HPLC 法测定44%砜吡草唑·异丙隆悬浮剂中有效成分含量

李晓昀，谭盼，崔郭勤

(广西速竟科技有限公司，南宁 530007)

砜吡草唑(pyroxasulfone)是日本组合化学株式会社开发的植物细胞分裂抑制剂，主要登记用于防除玉米、大豆及小麦等作物田禾本科和阔叶杂草[1]，而异丙隆(isoproturon)属取代脲类除草剂，主要登记用于防除麦田禾本科杂草和一些阔叶杂草[2]。2 者复配不仅能扩大杀草谱，降低使用量，提高安全性，而且还能延缓杂草抗药性的发生发展。关于砜吡草唑和异丙隆单一成分的检测分析已有报道[3-6]，但2 者同柱分析目前尚未见有公开报道。基于此，笔者以44%砜吡草唑·异丙隆悬浮剂为研究对象，采用高效液相色谱法开展了砜吡草唑和异丙隆同柱分析测定方法的研究，以期为该产品的质量控制提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

98%砜吡草唑标准品(国家农药质量监督检验中心)；98%异丙隆标准品(北京勤诚亦信科技开发有限公司)；44%砜吡草唑·异丙隆悬浮剂(广西田园生化股份有限公司自制)；甲醇(色谱级，美国天地色谱试剂)；色谱级超纯水：实验室采用专用超纯水机制备仪(四川优普超纯科技有限公司)制备。

U3000 型高效液相色谱仪配集成自动进样器、柱温箱和可变波长检测器(美国赛默飞公司)；BCE95I-10CN 电子分析天平(赛多利斯科学仪器有限公司)；KQ-250DE 数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；过滤器，滤膜孔径0.45 μm(津腾)。

1.2 色谱操作条件

色谱柱为C18不锈钢柱，250 mm×4.6 mm(i.d.)，填料0.45 μm；流动相为ψ(甲醇∶水)=60∶40(体积比)，经0.45 μm 微孔滤膜过滤后超声波脱气20 min；流量为1.0 mL/min；柱温为30 ℃；检测波长为220 nm；进样体积为5 μL。在该色谱条件下砜吡草唑和异丙隆的保留时间分别约为8.5、10.1 min。HPLC 色谱如图1 所示。

图1 44%砜吡草唑·异丙隆悬浮剂中砜吡草唑和异丙隆的高效液相色谱图

1.3 测定步骤

1.3.1 标样溶液配制

称取砜吡草唑标样0.05 g(精确至0.000 01 g)于50 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，超声振荡5 min，取出恢复至室温，摇匀，此为A 溶液。称取异丙隆标样0.05 g (精确至0.000 01 g)于另一50 mL 容量瓶中，准确吸取上述A 溶液5 mL 于该容量瓶中。用甲醇稀释至刻度，超声振荡5 min，取出恢复至室温，摇匀备用。

1.3.2 试样溶液配制

称取试样0.13 g(精确至0.0002 g)于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，超声振荡5 min，取出恢复至室温，摇匀，经微孔过滤器过滤，滤液待测。

1.3.3 测定方法

在1.2 色谱操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2 针响应值变化小于1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.3.4 计算方法

将测得的2 针试样溶液以及试样前后2 针标样溶液中砜吡草唑或异丙隆的峰面积分别平均。试样中砜吡草唑或异丙隆的质量分数X1(%)按下式计算。

式中：A1为标样溶液中砜吡草唑或异丙隆峰面积的平均值(mAU)；A2为试样溶液中砜吡草唑或异丙隆峰面积的平均值(mAU)；m1为砜吡草唑或异丙隆标样的质量(g)；m2为试样的质量(g)；Pi为标样中砜吡草唑或异丙隆的质量分数(%)；f 为标样稀释因子(计算异丙隆时f=1；计算砜吡草唑时f=0.1)。

2 结果与讨论

2.1 流动相的选择

分别用不同溶剂比例作为流动相，对试样进行分离，结果表明：甲醇和水对助剂有很好的分离效果。当甲醇+水=60+40(体积比)作流动相时，砜吡草唑和异丙隆分离效果比较好，峰形好，分离时间短。因此选取甲醇-水混合溶剂体系作为流动相。

2.2 紫外吸收波长的选择

分别对砜吡草唑和异丙隆进行紫外吸收光谱扫描，如图2 所示。可见，砜吡草唑在199.19、225.94 nm 时，有较大吸收峰，而异丙隆在206.85、241.81 nm 有较大吸收峰。考虑到2 种有效成分配比和吸光度值等综合因素，选择220 nm 作为检测波长。

图2 异丙隆(左)和砜吡草唑(右)紫外吸收波长图

2.3 方法线性相关性

砜吡草唑：准确称取0.05 g(精确到0.0002 g)的砜吡草唑标准品，置于50 mL 容量瓶中，经甲醇定容后，移取5 mL 于25 mL 容量瓶中，甲醇定容，得到质量浓度为0.2 mg/mL 的砜吡草唑标准溶液。再分别移取0.5、4、5、6、10 mL 溶液到10 mL 容量瓶，定容，稀释成0.01、0.08、0.1、0.12、0.2 mg/mL的标准溶液，按照1.2 的高效液相色谱操作条件分别进样测定。以砜吡草唑质量浓度为横坐标，紫外光谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。在设定的质量浓度范围内，砜吡草唑质量浓度与其相应峰面积之间呈现出较好的线性相关性，其拟合的线性方程为y=95.515 95x-0.013 11，线性相关系数r=0.9999。

异丙隆：准确称取0.5 g(精确到0.0002 g)的异丙隆标准品于25 mL 容量瓶中，甲醇定容，得到质量浓度为2 mg/mL 的标准溶液。取一定量的该标准溶液，分别稀释成0.1、0.8、1、1.2、2.0 mg/mL 的标准溶液，按照1.2 的高效液相色谱操作条件分别进样测定。以异丙隆质量浓度为横坐标，紫外光谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线。在设定的质量浓度范围内，异丙隆质量浓度与其相应峰面积之间呈现出较好的线性相关性，其拟合的线性方程为y=168.202 44x+1.233 04，线性相关系数r=0.9999。

2.4 方法精密度

准确称取5 份44%砜吡草唑·异丙隆悬浮剂样品，在高效液相色谱条件下进行测定，结果如表1所示。砜吡草唑的有效成分平均值为4.0%，标准偏差为0.04%，变异系数为1.07%；异丙隆的有效成分平均值41.1%，标准偏差是0.05%、变异系数为0.1421%，表明该测定方法具有较高的精密度，符合质量控制的基本要求。

表1 方法精密度测定

2.5 方法准确度

在已知含量的44%砜吡草唑·异丙隆悬浮剂样品中，分别加入不同量的砜吡草唑和异丙隆标准品，在1.2 色谱条件下测定样品含量，计算回收率，结果如表2 所示。砜吡草唑的平均回收率为99.78%，异丙隆的平均回收率为99.50%，表明该测定方法具有较高的准确度。

表2 方法准确度(回收率)测定

3 结论

本文采用同柱分离方法建立了同时检测44%砜吡草唑·异丙隆悬浮剂中2 种有效成分的高效液相色谱分析方法，该方法操作简单、方便、快捷，具有良好分离效果及线性关系，准确度和精密度符合分析方法基本要求，可用于制剂产品中砜吡草唑和异丙隆的定量分析。