2021—2022 年广州地区献血人群ABO 血型筛查结果分析

刘旭映 黄伯泉 廖芬芳 李仲平 梁浩坚 杜荣松 谢君谋 黄爱琼 王淏

(广州血液中心 广州市血液安全重点实验室，广东 广州 510095)

ABO、Rh 血型系统是人类血液系统中最重要的2 个血型系统，准确鉴定献血者血型是保障临床输血安全的首要前提，也是给献血者提供优质服务的需要。 我们统计分析了2021—2022 年本中心无偿献血者ABO、RhD 血型检测结果，得出广州地区献血人群ABO、RhD 血型的检测情况、ABO 亚型及稀有血型的构成及分布，并通过分析重复献血者血型正反不一致检出情况来了解各类亚型的漏检率，以此积累本地区献血人群血型生物学流行数据，为进一步提高献血者血型筛查的准确性，保障临床用血安全有效提供参考。

1 材料与方法

1.1 标本来源

2021 年1 月1 日—2022 年12 月31 日广州血液中心(包括中心城区及从化、花都、增城3 个集中检测点)无偿献血者标本共749 123 份，所有献血者均符合《献血者健康检查要求》(GB18467-2011)的相关要求。 采用EDTA-K2抗凝试管采集献血者标本，所有标本在检测前1 800×g 离心5 min。

1.2 试剂与仪器

抗-A/B 血型定型试剂(上海血液医药公司，批号:20200912、20201222、2021122)、RhD(IgM)血型定型试剂(北京金豪公司，批号:20200901103、20201201104、20220201101)、人ABO 血型反定型红细胞试剂(广东营安生物公司，批号:01210801、01211001、01221003)，STAR-CH8 全 自 动 加 样 仪(Hamilton 公司)、8420 离心机(久保田公司)、UNIVERSAL 320 台式平板离心机(Hettich 公司)、Thermostar 微孔板振荡孵育器(Thermo 公司)、340RT 酶标仪(Anthos 公司)，所有试剂均在有效期内使用，仪器设备均经计量部门校准合格。

1.3 方法

1.3.1献血者血型检测

ABO 血型及RhD 血型检测均参照参考文献[1-2]方法操作。 ABO 血型定型与RhD 血型初检使用96 孔微型板法，具体操作如下:使用全自动加样仪在96 孔血型板中按程序加样，手工轻拍混匀，平板离心机320×g 离心1 min，经微孔板振荡孵育器震荡后使用酶标仪判读结果，并由人工核对。 在ABO 正反定型判读中，把正定型凝集程度＜3＋或反定型凝集程度＜2＋的情况判读为凝集减弱，正/反定型出现意外凝集则判读为额外凝集反应，以上情况均判断为正反不一致标本。 对检测中所有RhD初筛阴性标本及正反不一致标本送检本中心临床输血研究所血型参比实验室进行确证实验，作为最终结果。 RhD 阴性确认时，使用抗体筛查细胞(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)检出意外抗体。

1.3.2数据分析

对无偿献血者标本中的重复献血者标本进行剔除(同1 献血者在2021—2022 年献血≥2 次的计为1 次)，计算剔除重复献血者后各类血型的占比。漏检率:对确证为ABO 亚型献血者的以往献血检测资料进行查询，剔除初次献血者后统计重复献血者(献血≥2 次)过往ABO 血型定型判读正反不一致的次数，计算漏检率(1-判读正反不一致的次数/累计检验次数)(在计算漏检率时，将具有相同血型血清学特征的各型亚型归为1 组，如A3、B3、A3B、AB3为1 组，数据合并统计，以“A3/B3”表示)。采用Microsoft Excel 2003 软件进行数据统计与图表绘制，计数资料采用(n，%)表示。

2 结果

2.1 献血者ABO 血型分布与RhD 阴性检出情况

献血者标本ABO 血型分布见表1。 RhD 血型初筛阴性标本3 366[3 366/749 123(0.45%)]，经RhD 阴性表型确认标本3 215 份[3 215/749 123(0.43%)]， RhD 变异型标本151 份[151/749 123(0.02%)]；剔除重复献血者后计算RhD 血型初筛阴性标本共2 277 份，其中RhD 阴性表型确认2 188份[2 188/2 277(96.09%)]，合并检出意外抗体标本30 份[30/2 188(1.37%)]，RhD 变异型标本89 份[89/2 277(3.91%)]。

表1 献血者标本ABO 血型分布情况(n，%)Table 1 Distribution of ABO blood groups in blood donor samples (n，%)

2.2 献血者标本检测ABO 血型正反定型不一致情况

共检测出506 份ABO 血型正反定型不一致标本，经血型血清确认其中ABO 正反一致357 份，正反不一致149 份(表2)，剔除重复献血者后各类亚型38 份(表3)。

表2 ABO 正反定型不一致标本血清学确认结果Table 2 Serological identification results of samples with ABO discrepancy between forward and reverse blood grouping

表3 献血者标本ABO 正反定型不一致亚型检出情况Table 3 Dectection of subtypes in blood donor samples with ABO discrepancy between forward and reverse blood grouping

