枝条蜜环菌栽培种液体培养技术

胡万金 祝 勇 肖 力 王江虹

蜜环菌，又称蜜环蕈、蜜蘑、榛蘑，是担子菌门、伞菌纲、伞菌目、白蘑科、蜜环菌属真菌，多生长在针叶林或阔叶林中，在我国的东北、华北、西北、四川、云南等地均有分布。

蜜环菌是天麻、猪苓的共生真菌，是天麻、猪苓生长发育的营养来源。此外，蜜环菌还具有一定的食用价值和药用价值，其菌盖和菌柄味道鲜美、营养丰富，可以食用；同时，蜜环菌具有祛风通络、强筋骨、益肠胃、清热解毒等功效。

液体培养是枝条蜜环菌栽培种传统生产方式，具有生产技术简单、原材料易于收集、商品菌种易于保存且保存期长，栽培天麻、猪苓产量高等特点。 陕西、甘肃、湖北、贵州等地农户广泛使用枝条蜜环菌液体培养的菌种生产天麻、猪苓。 目前，陕西汉中枝条蜜环菌液体栽培种产量已占全国60%以上。 以下总结枝条蜜环菌液体栽培种生产技术，供参考。

1 蜜环菌的形态特征

蜜环菌的子实体为浅土黄色或浅黄褐色肉质，菌盖半球形，菌柄上有菌环，菌肉白色。 子实体成熟后产生孢子，形成白色的孢子印（孢子粉聚集形成的一种现象）。 孢子无色或微黄，光滑，呈圆形。 孢子在适宜条件下萌发形成菌丝， 菌丝聚集后形成绳索状长束，称为菌索，菌索棕褐色，老化后呈黑褐色，菌索从腐朽的树木或活的树根上吸取营养， 在树皮或土壤中蔓延。菌丝和菌索在黑暗条件下都能发出萤光，发光的强弱与温度、 菌丝的成熟度和接触空气量有关，温度越高、菌丝成熟度越高、接触空气的面越大，萤光越强。

自然界中还有一种假蜜环菌， 其与蜜环菌的主要区别是前者的子实体没有菌环，不能为天麻、猪苓提供营养。

2 蜜环菌的生长条件

蜜环菌常在夏秋季节生长于阔叶林中， 对生长环境要求比较严格，喜欢温暖、湿润、通风良好的环境，同时还需要一定的光照条件，疏松、肥沃、排水良好、酸碱适度的土壤条件，以及充足的水分和氧气。

1）温度。蜜环菌的菌丝体在5~30 ℃环境下均可生长， 但在18~24 ℃下生长最快， 生产中一般采用15~18 ℃低温培养发菌， 这个温度条件下培养出的蜜环菌菌丝体生长健壮。 菌丝和菌索在20~25 ℃下发出的荧光最强。低于5 ℃菌丝体进入休眠状态，高于30 ℃菌丝体停止生长， 超过34 ℃会导致菌丝体死亡。

2）湿度。 蜜环菌喜欢在潮湿、透气的条件下生长发育。 在自然界中空气湿度达到60%以上时，蜜环菌生长发育很好，空气湿度低于30%时，菌丝生长缓慢甚至停止生长。 人工培养蜜环菌的菌材（木质）含水量应保持在45%~60%，空气湿度保持在70%~85%。

3）氧气。 蜜环菌是好气性真菌，其菌丝、菌索和子实体生长发育都需要氧气， 同时菌索具有运送氧气的功能。因此，蜜环菌的菌索可以在固体或半固体培养基中穿透一定的距离， 这也是蜜环菌可以在湿透的段木中生存的原因。

