肿块型乳腺癌患者肿瘤组织中Ki-67表达与超声特征的相关性

马新乐，徐 杰，秦金霞

(新乡市中心医院超声科一/新乡医学院第四临床学院,河南 新乡 453000)

乳腺癌为女性常见恶性肿瘤,肿块型乳腺癌患者发病早期以患侧乳房出现单发、无痛小肿块为主要表现,且肿块质硬、表面不光滑,与周围组织无明显分界,在乳房内不易被推动,多发于乳房外上象限[1-2]。肿块型乳腺癌早期症状不典型,容易漏诊和误诊,对后续的治疗效果影响较大。目前常规超声、超声造影(contrast-enhanced ultrasound,CEUS)、剪切波弹性成像(shear wave elastography,SWE)等已成为诊断乳腺疾病的重要检查方法[3-4]。既往研究发现,肿瘤分子生物学指标会对患者的病理学和影像学产生影响[5]。Ki-67为细胞增殖相关核抗原,其高表达提示肿瘤增殖速度加快,并与肿瘤恶性程度、侵袭能力呈正相关,对预后评估、疗效预测以及指导方案制定意义重大[6-7]。超声特征联合Ki-67表达可在一定程度提高肿块型乳腺癌诊断结果的准确性。既往研究仅分析了单独或联合应用CEUS、SWE、常规超声特征与Ki-67表达的相关性,但联合CEUS、SWE、常规超声的定性、定量特征预测Ki-67表达的研究鲜见报道。基于此,本研究分析了肿块型乳腺癌组织中Ki-67表达与超声特征的相关性,以期为肿块型乳腺癌的临床诊断和治疗方案制定提供参考,现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2020年1月至2022年12月新乡市中心医院收治的肿块型乳腺癌患者90例(90个肿块)为研究对象。患者均为女性,年龄为35～69(57.86±5.95)岁。病例纳入标准:(1)经临床病理学诊断为肿块型乳腺癌;(2)年龄≥18岁;(3)有完整穿刺/手术前多模态超声检查资料;(4)有完整的病理及临床资料。排除标准:(1)病灶最大直径>5 cm者;(2)有假体植入者;(3)术前接受内分泌治疗、新辅助化疗、放射治疗者;(4)合并其他类型恶性肿瘤者;(5)患有精神疾病或认知障碍者。

1.2 超声检查

患者取仰卧位,双臂上举,将乳腺和腋窝暴露出来,使用L15-4线阵探头进行多切面、多角度二维灰阶超声扫查,确定病灶位置,并存储正交切面图像。打开彩色多普勒血流显像(color doppler flow imaging,CDFI)模式,存储血流最丰富的切片图像;打开SWE模式,切换L10-2线阵探头,探头涂抹耦合剂,患者屏气,图像稳定后冻结、存储图像;选取CDFI上有显著病灶血流特征的切面进行CEUS检查,将造影剂SonoVue与生理盐水(5 mL)充分混合为悬浊液,首先静脉团注2.4 mL悬浊液,生理盐水快速推送,观察肿块横切面显影,再次推注2.4 mL悬浊液,观察肿块纵切面,记录3 min动态过程。由2名具有5 a以上工作经验的医师独立判定检查结果,结果不一致时经过协商达成一致。双盲法分析CEUS定性和定量特征、SWE定性和定量特征及超声显像特征。

1.3 免疫组织化学法检测肿块型乳腺癌组织中Ki-67的表达

取患者切除的病理组织标本经甲醛固定、石蜡包埋后切片,苏木精-伊红染色后于光学显微镜下观察细胞形态。采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶联结法染色:切片脱蜡、抗原修复、蒸馏水漂洗、置入磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)、加兔单克隆抗体、PBS漂洗、二氨基联苯胺显色、漂洗、复染、封片,用PBS代替一抗作为阴性对照,已知阳性切片作为阳性对照。细胞核中出现棕黄色均匀颗粒为Ki-67表达阳性。根据国际乳腺癌会议专家共识[7],阳性细胞数占比≥14%为高表达,<14%为低表达。根据Ki-67表达将患者分为Ki-67高表达组(n=53)和Ki-67低表达组(n=37)。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 Ki-67高表达组与Ki-67低表达组患者CEUS定性特征比较

Ki-67高表达组CEUS灌注缺损患者占比显著高于Ki-67低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);2组患者的CEUS边界、均匀性、增强水平、增强后病灶范围、方向比较差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表1。

表1 Ki-67高表达组与Ki-67低表达组患者CEUS定性特征比较

2.2 Ki-67高表达组与Ki-67低表达组患者CEUS定量特征比较

Ki-67高表达组患者的峰值强度(maximum of intensity,Imax)、上升时间(rise time,RT)、半降时间(half time,HT)显著高于Ki-67低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);2组患者的到达时间(arrival time,AT)、达峰时间(time to peak,TTP)、平均通过时间(mean transit time,mTT)比较差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表2。

表2 Ki-67高表达组与Ki-67低表达组患者CEUS定量特征比较

2.3 Ki-67高表达组与Ki-67低表达组患者SWE定性特征比较

Ki-67高表达组具有SWE硬环征患者占比显著高于Ki-67低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);2组具有SWE黑洞征患者占比比较差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表3。

