高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法测定一次性静脉留置针中双酚A 残留量*

刘 慧，王 健，李 奇，王紫芸，苟彦彦，许静远，徐 力△

（1.江苏省扬州市食品药品检验检测中心，江苏扬州 225000； 2.常熟理工学院生物与食品工程学院，江苏苏州 215500）

双酚A 化学名为2，2 - 二（4 - 羟基苯基）丙烷，是一种用于制备环氧树脂和聚碳酸酯的化工原料，普遍存在于各类塑料制品中，能干扰人体内分泌系统的功能，有胚胎毒性［1］和致畸性［2］，可能对青少年发育产生影响［3］。静脉留置针是连续性静脉输注患者最常接触的医疗器械，其三通接头和延长管均由塑料制成，存在残留双酚A 的可能性。由于长时间与人体接触，双酚A可能迁移到人体中［4-7］，对人体产生潜在危害。目前，用于分析双酚A的方法主要有液相色谱法［8］、气相色谱质谱联用法［9-10］和液相色谱质谱联用法［11-12］，其中液相色谱质谱联用法具有专属性强、灵敏度高、准确度高等特点，应用范围较广，在塑料制品、纺织品、食品和药品包装材料、环境监测、饮用水、饮料等各行业的应用均有报道。仅1篇文献报道高效液相色谱法测定一次性静脉留置针中双酚A的含量，方法检测限为0.211 μg/mL［13］。由于塑料医疗器械中双酚A的含量较低，常规色谱分析方法的检测限无法满足，需建立测定痕量双酚A 的专属、高效定量检测方法。目前，尚无针对一次性静脉留置针中双酚A残留量的规定，且未见液质联用法测定一次性静脉留置针中双酚A残留量的报道。本研究中参考食品行业相关标准［14］和文献［15- 19］，建立了测定一次性静脉留置针中双酚A 残留量的高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法，并对市售静脉留置针中双酚A的残留量进行检测。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

SCIEX Triple Quad 4500 型高效液相色谱-三重四极杆质谱仪（上海爱博才思分析仪器贸易有限公司）；XS205DU 型电子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度为十万分之一）；Milli- Q Refence 型超纯水仪（美国Millipore 公司）；KH - 300DV 型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司，功率为300 W，频率为40 kHz）；MiniSpin 5452型离心机（Eppendorf<中国>有限公司）。

1.2 试药

甲醇、乙腈（色谱纯，北京迪马科技有限公司）；氨水（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；水为超纯水；双酚A 对照品（中国食品药品检定研究院，批号为195003 - 201601，纯度为99.7%）；一次性静脉留置针（市售），样品信息见表1。

表1 样品信息Tab.1 Information of samples

2 方法与结果

2.1 色谱与质谱条件

2.1.1 色谱条件

色谱柱：Waters Acquity Premier BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流动相：0.05%氨水-甲醇（28∶72，V/V），等度洗脱3 min；流速：0.3 mL/ min；柱温：30 ℃；进样量：2 μL。

2.1.2 质谱条件

三重四极杆质谱；离子源：电喷雾电离（ESI）；扫描方式：负离子、多反应监测（MRM）模式；气帘气气压（CUR）：25 psi；离子化电压（ISVF）：4 500 V；喷雾气气压GS1：55 psi；辅助加热气气压GS2：55 psi；温度：550 ℃；接口加热：开；碰撞气（CAD）：Medium。双酚A 的离子对及质谱参数见表2。

表2 双酚A的离子对及质谱参数Tab.2 Ion pairs and mass spectrometry parameters of bisphenol A

2.2 溶液制备

取双酚A 对照品10.87 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，配制成质量浓度为0.108 4 mg/mL的对照品贮备液。精密量取对照品贮备液1 mL，置100 mL 容量瓶中，加甲醇定容，即得质量浓度为1.084 μg/ mL 的对照品溶液。取一次性静脉留置针软管适量，剪碎，取1.5 g，精密称定，加乙腈10 mL，超声提取（频率为40 kHz，温度为20 ℃）50 min，取1.5 mL提取液，置离心管中，离心（转速为12 000 r/min）15 min，氮气吹干，加500 μL甲醇复溶，离心（转速为12 000 r/min）5 min，取上清液，0.22 μm 微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。以甲醇为空白溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：MRM 模式下对m/z为227.1/ 133.0的离子对进行定量检测。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相同保留时间处有峰出现，表明方法专属性良好。质谱图见图1。

