外周血miR-27a、miR-146a-5p水平与妊娠期糖尿病患者妊娠结局的关系

汤倩倩, 张庆, 王燕, 李爱萍

郑州大学第二附属医院妇产科(河南郑州 450014)

妊娠期糖尿病(GDM)是一种常见妊娠期并发症,患者血糖调节能力、免疫功能、心肺功能、脂代谢功能等出现异常,易引发巨大儿、早产等不良妊娠结局,严重威胁母婴健康[1]。微小核糖核酸(miR)是一种长约22 nt的非编码核糖核酸,在病毒、高等哺乳动物、植物中广泛存在[2]。相关研究指出,miR参与细胞分化、凋亡、增殖等,与GDM的发生、发展密切相关,并可对妊娠结局造成影响[3]。其中微小核糖核酸-27a(miR-27a)可加剧胰岛素抵抗,影响糖脂代谢[4]。而微小核糖核酸-146a-5p(miR-146a-5p)最初被认为具有免疫调节作用,后有学者报道,其表达水平在糖尿病患者中明显下降[5]。但现阶段,临床对miR-27a、miR-146a-5p与GDM患者妊娠结局的关系缺乏研究。基于此,本研究检测妊娠结局良好、妊娠结局不良患者的miR-27a、miR-146a-5p水平,探讨以上指标与GDM患者妊娠结局的关系。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性选取2020年1月至2022年12月我院接收的60例GDM患者当作研究对象,依照妊娠结局划分成不良组(n=29)、良好组(n=31)。

纳入标准:(1)符合《妇产科学(第8版)》[6]中GDM诊断标准,经B超、葡萄糖耐量试验等检查证实;(2)孕周≥28周;(3)年龄20～35岁;(4)自然受孕,单胎;(5)配合度高;(6)临床资料齐全。

排除标准:(1)伴有恶性肿瘤、重要脏器功能严重不全、心血管疾病、凝血功能障碍、血液系统疾病、免疫系统疾病、急性炎症;(2)伴有认知障碍、精神疾病、视听障碍;(3)合并其他妊娠期并发症;(4)合并其他影响糖代谢的疾病;(5)妊娠前患有糖尿病;(6)入组前接受过相关治疗;(7)妊娠期间检查结果显示胎儿异常;(8)有不良妊娠史;(9)近期有重大外伤史、手术史。本研究经我院医学伦理委员会审核通过,且患者签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 一般信息收集 询问所有入选者年龄、孕前体重、身高、孕周、生产史、吸烟史、饮酒史等一般信息,计算孕前体质指数[体重(kg)/身高2(m2)]。

1.2.2 外周血miR-27a、miR-146a-5p水平检测 所有入选者均于入组后第2天,晨起空腹抽取5 mL外周静脉血,置于冻存管,放于-80℃冰箱内待检。以上海羽哚生物科技有限公司提供的RNA提取试剂盒提取血液中总RNA,以紫外分光光度计对总RNA的纯度、浓度进行检测,留存吸光度值1.8～2.0的样本。以上海科敏生物科技有限公司提供的逆转录试剂盒逆转录RNA为cDNA,保存于-20℃下备用。使用Primer Premier 5.0进行引物设计,由上海吉玛生物有限公司合成。miR-27a、miR-146a-5p引物序列见表1。实时荧光定量PCR反应体系为20 μL,反应条件如下:95℃预变性30 s;94℃ 5 s,60℃ 34 s,72℃ 5 s,40个循环。均以U6为内参,使用2-ΔΔCt法计算miR-27a、miR-146a-5p表达水平。

表1 miR-27a、miR-146a-5p引物序列

1.2.3 其他临床与实验室指标检测 血压水平:嘱咐所有入选者测量前切勿饮用浓茶、咖啡,休息15 min,测量时保持手掌向上,高度与胸口持平,以电子血压计(日本欧姆龙公司,型号:HBP-9021)测定收缩压(SBP)、舒张压(DBP),连续测量3次,最终取平均值。肝功能、血脂水平:抽取空腹静脉血,以全自动生化分析仪(德国西门子公司,型号:Atellica CH930)测定肝功能[天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)]、血脂水平[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)]。

1.2.4 不良妊娠结局判定标准 不良妊娠结局包括巨大儿、早产、新生儿低血糖、羊水过多、胎膜早破。巨大儿是指体重>4 kg的新生儿;早产是指孕周<37周生产;新生儿低血糖是指血糖值<2.2 mmol/L;羊水过多是指妊娠期间羊水量>2 000 mL;胎膜早破是指分娩前胎膜破裂[7-9]。

2 结果

2.1 GDM患者妊娠结局单因素分析 两组年龄、孕周、孕前体质指数、生产史、吸烟史、饮酒史、AST、ALT、SBP、DBP比较差异无统计学意义(P>0.05),两组TC、TG、miR-27a、miR-146a-5p比较差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 GDM患者妊娠结局单因素分析

2.2 GDM患者妊娠结局logistics多因素回归分析 以GDM患者是否发生不良妊娠结局为因变量,以TC、TG、miR-27a、miR-146a-5p水平为自变量,行logistics多因素回归分析,赋值见表3,结果显示,miR-27a、miR-146a-5p为GDM患者发生不良妊娠结局的危险因素(P<0.05),见表4。