表3 Ki-67高表达组与Ki-67低表达组患者SWE定性特征比较

2.4 Ki-67高表达组与Ki-67低表达组患者SWE定量特征比较

Ki-67高表达组患者病灶与周围组织弹性模量比值(elastic modulus ratio between lesions and surrounding parenchyma,Eratio)水平显著高于Ki-67低表达组,差异有统计意义(P<0.05);2组患者的最大弹性模量值(maximum elastic modulus,Emax)、平均弹性模量值(average elastic modulus value,Emean)、最小弹性模量值(minimum elastic modulus,Emin)比较差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表4。

表4 Ki-67高表达组与Ki-67低表达组患者SWE定量特征比较

2.5 Ki-67高表达组与Ki-67低表达组患者CDFI特征比较

Ki-67高表达组CDFI下病灶大小为2～5 cm、边缘有毛刺患者占比显著高于Ki-67低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);2组患者CDFI下病灶形状、方位、钙化情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表5。

2.6 肿块型乳腺癌患者超声特征与Ki-67表达的关系logistic回归分析结果

以肿块型乳腺癌组织中Ki-67的表达为因变量(Ki-67高表达赋值1,Ki-67低表达赋值0),以表1至表5中P<0.05的指标为自变量,建立非条件logistic回归模型,结果显示,灌注缺损、硬环征、边缘有毛刺与肿块型乳腺癌患者Ki-67高表达有关(P<0.05)。结果见表6。

表6 肿块型乳腺癌患者超声特征与Ki-67表达的关系

3 讨论

目前,乳腺癌的具体发病机制尚未明确,因此临床中缺乏有效预防措施,加之生活方式的变化,我国近年来乳腺癌的发病率逐年升高[8-9]。而随着精准化医疗和个体化差异治疗的实施,传统的乳腺癌检查方案如常规超声、钼靶等已无法满足日常诊疗工作需求,有学者逐渐将常规超声检查与分子生物学相结合,以提高临床诊疗效果[10]。Ki-67作为细胞核的核增殖相关蛋白,半衰期短,在细胞有丝分裂晚期迅速降解,具有良好的稳定性和增殖活性,是临床中已经明确的与细胞增殖相关的标志物,其在多种疾病的诊断、疗效判断和预后评估中发挥重要作用。部分学者通过免疫组织化学法检测Ki-67表达,结果发现,Ki-67表达水平与直肠癌、肝癌的发病和进展相关[11-12],因此,推测其表达水平可能与乳腺癌临床分期存在相关性。本研究拟通过分析超声特征包括CEUS定性和定量特征、SWE定性和定量特征及超声显像特征与肿块型乳腺癌患者病理标本Ki-67表达的相关性,为临床诊治该病提供更多的超声影像学信息。

本研究结果显示,Ki-67高表达组CEUS灌注缺损患者占比显著高于Ki-67低表达组,而灌注缺损部分多为低度恶性细胞、变性坏死组织、纤维化成分,这与其他研究结果存在一致性[13]。可能原因是Ki-67高表达组患者的肿瘤细胞相对活跃,若微血管形成难以适应快速增殖,表现为瘤体缺血坏死[14];且血管内存在的肿瘤细胞可造成血流不畅、局部肿瘤组织缺血,导致CEUS灌注缺损的发生[15]。本研究结果发现,Ki-67高表达组患者CEUS下Imax、RT、HT显著高于Ki-67低表达组,提示病灶区域内造影剂分布增多,可能与Ki-67高表达可增加肿瘤新生血管数量和新生血管密度,进而提升微血管通透性,使造影剂Imax升高有关[16];Ki-67高表达组具有SWE硬环征患者占比显著高于Ki-67低表达组,可能是因为Ki-67高表达可促使病灶周围间质胶原纤维反应性增生,增加病灶边缘硬度,使其边缘剪切波能量衰减,降低病灶内部区域剪切波振幅而形成硬环征[17];此外,本研究结果显示,Ki-67高表达组患者SWE下Eratio水平显著高于Ki-67低表达组,这可能是由于Ki-67表达与病灶恶性程度有关,癌细胞浸润周围组织,诱发纤维组织反应性增生,导致肿块硬度较正常组织升高,从而使Eratio水平升高[18]。鉴于Ki-67高表达患者的肿块硬度较高,恶性程度较高,其对周围组织有较强侵袭性,肿瘤细胞极易通过浸润而诱发纤维组织反应性增生,导致肿块边缘形成长短不一、混杂的粗细放射状短低回声,表现出毛刺状边缘[19]。本研究logistic回归分析结果显示,灌注缺损、硬环征、边缘有毛刺与肿块型乳腺癌患者Ki-67高表达有关,提示肿块型乳腺癌超声特征对Ki-67表达有一定的预测价值。

4 结论

肿块型乳腺癌的超声特征对Ki-67表达有预测作用,其中灌注缺损、硬环征、边缘有毛刺与Ki-67阳性表达具有相关性,可为临床评估Ki-67表达情况提供参考。