，按180 U/g、2.0 U/g 和5% 的比例添加蛋白酶、植酸酶和植物乳杆菌。36 ～37℃恒温发酵48 h。发酵花生粕养分见表1。发酵后，花生粕中黄曲霉毒素B1含量由139.47 μg/kg 下降至7.4 μg/kg。

表1 发酵花生粕养分水平 %

1.2 试验设计 试验将720 羽健康肉鸡随机分为4 组，每组9 个重复，每重复20 羽。各组日粮分别使用0%、2%、4% 和8% 的发酵花生粕替代花生粕，日粮组成及营养水平见表2，试验共计42 d。

表2 基础日粮组成及营养水平

1.3 测定指标与方法

1.3.1 肝脏抗氧化指标 试验结束后，每组选8只肉鸡进行屠宰，屠宰后摘取肝脏，吸净表面血水后，一份装入冻存管-80℃保存，一份转移至冰包中用于酶活性检测。准确切取绿豆粒大小肝脏样本，加入10 倍体积的PBS 和匀浆珠，在提前预冷的低温匀浆机中匀浆，离心收集上清，使用试剂盒（南京建成）检测各上清液中T-SOD、T-AOC、SOD1、CAT、GPX 活性以及MDA 含量。同时测定各样本总蛋白含量对酶活数据进行校正。

1.3.2 mRNA 表达分析 取出冻存的肝脏样本，Trizol 法提取总RNA，使用AG 反转录试剂盒反转录，使用SYBR GREEN 法进行荧光定量。使用2-△△CT法，以β-actin 为内参基因计算各基因相对表达量。本试验所有引物序列如表3。

表3 引物序列

1.3.3 经济效益计算 根据采食量和增重情况分别计算肉鸡的增重成本，根据肉鸡出栏价格计算毛利润。

1.3.4 数据统计与分析 数据整理后使用SAS 9.4 软件进行单因素方差分析，采用LSD’s 法进行多重比较，P＜0.05 表示组间差异显著，0.05≤P＜0.10 表示数据有变化趋势。

2 结果

2.1 发酵花生粕对肉鸡肝脏抗氧化指标的影响 由表4 可知，使用4% ～8% 的发酵花生粕可显著提高肉鸡肝脏T-SOD 和CAT 酶活性（P＜0.05）；使用8% 的发酵花生粕可显著提高肉鸡肝脏T-AOC 能力（P＜0.05）；使用4% ～8%的发酵花生粕可显著降低肉鸡肝脏MDA 含量（P＜0.05）；此外，日粮添加发酵花生粕对肉鸡肝脏SOD1 和GPX 酶活性均无显著影响（P＞0.05）。

表4 发酵花生粕对肉鸡肝脏抗氧化指标的影响

2.2 发酵花生粕对肉鸡肝脏抗氧化基因表达的影响 由表5 可知，2% 的发酵花生粕添加量可显著降低肉鸡肝脏GPX1 基因表达水平（P＜0.05）；4% 和8% 的发酵花生粕添加量可显著提高肉鸡肝脏SOD3 和CAT 基因表达水平（P＜0.05）；8% 的发酵花生粕添加量可显著提高肉鸡肝脏SOD2 和GST 基因表达水平（P＜0.05）；发酵花生粕对肉鸡肝脏SOD1 基因表达水平无显著影响（P＞0.05）。

表5 发酵花生粕对肉鸡肝脏抗氧化基因表达的影响

2.3 发酵花生粕对肉鸡经济效益的影响 由表6 可知，菌酶协同发酵处理后，日粮成本为2.874、2.880、2.886 和2.892 元；日粮成本分别为7.22、7.30、7.24 和7.36 元；综合计算毛利润分别为8.24、8.61、8.92 和9.34 元，其中4% 和8% 的替代量组毛利润显著高于对照组（P＞0.05）。

表6 发酵花生粕对肉鸡经济效益的影响

3 讨论

肝脏在畜禽循环和代谢中发挥了重要的枢纽作用，此外，肝脏也发挥重要的解毒和抗氧化作用（杨树梅，2021）。大量研究表明，发酵能有效降低花生粕中的黄曲霉毒素B1含量，王晓玲等（2021）使用枯草芽孢杆菌对花生粕进行发酵处理，其中AFB1可降解90% 以上。邱天宇等（2020）发现，使用黑曲霉菌能降低花生粕中95% 的AFB1。前人研究认为，过量的AFB1会破坏肝脏结构，严重者甚至能诱导肝脏癌变，有研究揭示了AFB1诱导肝脏炎症反应、纤维化和干细胞死亡（潘奎和石玉祥，2023）。氧化应激被认为是AFB1诱导肝脏损伤最重要的病理性机制（林露茜，2023）。张微漾等（2023）使用不同菌种对花生粕进行发酵处理，以对DPPH 自由基的清除效率为参考依据，结果发现，在不同的发酵条件下，发酵花生粕均能有效清除DPPH 自由基。本试验结果表明，发酵花生粕能显著提高肉鸡肝脏T-AOC 能力显著提高，提示其肝脏抗氧化能力的增强。由SOD1、2 和3 三种同工酶构成的超氧化物歧化酶是畜禽最重要的抗氧化酶之一。He 等（2017）指出，SOD 可将超氧化物转化为O2和H2O2，随后在CAT 的作用下，将H2O2转化为H2O 和O2。本试验观察到T-SOD和CAT 活性提高，提示其抗氧化能力增强。此外，本试验检测到MDA 含量降低，作为衡量脂质过氧化的标志物，其含量的降低表明其氧化应激程度减弱（He 等，2017）。此外，本试验对肉鸡肝脏进行抗氧化相关基因表达分析发现，补充发酵花生粕能显著提高肉鸡肝脏中GPX1、SOD2、SOD3、CAT、和GST 的基因表达水平，这与韩坤良等（2023）在蛋鸡上的研究结果基本一致，也与本试验检测到抗氧化酶活性的提高一致。

本试验结果表明，完全使用发酵花生粕能显著提高肉鸡日增重。尽管发酵处理略微增加饲料成本，使用2% 的发酵花生粕日粮成本提高0.006元。综合计算总饲料成本分别为7.22、7.30、7.24和7.36 元，毛利分别为8.24、8.61、8.92 和9.34 元，毛利差异显著。

4 结论

综上所述，本试验结果表明，使用发酵花生粕替代花生粕能显著提高肉鸡肝脏抗氧化性能，其中8% 的替代量组经济效益最佳。