胃癌组织中IL-32 与Apaf-1 蛋白的表达及意义

朱兴华，陈亚丽，郭燕

南通市肿瘤医院病理科，江苏南通 226361

胃癌是临床上发病率及病死率较高的消化道恶性肿瘤，其在我国发病率约为5.6%，在恶性肿瘤发病率中位居第2 位；病死率约为7.7%，位居恶性肿瘤病死率第3 位[1]。胃癌早期缺乏典型性症状，大部分患者早期均未能发现，而确诊时已发展为中晚期，预后差，远期生存率低，仅为7%～34%，早期胃癌5 年生存率高达90%以上，因此早期诊断对提高胃癌患者远期生存率有重要的意义[2]。白细胞介素-32（Interleukin-32, IL-32）是一种广泛表达的炎症细胞因子，其可加剧炎症，加快肿瘤生成。凋亡蛋白酶激活因子-1（Apoptotic Protease Activating Factor-1, Apaf-1）是一种促凋亡因子，在调节细胞凋亡中发挥着重要的作用。临床资料显示，IL-32与Apaf-1 蛋白参与肿瘤的发生和发展，对胃癌患者的早期诊断、早发现和早治疗有重要的意义[3]。本研究回顾性选取2019 年1 月—2022 年12 月南通市肿瘤医院收治的100 例胃癌患者的临床资料，分析胃癌组织中IL-32 与Apaf-1 的表达及意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性选取本院收治的100 例胃癌患者的临床资料，其中男64 例，女36 例；年龄＜60 岁27 例，≥60岁73 例；分化程度：高+中分化42 例，低分化58 例；浸润深度：＜肌层24 例，≥肌层76 例；TNM 分期：Ⅰ+Ⅱ期39 例，Ⅲ+Ⅳ期61 例；淋巴结转移情况：转移59例，未转移41 例。分别取同一患者的胃癌组织标本和正常（癌旁）胃黏膜标本，胃癌组织标本纳入胃癌组，正常胃黏膜标本作为对照，纳入癌旁组。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准 年龄≥18 岁；均给予胃癌根治术切除治疗，术后病理证实为原发性胃癌；临床病理资料均完整；术后生存时间≥3 个月；自愿参与并签署知情同意书。

1.2.2 排除标准 患其他原发性恶性肿瘤者；心肝肾功能异常者；近期接受放、化疗者；患血液系统疾病或自身免疫系统疾病者；精神障碍或意识异常者；依从性不高，配合度低者。

1.3 方法

1.3.1 试剂 采用美国Affinity 公司生产的IL-32 兔抗人多克隆抗体，采用美国Cell Signal 公司生产的Apaf-1 兔抗人多克隆抗体，同时采用武汉佰乐博生物技术有限公司生产的免疫组化（Streptavidinperosidase, SP）试剂盒。

1.3.2 染色方法 将备好的组织标本放入甲醛溶液中进行固定，脱水后给予石蜡包埋，之后进行切片，厚度约为4 μm，严格按照试剂盒说明书完成操作，将阳性胃癌切片作为阳性对照组，以磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照组。

1.4 观察指标

IL-32、Apaf-1 蛋白在低倍与高倍光学显微镜下显示主要定位于细胞质中，显微镜下观察到清晰的棕黄色颗粒或黄色颗粒即表示存在阳性反应。通过5 个不同高倍显微镜（×400）观察每一张切片，依据阳性细胞数占比结果与染色强度高低结果判定IL-32 和Apaf-1 蛋白的阳性表达情况。①阳性细胞数评分：0 分：阳性细胞数所占比例＜5%；1 分：所占比例为5%～＜25%；2 分：所占比例为25%～＜50%；3 分：占比≥50%。②染色强度高低结果评分标准：0 分：阴性，无阳性着色；1 分：弱阳性，呈现淡黄色；2 分：阳性，呈现棕黄色；3 分：强阳性，呈现棕褐色。上述两项评分结果相乘所得的结果为最终阳性表达结果，若最终评分＞1 分，则表示结果为阳性（+），若最终评分为0～1 分，则表示结果为阴性（-）。

1.5 统计方法

使用SPSS 22.0 统计学软件进行数据分析，计数资料（IL-32、Apaf-1 蛋白阳性表达率等）用例数（n）和率（%）表示，行χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌组与癌旁组IL-32、Apaf-1 蛋白阳性表达率比较