4）光线。 蜜环菌的菌丝和菌索需要在暗光中培养，而子实体的形成则需要光线的刺激，子实体的生长发育需要散射光，否则生长不良，畸形或不孕。

5）酸碱度。蜜环菌的菌丝体在pH 值4.5~7 之间可以正常生长， 最适宜的pH 值为4.5~6.5，pH 值超过7 生长不良。因此微酸性环境最适合蜜环菌生长。

6）营养条件。蜜环菌可以木材中的纤维素、半纤维素和木质素等作为营养来源， 同时还需要一定的氮、磷、钾等元素，可选择栎树、桦树、苹果树等作为蜜环菌培养基质。

3 蜜环菌栽培种液体培育

3.1 培育时间 气温8～25 ℃均可， 最适气温15～26 ℃，从接种至菌丝长满需25～35 d。 陕西汉中地区枝条蜜环菌液体栽培种一般从10 月初开始生产，一直到次年4 月底结束。

3.2 原材料准备与处理

3.2.1 准备塑料瓶 枝条蜜环菌液体栽培种生产一般采用带海绵、透气瓶盖的塑料瓶，常用750 mL 塑料瓶，少量的用1 500 mL 塑料瓶，根据生产季节提前预备。

3.2.2 准备菌枝 培养蜜环菌的树种可选择桦类、栎类等阔叶树种。 秋后树体落叶后至第2 年发芽前收集直径1.5~2.5 cm 的枝条，用机器截成长3~4 cm的小段，截口呈45°。 装瓶前1~2 d 将菌枝在水中浸泡24~48 h，沥干水分备用。

3.3 生产技术

3.3.1 装瓶 采用人工或机器摇瓶的方式装瓶。 将浸泡后的菌枝装入塑料瓶中， 装入量一般为瓶子容积的4/5，750 mL 塑料瓶约需0.3 kg 枝条。 装好枝条后加入3~5 粒玉米粒，然后加满清水，盖上盖子。 当天加水当天灭菌，不能放置太长时间。

3.3.2 灭菌 将装好瓶的原料放入高压灭菌锅内灭菌， 开大火迅速将灭菌容器压力升至0.05 MPa，排气，排完气后将压力升至0.125 MPa，保持2.5~3 h。待压力下降至0.05 MPa 后再缓慢排气。 切不可在高压状态下快速排气， 以免瓶内水分溢出， 造成瓶内缺水。

3.3.3 冷却 灭菌完成后， 将菌瓶放入冷却车间自然降温。菌瓶移动过程中要保持直立，瓶内的水不能溢出。

3.3.4 接种 当菌瓶内温度降至25 ℃以下时便可以接种。 按照常规无菌操作在接种箱或接种室内进行。需要注意的是，枝条蜜环菌液体栽培种生产用的蜜环菌原种通常是固体或液体。 在接种时需要严格控制菌瓶内的水位：使用固体蜜环菌原种接种时，瓶内水位以刚刚和枝条平齐为宜， 接种后要求蜜环菌原种的菌块一半在水中一半露出水面； 使用液体蜜环菌原种接种时，瓶内水位以枝条露出水面1~2 cm为宜，接种后要求菌球（液体菌种中的菌丝结团）露出水面。这样操作有利于促进菌种快速萌发，提高成活率。

3.3.5 保温培养 接种后搬运菌瓶时务必要保持直立，轻拿轻放。 将菌瓶放入培养室内发菌培养，培养室温度控制在18~24 ℃， 一般25~35 d 可以长满菌瓶。蜜环菌长满瓶后，继续培养45~60 d，待菌丝由棕红色逐渐变成亮白色， 瓶内结块呈果冻状后方可打包销售。枝条蜜环菌栽培种菌种菌龄不足，播种后易被污染或菌丝不萌发。

3.3.6 留样保存 每个蜜环菌品种、 每个批次留样5~7 瓶， 于0~6 ℃下保存至正常生产条件下该批菌种生产出天麻或猪苓为止。

4 小结

科学应用枝条蜜环菌液体栽培种生产技术，可以提高蜜环菌的产量和质量，降低生产成本，减少环境污染。 生产过程中要严格控制培养条件，如温度、湿度、光照等，同时还要注意防止杂菌污染，保证蜜环菌的品质和产量。