表3 GDM患者妊娠结局logistics多因素回归分析的变量赋值表

表4 GDM患者妊娠结局logistics多因素回归分析

2.3 外周血miR-27a、miR-146a-5p水平与GDM患者妊娠结局的相关性 Spearman相关性分析结果显示,外周血miR-27a水平与不良妊娠结局发生呈正相关,外周血miR-146a-5p水平与不良妊娠结局发生呈负相关(P<0.05),见表5、图1。

图1 miR-27a、miR-146a-5p预测GDM患者妊娠结局的ROC曲线

表5 外周血miR-27a、miR-146a-5p水平与GDM患者妊娠结局的相关性分析

2.4 miR-27a、miR-146a-5p对GDM患者妊娠结局的预测价值 以GDM患者不良妊娠结局为阳性样本,以良好妊娠结局为阴性样本绘制ROC曲线,结果显示,miR-27a、miR-146a-5p预测GDM患者妊娠结局的AUC为0.915、0.902,联合预测的AUC最大,为0.979,见表6、图1。

表6 miR-27a、miR-146a-5p对GDM患者妊娠结局的预测价值

3 讨论

GDM的发生主要是随着孕周增加,机体对葡萄糖的需求量增大,若胰岛素分泌不足,将出现胰岛素抵抗,加之运动缺乏、饮食不当,会导致代谢异常,进而引发该疾病。GDM危害较大,既会造成不良妊娠结局,又会增加产妇病死风险。相关文献报道,加强产前检查能有效减少不良事件发生,改善GDM患者妊娠结局[10]。因此,探寻影响GDM患者妊娠结局的敏感生物标志物十分重要。

miR可由胎盘分泌,并稳定存在于母体血液中,可调控细胞分化、凋亡、增殖、前移及糖脂代谢等,在妊娠期病理学变化(包括GDM发病、胎盘发育异常、胎儿血管内皮细胞受损等)中发挥重要作用,极大影响GDM患者健康及胎儿生长发育[11]。Poirier等[12]指出,在GDM患者中miR发挥代谢与发育调节剂的作用,可能参与GDM发病,并影响妊娠结局。miR-27a属基因间区域miR,具有促炎、促进血管生成、调节机体代谢、调控细胞分化与增殖等作用[13]。现有研究指出,miR-27a是过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的负调节因子和直接靶标,PPAR-γ发挥调节胰岛素敏感性、脂质代谢的作用,外周血miR-27a过表达可降低PPAR-γ水平,影响脂质代谢,阻碍脂肪细胞分化,造成脂肪组织堆积[14]。miR-27a还参与葡萄糖代谢调节,其水平异常升高可阻止葡萄糖摄取、消耗,造成葡萄糖代谢异常,出现胰岛素抵抗。Yu等[15]研究结果显示,miR-27a可能参与糖脂代谢异常、细胞外基质沉积、氧化应激等糖尿病形成的病理过程。Radojii等[16]研究发现,GDM患者miR-27a水平明显较健康人群高,且miR-27a水平与糖化血红蛋白浓度呈正相关,miR-27a具有诊断GDM的潜力。Choi等[17]也指出,miR-27a多态性可能是预测2型糖尿病风险的潜在标记。本研究发现,外周血miR-27a水平在不良组患者中表达较高,高水平miR-27a是不良妊娠结局的危险因素,进一步行Spearman相关性分析,结果显示,外周血miR-27a水平与不良妊娠结局发生呈正相关,提示miR-27a水平上升可能加重GDM病情,促进妊娠不良结局发生。

miR-146a-5p是一种多功能miR,参与免疫反应、炎症反应、恶性肿瘤发病等多种病理过程[18]。本研究数据显示,良好组外周血miR-146a-5p水平较不良组高,进一步行logistics多因素回归分析、Spearman相关性分析,结果显示,miR-146a-5p为GDM患者发生不良妊娠结局的危险因素,外周血miR-146a-5p水平与不良妊娠结局发生呈负相关,提示检测miR-146a-5p水平可初步预测不良妊娠结局。分析原因在于,一方面,miR-146a-5p可调控细胞因子,监管Toll样受体(TLR)信号,发挥免疫调节作用,其低表达会增加炎性因子分泌量,核因子-κB是重要转录调控因子,对炎性因子、生长因子、趋化因子等靶基因表达发挥调控作用,miR-146a-5p还可作用于核因子-κB通路,从而促进糖尿病发生与发展;另一方面,miR-146a-5p可提高脂肪酸活性,促进胰岛β细胞凋亡,维持胰岛素分泌功能,其水平异常下降易引发胰岛功能障碍,加剧胰岛素抵抗,进而诱发不良妊娠结局[19-21]。另外,ROC曲线显示,联合预测的AUC、敏感度高于miR-27a、miR-146a-5p单一方法,进一步说明外周血miR-27a、miR-146a-5p水平与GDM患者妊娠结局有关,且各指标联合使用可提升预测价值。

综上所述,外周血miR-27a、miR-146a-5p水平与不良妊娠结局发生有关,且联合检测对妊娠结局具有较高预测价值,有助于GDM患者妊娠结局的早期判断,为防治工作开展提供指导,以减轻GDM对母婴健康的损伤。但本研究存在纳入病例数较少、纳入病例具有一定随机性等不足,后续有待增加样本量深入研究,以提高所得结论的客观性、科学性。

利益相关声明:所有作者声明不存在利益冲突。

作者贡献说明:汤倩倩负责论文撰写;张庆负责资料收集;王燕负责统计学分析;李爱萍负责项目指导、论文审校。