斯钙素2在宫颈癌组织中的表达及临床意义

邓润叨, 付霞霏

(1.南方医科大学珠江医院, 广东 广州 510220 2.广东省东莞市人民医院, 广东 东莞 523018)

作为临床常见肿瘤疾病,宫颈癌指的是起源于子宫颈的上皮恶性肿瘤,发病率及死亡率位居全球女性恶性肿瘤第四。流行病学调查研究表明,我国每年宫颈癌新发病例多达13万,31～60岁中老年女性是高发群体,近年来该疾病有年轻化趋势[1]。宫颈癌早期症状不典型,多数无任何症状,一般通过体检发现。宫颈癌发展至中晚期会出现阴道流血、接触性出血等,甚至对周围组织、器官产生侵犯,压迫直肠、盆腔神经,出现尿频、尿急以及腹胀等,早期诊断及及时手术治疗是提升患者生存质量、增强预后的关键。相关研究报道,宫颈癌的发生与基因蛋白异常表达密切相关,作为一种分泌性糖蛋白激素,斯钙素2(stanniocalcin 2,STC2)在机体各组织均有一定的分布,能够对钙、磷平衡起到调节作用,并被证实参与了消化道恶性肿瘤的发生与发展[2],但关于其在宫颈癌中的作用尚未得到证实。基于此,本研究收集 88例宫颈癌患者的临床资料,观察STC2在宫颈癌组织的表达情况及其临床意义。

1 资料与方法

1.1一般资料:回顾性分析,病例均来源于东莞市人民医院于2022年1月至2023年5月收治的宫颈癌患者,共计88例,年龄36～67岁,平均年龄(52.28±5.78)岁;BMI(23.52±2.15)kg/m2(18.52～27.43kg/m2)。研究经过医学伦理委员会批准,所有患者对研究知情、同意,并签订知情同意书。

1.2纳入与排除标准:入组标准:①宫颈癌诊断参照《子宫颈癌诊断与治疗指南(2021年版)》[3]。②年龄18～70岁;③具备正常的听、说能力,沟通顺畅,可完成检查配合及随访观察;④资料完整无缺失。排除标准:①危重症患者或脏器衰竭、损伤严重者;②合并其他类型恶性肿瘤疾病;③接受放化疗治疗或其他抗肿瘤治疗;④存在意识模糊或神志不清、精神障碍者;⑤合并凝血功能障碍、自身免疫系统障碍者;⑥预计生存期<6个月;⑦严重肝肾功能不全;⑧处于妊娠及哺乳阶段女性。

1.3方 法

1.3.1试剂与仪器:研究所用莱洛特 JC-10光学显微镜由莱州莱洛特试验仪器有限公司提供;湖南湘仪台式高速冷冻离心机TGL-20M购自郑州今时迈科技有限公司;BC-J250 CO2培养箱购自上海博迅医疗生物仪器股份有限公司;FBS试剂厂家为沃卡威(北京)生物技术有限公司;4%多聚甲醛溶液由武汉安道麦新能源有限公司提供;朗基Q2000C型实时荧光定量PCR由南京烔创科技有限公司提供。免疫组化试剂二甲苯购自上海博尔森生物科技有限公司;PBS冲洗液购自山东思科捷生物技术有限公司;封闭山羊血清(原液)SL038由北京索莱宝科技有限公司提供;一抗购自爱必信(上海)生物科技有限公司;DAB显色试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司。

1.3.2斯钙素STC2 mRNA检测:收集所有入组研究对象宫颈组织标本、癌旁组织(距病灶2cm的组织,经免疫组化ABC法染色)。以4%多聚甲醛溶液予以固定处理,通过石蜡包埋,对其中的总RNA进行提取,STC2 mRNA以实时荧光定量PCR进行检测,GAPDH作为内参基因,检测前对说明书进行仔细阅读,严格按照操作步骤进行,保障检查结果的准确性。STC2、GAPDH电泳条带灰度值采用Lab Works软件计算。

1.3.3免疫组织化学法检测STC2蛋白:在4% 多聚甲醛中固定宫颈组织标本,然后实施脱水、透明处理,浸蜡后予以石蜡包埋,制作为蜡块留作备用。选取4 μm蜡块进行连续切片处理,以二甲苯实施脱蜡处理,并采用梯度乙醇实施水化,以PBS进行充分清洗,对抗原予以修复,以山羊血清进行封闭。将一抗滴加其中,温度设置为4℃,过夜后,予以PBS冲洗3次,将二抗加入,室温下孵育,再次予以2～3次PBS冲洗。进行DAB显色,以苏木素进行复染,脱水后,采用中性树胶封片,在显微镜下对结果予以观察,拍片。

1.3.4结果判断:STC2阳性判断标准:可见细胞膜、细胞质有棕黄或黄褐色颗粒。染色强度以0～3分进行评估,0分表示无色,1分～3分分别表示浅黄、棕黄与棕褐色。随机选取10个高倍视野,对STC2阳性细胞百分比予以计算。分值为0分(<1%)、1分(<1%～10%)、2分(11%～50%)、3分(51%～80%)、4分(>80%)。总分为染色强度×阳性细胞百分比积分,>4分表示阳性。