1.双酚AA.空白溶液（甲醇） B.对照品溶液 C.供试品溶液图1 高效液相色谱-三重四极杆串联质谱图1.Bisphenol AA.Blank solution（methanol） B.Reference solution C.Test solutionFig.1 HPLC - MS / MS spectrograms

线性关系考察：取2.2 项下双酚A 对照品溶液，加甲醇稀释成质量浓度分别为5.42，10.84，21.68，54.20，108.4，216.8 ng/mL 的系列标准溶液，按2.1 项下色谱与质谱条件进样测定，以峰面积（A）为纵坐标、双酚A 质量浓度（C，ng/ mL）为横坐标进行线性回归，得回归方程A=0.098 8C+0.037 1（r=0.999 9，n=6）。结果表明，双酚A的质量浓度在5.42～216.8 ng/mL范围内与峰面积线性关系良好。

检测限与定量限确定：取2.2 项下对照品溶液适量，加甲醇稀释成系列质量浓度的溶液，按2.1 项下色谱与质谱条件进样测定，以信噪比（S/N）为10 时的质量浓度为定量限，以S/N为3 时的质量浓度为检测限。结果定量限为1.084 ng/mL，检测限为0.108 4 ng/mL。

精密度试验：取质量浓度分别为5.42，21.68，108.4 ng/mL 的对照品溶液各适量，按2.1 项下色谱与质谱条件于1 d内连续进样测定5次，或分别连续进样测定3 d，记录峰面积。结果日内精密度试验结果的RSD分别为2.40%，2.37%，1.83%（n=5），日间精密度试验结果的RSD分别为3.51%，2.89%，2.64%（n=3），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取粉碎后的样品（批号为20220602），按2.2项下方法制备供试品溶液，平行6份，按2.1项下色谱与质谱条件进样测定，根据回归方程计算样品中双酚A 的残留量。结果残留量为97.62 mg/ g，RSD为0.59%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取粉碎后的样品（批号20220602）1.5 g，精密称定，精密加入一定量的双酚A 对照品，按2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱与质谱条件进样测定6次，计算加样回收率。结果见表3。

表3 加样回收试验结果（n=6）Tab.3 Results of the recovery test（n = 6）

2.4 样品残留量测定

取粉碎后的样品适量，精密称定，按2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱与质谱条件进样测定，根据回归方程计算样品中双酚A 的残留量。结果编号为SX 的样品中双酚A 的残留量最高，其他编号样品中双酚A的残留量较低或未检出。详见表4。

表4 样品中双酚A残留量测定结果（ng/g）Tab.4 Results of the content determination of bisphenol A residues in samples（ng / g）

3 讨论

3.1 质谱条件选择

取双酚A 对照品溶液适量，直接进样到离子源中，在负离子母离子、全扫描（Q1 SCAN）模式下进行扫描，得到双酚A 的分子离子峰，在负离子产物离子扫描（Product Ion）模式下对双酚A 分子离子峰进行扫描，得到双酚A 的碎片分子离子峰。分别优化去簇电压（DP）和裂解电压（CE）获得最佳电压，在DP 为-91 V，CE 分别为-32 eV 和-24 eV 时，m/z133.0 和m/z211.2 碎片离子的强度较大。翟美娟等［15］采用超高效液相色谱-质谱法检测药包材中的双酚A 时发现，m/z为133.1 的碎片离子强度较大，适合作为定量离子。故选择m/z133.0 和211.2 的碎片离子分别作为定量及定性检测离子。

3.2 色谱条件选择

流动相的组成会影响双酚A 定量检测的准确度［20］。本研究中流动相系统比较了甲醇和乙腈对分离效果的影响，甲醇作为流动相时，色谱峰响应值较高；比较甲醇- 水和甲醇- 0.05%氨水发现，后者色谱峰峰形好，不分叉，响应值较高。林胜军等［21］的研究发现，以乙腈- 水或甲醇- 水为流动相时，双酚A 的响应值低于甲醇-5 mmol/L 乙酸铵。可能是由于双酚A 中含有酚羟基，显弱酸性，而流动相中添加碱性物质（乙酸铵或氨）后可促进双酚A的离子化，从而提高响应值。故选择甲醇-0.05%氨水作为流动相。

3.3 方法评价

本研究中建立的方法操作简便、灵敏度高、重复性好、结果准确，可用于一次性静脉留置针中双酚A 的残留量测定。可为有关部门制订留置针临床使用分类指导原则提供理论依据，有利于提高医疗器械生产企业的产品质量。