多血型系统抗体鉴定和交叉配血策略一例抗-f合并抗-M

郑仲男 李晓菲 张烨 苗天红

北京市红十字血液中心 100088

截至2023年7月，国际输血协会（ISBT）已确定并命名了45个人类红细胞血型系统，其中Rh血型系统编号004，MNS血型系统编号002。Rh血型抗原是由位于1号染色体短臂上的两个同源且紧密连锁的基因所编码，RHD基因编码D抗原，RHCE基因编码C、c、E、e抗原及RhCE复合抗原：ce（f，也称RH6）、CE（RH22）、Ce（RH7、RH41）和cE（RH27）[1]。针对Rh血型抗原产生的同种抗体除抗-C、c、E、e外，也会产生复合抗原抗体，即抗-f、抗-CE、抗-Ce、抗-cE[2-3]。MNS血型系统的GYPA和GYPB基因位于4号染色体，主要编码M、N、S、s抗原，针对该血型系统抗原产生的同种抗体常见抗-M[1]。本文报告一例同种抗-f合并抗-M患者的抗体鉴定和交叉配血策略。

对象与方法

1 研究对象

男性，32岁，临床诊断为肝血管瘤，血常规结果显示，红细胞：1.7×1012/L，血红蛋白：52 g/dL，血小板计数：38×109/L。患者有输血史，末次输血时间为2021年10月，送检血样采血时间为2022年5月，当日送检。

2 试剂

LISS/Coombs卡（8461219324）、直抗分型卡（8254562006）、0.8%抗体筛选细胞（45330.04.x）由Bio-Rad 提供；Rh分型卡由Bio-Rad（8382426521）和江阴立博（202203003）提供；抗体筛选细胞（批号：8000456153）、抗体鉴定谱细胞（批号8000456155）和酶处理抗体鉴定谱细胞（批号：8000456154）由Sanquin提供；抗-A、抗-B（20220710）由上海生物提供；抗-D（V213552）由BASO提供；抗-M（OMM177-1）、抗-N（ONM224）由CE提供；酸放散样本释放剂（202210017）由江阴立博提供，所有试剂均按使用说明书操作。

3 方法

ABO、RhD和MN血型鉴定采用盐水介质试管法；Rh血型采用Rh分型卡检测；抗体筛选、交叉配血采用盐水介质试管法和抗人球蛋白卡法；抗体鉴定采用抗人球蛋白卡法；放散液抗体筛选采用抗人球蛋白卡法，所有试验均参考全国临床检验操作规程和相关文献[4-5]。

结 果

1 血型

ABO血型：O型；Rh血型：CCDee；MN血型：NN。

2 直接Coombs实验

抗-IgG：3+，抗-C3d：阴性。

3 放散液抗体筛选

阴性。

4 抗体筛选

用患者血浆与抗体筛选细胞分别进行盐水介质和抗人球蛋白卡检测，盐水介质抗筛阴性，说明无IgM类抗体；抗人球蛋白卡抗筛阳性，说明患者血浆中存在IgG类意外抗体，结果见表1和表2。

表1 Sanquin抗体筛选细胞结果

表2 Bio-red抗体筛选细胞结果

5 抗体鉴定

5.1 抗体鉴定

用患者血浆与抗体鉴定谱细胞用抗人球蛋白卡检测，结果见表3。通过比对谱细胞反应格局可以得出患者血浆中存在同种抗体：抗-f+疑似抗-M。

表3 Sanquin抗体鉴定谱细胞格局

5.2 酶处理谱细胞抗体鉴定

为了鉴定患者血浆中除抗-f外是否存在抗-M，我们选用酶处理谱细胞进一步抗体鉴定，结果见表3。通过比对酶处理谱细胞反应格局，我们发现抗体反应增强且仅与有f抗原的谱细胞反应，其他无f抗原的谱细胞反应均呈阴性。反应强度为±的M抗原阳性谱细胞经酶处理后，反应呈阴性，进一步考虑存在抗-M。