2 结 果

2.1实时荧光定量PCR检测宫颈癌组织与癌旁组织STC2 mRNA比较:实时荧光定量PCR检测结果显示,宫颈癌组织STC2 mRNA明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 实时荧光定量PCR检测宫颈癌组织与癌旁组织STC2 mRNA比较

2.2不同临床特征宫颈癌患者癌组织STC2蛋白表达情况:宫颈癌组织中STC2阳性表达在年龄、肿瘤直径、病理分型、不同浸润深度、分化程度、TNM分期中差异无统计学意义(P>0.05),仅与淋巴结转移有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同临床特征宫颈癌患者癌组织STC2蛋白表达情况 n(%)

2.3宫颈癌患者癌组织中STC2蛋白阳性表达多因素Logistic回归分析:以宫颈癌患者癌组织中STC2蛋白表达是否为阳性(1=是,0=否)为因变量,将单因素分析结果差异有统计学意义的变量纳入多因素Logistic回归分析模型,变量赋值如表3所示,结果显示淋巴结转移是STC2阳性的独立影响因素。见表4。

表3 变量赋值

表4 宫颈癌患者STC2阳性表达多因素Logistic回归分析

2.4宫颈癌患者癌组织标本中STC2蛋白表达与OS、PFS相关性分析:STC2蛋白表达阳性患者OS、PFS分别为(12.44±2.21)个月、(6.42±1.03)个月,低于 STC2表达阴性患者的(22.15±2.72)个月、(13.59±1.21)个月,差异有统计学意义(t=13.701,21.884,P<0.05)。经过Pearson法分析显示,STC2蛋白表达与OS、PFS均为负相关(r=-0.747,-0.683,P<0.05)。见表5。

表5 宫颈癌患者STC2表达与OS、PFS相关性分析

3 讨 论

作为女性常见恶性肿瘤,宫颈癌病因明确,据统计约有90%以上由人乳头瘤病毒感染引起[4],另外,多孕多产、免疫功能缺陷也会增加宫颈癌疾病风险[5]。目前,临床关于宫颈癌的治疗方案诸多,且较为成熟,多结合患者临床分期、基础情况,给予个体化、多学科治疗,大部分患者尤其是早期患者经规范化治疗能够获得满意的疗效。但仍有部分患者在确诊时已发展至中晚期,甚至出现了淋巴结转移,即便经过放化疗也难免会存在病灶残留、复发。为提升宫颈癌诊疗水平,医学界将目光投向宫颈癌肿瘤标志物研究,以求获得新的突破。

作为一种新型肿瘤标记物,STC2最早由国外学者在硬骨鱼中发现,属于斯钙素糖蛋白分泌激素家族的成员,人STC家族包括STC1、STC2,既往研究发现其在人体组织中广泛存在[6],在机体多项生理功能中有一定的参与作用。STC2对炎症、氧化应激及神经分化等病理进程具有一定的调控作用,近年来学者开始倾向于对STC2与肿瘤关系的研究,并证实其能够对肿瘤恶性程度予以反映,与肿瘤患者治疗过程中的耐药也具有相关性[7-8],但其在宫颈癌中的表达研究较少。本研究宫颈癌组STC2 mRNA明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),提示STC2 mRNA在宫颈癌中表达量高。

作为斯钙素亚型的一种,STC2基因主要在染色体5q35上表达,STC2在C4-1、MS751等宫颈癌细胞中为高表达,过表达会对癌细胞增殖起到促进作用,STC2低表达则会对肿瘤细胞增殖起到抑制作用。STC2对肿瘤细胞的增殖与凋亡是通过MAPK信号通路活动实现的[9]。本研究检测了宫颈癌组织中STC2 mRNA,显示均较癌旁组织高,表明STC2在宫颈癌组织中表达量明显较高。STC2在内脏及骨骼肌中均有一定的表达,但含量较低,当发生恶性肿瘤后STC2表达会呈现出异常升高。

本研究经过多因素Logistic回归分析,显示淋巴结转移是STC2阳性的独立影响因素。提示STC2阳性表达可能是宫颈癌侵袭、转移的重要分子事件,会导致宫颈癌恶性肿瘤的增加,当STC2表达水平升高应警惕细胞分化程度降低、增殖,可能会导致肿瘤的进展或转移[10-11]。另外,患者预后评估也是肿瘤标志物重要的功能之一,本研究随访患者预后情况,并分析了STC2与患者生存情况的相关性,发现STC2阳性组5年OS、PFS低于STC2阴性组,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson分析显示STC2表达与OS、PFS均为负相关(r=-0.747,-0.683,P<0.05)。提示STC2表达可作为宫颈癌患者预后评估及预测的重要指标。但由于研究时间有限,收集样本过少,且未能针对STC2在宫颈癌效应中机制进行深入分析,需要进一步探讨。

综上所述,STC2在宫颈癌组织中表达量高于癌旁组织,并且与年龄、肿瘤直径、病理分型、浸润深度、分化程度、TNM分期无关,与淋巴结转移有关,应予以高度重视。