胃癌组IL-32 阳性表达率高于癌旁组，Apaf-1蛋白阳性表达率低于癌旁组，差异有统计学意义（P均＜0.05）。见表1。

表1 胃癌组与癌旁组IL-32、Apaf-1 蛋白阳性表达率比较[n（%）]

2.2 胃癌不同临床病理参数患者IL-32、Apaf-1 蛋白阳性表达率比较

胃癌患者不同性别、不同年龄IL-32、Apaf-1 蛋白阳性表达率对比，差异无统计学意义（P均＞0.05）。低分化癌患者、肿瘤浸润深度≥肌层患者、Ⅲ期及Ⅳ期患者、淋巴结转移患者的IL-32 阳性率高于高+中分化程度、浸润深度＜肌层、TNM 分期为Ⅰ+Ⅱ期以及无淋巴结转移患者，Apaf-1 蛋白阳性率低于高+中分化程度、浸润深度＜肌层、TNM 分期为Ⅰ+Ⅱ期以及无淋巴结转移患者，差异有统计学意义（P均＜0.05）。见表2。

表2 胃癌不同临床病理参数患者IL-32、Apaf-1 蛋白阳性表达率比较[n（%）]

3 讨论

胃癌是一种比较常见的恶性肿瘤，国内关于胃癌发病原因的研究较多，大多数认为与饮食因素、环境因素、遗传因素、癌前病变及幽门螺杆菌感染等有密切的关系，但目前该病仍未有明确的发病机制[4-5]。临床试验表明，胃癌的发病机制与炎症及细胞凋亡异常有密切的关系，其中炎症细胞因子IL-32 与促凋亡因子Apaf-1 蛋白是胃癌发生、演变及转移的关键因素[6-7]。

李佳欣等[8]在临床试验中对比正常胃黏膜上皮组织和胃癌组织的IL-32 与Apaf-1 蛋白表达情况，结果显示，IL-32 阳性表达率为（38.3% vs 70.0%），Apaf-1 蛋白阳性表达率为（75.0% vs 31.7%）（P均＜0.05），提示胃癌组织中IL-32 处于高表达水平，相反，Apaf-1 蛋白处于低表达水平，两者有明显的负相关关系，且两者与胃癌TNM 分期、分化程度、浸润深度、是否淋巴结转移显著相关。本研究结果显示，胃癌组织与正常组织IL-32阳性表达率分别为73.00%、35.00%（P＜0.05），提示胃癌组织中IL-32 呈现阳性高表达，而正常组织中IL-32 的表达量较少，与李佳欣等报道的IL-32 表达情况基本一致，究其原因，可能与IL-32 参与胃癌的发生及侵袭转移等有关。国内文献报道，约有25%的患者，其肿瘤的发生和癌变主要由慢性炎症所致，IL-32 是临床上新型的促炎症细胞因子，是多种炎症性疾病发生的主要原因，也是多种恶性肿瘤的病原之一[9-11]。IL-32 可通过激活激活蛋白-1、激活核因子κB、半胱氨酸天冬蛋白酶、活化p38 有丝分裂原蛋白激酶等途径促进恶性肿瘤的发生[12-13]。本研究显示，胃癌组织中Apaf-1 蛋白阳性表达率（29.00%）显著低于正常组织（77.00%）（P＜0.05），提示胃癌组织中Apaf-1 蛋白呈现低表达状态，而在正常组织中Apaf-1 蛋白呈现高表达状态，与李佳欣等[8]报道的Apaf-1 蛋白表达基本一致。Apaf-1 是一种广泛存在于人体正常组织中的促凋亡因子，对细胞凋亡具有显著的激活促进作用，其主要通过线粒体途径诱导和加快肿瘤细胞的凋亡，有效抑制癌细胞的生长和转移，而在胃癌组织中Apaf-1 蛋白呈现低表达状态，导致癌细胞凋亡存在阻碍，形成有利于癌细胞生存和繁殖的环境[14-16]。此外，本研究显示IL-32、Apaf-1 蛋白的表达与肿瘤浸润、分化、分期、转移等临床病理参数有密切的关系，与李佳欣等[8]报道基本一致，提示L-32 与Apaf-1 可反映肿瘤的生长和发展状况，两种因子可起到协同作用，加快胃癌细胞生长。

综上所述，在胃癌组织的生长和发展中，IL-32的高表达与Apaf-1 蛋白的低表达可加快胃癌组织的侵袭和转移，增加患者的病死率，因此及时监测IL-32 与Apaf-1 蛋白的表达状态，对患者的临床诊疗及预后改善有重要的作用，对降低病死率具有一定的积极意义。