5.3 4℃抗体鉴定

为了鉴定患者血浆中是否存在IgG抗-M抗体，用患者血浆与谱细胞进行4℃抗人球蛋白卡实验，结果见表3。通过比对谱细胞的反应格局，确定患者血浆中同时存在同种抗-M，且在4℃情况下反应明显增强。

6 交叉配血

挑选4袋O型RhD阳性无M抗原的悬浮红细胞成分血与患者进行交叉配血，其中3袋配血相合，1袋配血不相合（主侧为W+）。我们对这4袋红细胞进行Rh血型鉴定，结果见表4。我们得出交叉配血策略：患者血浆中同时存在抗-f和抗-M时，先挑选无M抗原红细胞进行交叉配血，根据交叉配血相合结果，对献血者红细胞进行Rh血型鉴定，选择无f抗原红细胞发放。

表4 配血结果及Rh血型

讨 论

编码Rh血型复合抗原的基因位于同一条染色体上单倍体的CE基因内[6]。ce复合抗原为f或RH6，Ce复合抗原为RH7和RH41，CE复合抗原为RH22，cE复合抗原为RH27[7]。抗-f抗体多见于经过输血或妊娠免疫后，表型为CCDee、ccDEE和CcDEe（基因型为DCe/DcE或DCe/dcE或dCe/DcE）的个体中[8]。在临床中少见抗-f抗体引起的输血反应和新生儿溶血病。抗-M抗体是MNS血型系统中最常见的抗体，抗-M抗体多为IgM型，可以影响血型反定型和盐水介质抗体筛选，也有IgM+IgG和IgG型[9]。IgM和部分IgG型抗-M在4℃反应性强于37℃，极易造成漏检[5，10]。冷反应性IgG型抗-M抗体同样会引起溶血性输血反应和新生儿溶血病[11-14]。

红细胞膜表面的唾液酸带有负电荷，使红细胞相互排斥[15]。常见的蛋白水解酶如菠萝酶、木瓜酶和无花果酶等可作用于红细胞表面的多糖链，缩短红细胞间的距离，增强IgG抗体与红细胞表面抗原的凝集反应（如Rh、Kidd血型系统抗体），也会改变MNS、Duffy等血型系统抗原的构型而破坏其抗原性[16-17]。当抗体鉴定出现多种抗体共存或抗体凝集反应微弱时，我们可以利用蛋白水解酶的特性，进一步区分和鉴定。本例报告使用的为木瓜蛋白酶处理后的谱细胞。直抗阳性红细胞放散液检测的目的：抗体筛选阳性说明自身抗体导致红细胞阳性；抗体筛选阴性说明非自身抗体导致红细胞阳性。本例红细胞放散实验为阴性，排除自身抗体的存在，造成患者红细胞直接Coombs实验阳性的原因不详。

本例患者血浆中存在同种抗-f抗体和疑似抗-M抗体，酶处理谱细胞抗人球卡结果显示血浆中存在的同种抗-f反应增强，且可疑抗-M反应消失；4℃谱细胞抗人球卡结果显示血浆中抗体反应增强，呈现抗-M抗体格局。在交叉配血时，优先挑选无M抗原的O型RhD阳性悬浮红细胞进行配血，根据配血结果，对配血相合的献血者红细胞进行RhCE抗原鉴定，选择无f抗原红细胞进行输血。

在为多次输血或者妊娠患者进行抗体鉴定时，除常见的Rh血型系统抗体外，还应考虑RhCE复合抗原抗体存在的可能性，复合抗原抗体仅与存在复合抗原的红细胞反应，且能被蛋白水解酶增强；在怀疑血浆中存在抗-M抗体时，先检测盐水介质抗体筛选和37℃抗人球蛋白实验反应是否阳性，再检测确认酶处理或4℃环境下，抗体筛选或谱细胞的反应格局。在患者血浆中同时存在RhCE复合抗原抗体和其它血型系统同种抗体的情况下，优先考虑其它血型系统同种抗体，选择无对应血型系统抗原的红细胞进行交叉配血，再根据配血结果，对相合红细胞进行RhCE抗原鉴定，选择不含RhCE复合抗原的血液发放。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突