2.3 重复献血者ABO 亚型漏检率分析见表4。

表4 重复献血者标本各类亚型漏检情况Table 4 Missed detection of various subtypes in repeat blood donor samples

2.4 意外抗体检出情况

共检出136 份意外抗体标本，剔除重复献血者后意外抗体标本检出128 份，检出率为25/10 万(128/513 291)，合并检出意外抗体检出的血型有:类孟买A 型4 份、类孟买B 型3 份、Bx5 份、ABx1份、RhD 阴性30 份。

3 讨论

2021—2022 年广州地区献血者ABO 血型的构成比例和RhD 阴性、RhD 变异型的检出率与广州地区2016—2019 年的情况基本一致[3]。 剔除重复献血者后共检出RhD 变异型标本89 份，占Rh 血型初筛阴性的3.91%(89/2 277)，略高于北京的3.82%[4]， 低 于 西 安 的 4.06%[5]、 石 家 庄 的6.84%[6]、宁夏的5.49%[7]。

ABO 基因编码区的突变引起A、B 抗原数量和/或质量的异常，导致在ABO 血型定型时出现正反定型不符或者凝集强度的改变[8-11]。 使用AB0抗血清试剂检测红细胞的典型阳性结果通常为3＋～4＋的强凝集，正定型凝集减弱极有可能是ABO亚型[12]。 通过对重复献血者疑难血型漏检情况分析(表4)，我们发现A3/B3和Ax/Bx的漏检率较高，这2 类亚型因其与单克隆抗体产生较强的凝集而容易被漏检[13]。 A3/B3在微板法正定型中的凝集程度一般在2＋～3＋，红细胞凝集块较大，凝集红细胞占一半以上，而反定型往往不存在意外ABO 抗体，因此容易被认为正反定型相符而忽略混合视野的存在。 Ax/Bx大多数伴有ABO 意外抗-A/B，反定型中会出现强弱不等的额外的血清凝集反应，本研究在统计剔除重复献血者检出的9 份Ax/Bx标本中，有5 份Bx 检出伴有意外抗-B。 在正定型中易被误判成“O”型的血型有Am/Bm、Ael/Bel及类孟买血型，其红细胞表面微弱的抗原需通过灵敏性更高的吸收放散试验来检测[14]，而其在反定型中的凝集反应通常表现正常。 Am/Bm不伴意外抗-A/B 的出现，表现出正定型为O 型，反定型为A/B 型的格局，这一特点使其不易被漏检(表4)。 类孟买血型是1 种较为罕见的血型，是由于α-1，2 岩藻糖基转移酶(α-1，2-fucosyItransferase gene，FUT1)基因突变导致红细胞表面H 抗原部分或完全缺失，而分泌液中存在H 物质。 多数类孟买表型是由于ABO正反定型不一致或存在意外抗体被发现[15]。 本地区2 年间检测的513 291 份剔除重复献血者的标本中，检测出12 份类孟买血型标本，类孟买A 型和类孟买B 型各6 份，检出率为2.3/10 万。 类孟买也可以出现在O 型个体中，但在常规血型检测中因其正反定型一致而不能从中筛查出来，通过红细胞或分泌液中检测出1 型H 抗原可以鉴定。 本研究统计的5 份AB 亚型标本(表2)，因其红细胞与抗-B反应凝集减弱，正定型表现为A 强B 弱，同时反定型表现为AB 型格局而被发现；3 份B(A)型标本则是因为红细胞与抗-A 反应凝集减弱，正定型表现为A 弱B 强，反定型表现为B 型格局而被发现。B(A)型在本研究统计中出现了40%的漏检率，提示我们在读取正定型结果时，需分时段多次判读，微型板在经过振荡器震荡后，弱凝集被打散，即时读取结果多为阴性，应静置3 ～5 min 后再观察结果，以避免弱凝集的漏检。

除ABO 亚型、意外抗体外，冷凝集素、补体致敏、直接抗体阳性、血清蛋白过多等也是导致血型正反定型不一致的常见因素[16-17]。 本研究统计显示，因弱/无红细胞反应的58 份正反定型不一致标本中，确证各类亚型55 份，提示正定型凝集减弱极有可能是因为ABO 亚型或类孟买型。 在215 份弱/无血清反应的标本中没有检出特殊血型，可能原因有:1)健康成人的ABO 抗体效价为4 ～2 048，差异较大[18-20]；2)方法学原因:待测血清与试剂红细胞的反应通常稍弱，同时使用机械震动仪的震动能力较强，对比手工试管法更容易出现弱血清反应的情况，可通过室温下孵育5 ～15 min、重复离心等操作来增强抗体的弱反应性。 在常规的血型检测试剂抗-A 能与A2细胞呈现强凝集，故A2亚型常表现为正反一致，黄可君等[21]报告广州地区A2亚型在A 型献血者中的频率为1.64%。 除A2/A2B 亚型外，本地区献血人群B 亚型的检出率最高，与国内多地报道一致[13，22-24]

综上所述，通过统计分析近2 年广州地区献血者ABO 及RhD 血型的相关数据，汇总血型筛查中容易疏忽和漏检的ABO 亚型凝集特征，借此提高实验室筛查能力和完善献血者血型信息，确保输血安全。