定时人工授精对湖羊受胎率的影响

高 慧,金慧佳,武利恒,赵丽莉,王争光*

(1.浙江省畜牧技术推广与种畜禽监测总站,浙江 杭州 310021;2.浙江大学动物科学学院;3.浙江华欣牧业有限公司;4.衢州市畜牧业发展中心)

湖羊是中国独有的、历史悠久的多胎绵羊品种,主要分布在浙江嘉兴地区和太湖周边。被列入《国家畜禽遗传资源保护名录》,因其宜圈养特性,在我国羊产业集约化发展中具有十分重要的地位。但由于过分追求生产利益,湖羊产业中出现了近亲繁殖、种质退化等问题,迫切需要扩繁优秀纯种湖羊群体。人工授精是促进家畜繁殖和育种的关键技术,能够加快纯种扩繁速度,从而提高家畜繁殖力。而家畜的繁殖过程严格受到各种生殖激素的协调控制。通过体外不同激素的刺激,如前列腺素、孕激素、促性腺激素释放激素或其类似物等可以人为地改变母畜的生殖周期。母羊排卵发生在情期结束前后,人工授精一般在排卵之前或排卵过程中进行。作为人工授精的辅助手段,定时发情可以有效调控母畜的发情周期,在特定时间段内实现母畜的同时发情、统一配种和同步妊娠,便于生产管理,从而提高养殖业的经济效益。定时人工授精技术在母羊定时发情的基础上,不仅能够使优良种公畜的繁殖性能得到充分发挥,而且也降低发情鉴定所需要的人力成本,从而提高畜牧业的经济效益。定时人工授精技术已经成为家畜繁殖技术研究的热点。本研究通过改进阴道栓法的一些技术环节和方法,优化湖羊定时发情控制技术,便于冷冻精液应用于大规模羊场,为湖羊定时人工授精技术推广应用提供技术储备。

1 试验时间和地点

本试验从2022年4月开始,陆续开展。试验所用的湖羊均养殖于浙江华欣牧业有限公司。根据下述实验设计,每个试验组的湖羊在同一栏舍饲养。

2 试验材料

2.1试验动物 选择18-36月龄的健康公羊采集精液,选择15月龄、体重接近的健康经产母羊进行同期发情处理。

2.2主要试剂 诱导母羊定时发情用的主要激素如促卵泡素(FSH)、孕马血清促性腺激素(PMSG)、氯前列醇钠注射液(PG)均购自宁波第二激素厂,多胎素、生元导管式棉栓(CIDR)购自河南信南春生物科技有限公司。

3 试验方法

3.1试验分组 本研究共分3组,分别按照以下方案进行操作。对照组:不做处理自然发情。试验组1(方案1):直接放置 CIDR栓处理12 d,分别在第12 d、第13 d 注射 FSH 50 IU,第14 d去栓并注射PG 0.1 mg,去栓后12 h开始试情。试验组2(方案2):直接放置 CIDR栓处理12 d,同时试验羊饲喂多胎素。放栓后第11 d注射PMSG 400单位、PG 0.1 mg,分开注射。放栓后第12 d撤栓,停止饲喂多胎素。放栓后第14 d,上午和下午各人工输精一次。试验母羊早上不予饲喂,仅中午喂食。

3.2公羊试情方法 选用性欲旺盛、健康无病的公羊作为试情对象,并在早、晚各进行一次试情。为防止偷配,试情公羊需要戴上试情布。同时,试情公羊与母羊应当遵循1∶15的比例,一旦出现发情母羊需要立即挑出,降低干扰。因试情耗费的时间较长,如果母羊没有在10～20 min内接受公羊爬跨,理论上记为一次试情结束。同时,采用人工检查的方法判断母羊的发情情况。若母羊出现嗅闻公羊、接受爬跨等行为,或者表现出外阴有黏液流出、发红发肿等症状,均判定为母羊发情。定时发情处理后72 h内发情的母羊均作为定时处理有效对待。

3.3公羊采精 本研究采用假阴道法对公羊的精液进行采集。将发情的母羊固定在采集架上。将集精杯装入假阴道的一段,另一端涂抹凡士林润滑,保持内胎的温度在40 ℃左右。把公羊赶到固定的发情母羊边上,让公羊爬跨,迅速将阴茎导入假阴道内。公羊射精后,取下采精杯,记录射精量,快速放入37 ℃水浴中保温。

3.4精液品质检查、稀释、冷冻、解冻 精液品质检查主要包括外观检查、射精量测量、精子活力测定、精子密度测定和精子形态学检查。采用传统的血细胞计数法测定湖羊精子的密度,采用10级制目测法进行精子活力测定,通过计算精子顶体异常率和精子畸形率两项指标对精子进行形态学评估。正常健康的精液在显微镜下呈现翻腾的云雾状,颜色为乳白色。湖羊的正常射精量为0.5～2 mL,每毫升精液中精子的数量为20亿～30亿,且精液中不含有尿液等其他成分。精液稀释、冷冻、保存和解冻均按照之前试验得出的最优方案进行。

3.5母羊人工授精 采用子宫颈深部输精方法对发情母羊进行授精。早上进行第一次输精,间隔10～12 h后进行第二次输精。在输精过程中,打开内窥镜的光源,将器械插入阴道深部,并通过旋转器械来确定子宫颈位置。然后将输精器插入子宫颈约1.0 cm深,轻轻往里注入0.1～0.2 mL精液即可。输精完成后先取出输精器再抽出内窥镜。同时,母羊需要在原位置停留一段时间。人工授精过程中使用的器械均需要用生理盐水冲洗干净。

3.6定时发情效果评价 本试验通过以下三项指标来评估不同定时发情方法的处理效果:发情率、定时发情时间分布和处理后人工授精受胎率。进行不同处理后,72 h内发情的母羊数在该处理组总母羊数中所占的百分率,即定时发情率。定时发情处理后,发现母羊有发情表现的时刻,即定时发情时间。处理后72 h内发情者均作为同期处理有效对待。配种后受胎的母羊数在参与配种母羊数中所占的百分率,即受胎率。

3.7数据统计与分析 所有试验所得数据均被整理和记录于Excel软件中,采用SPSS19.0软件统计分析。试验数据以记录为平均值±标准差,利用one-way ANOVA进行各试验组之间的差异比较。

4 结果与分析

4.1不同处理对母羊定时发情率的影响 由表1可知,对照组母羊的定时发情率平均为21.1%,均低于其他两个处理组;试验1 组定时发情率平均为77.2%,显著高于对照组(P<0.05);试验2组获得了最高的定时发情率87.8%,与对照组比较差异极显著(P<0.01)。

表1 不同处理对母羊定时发情率的影响

4.2不同处理对母羊定时发情时间分布的影响 由表2可知,对照组发情时间集中在48～72 h;试验1组集中在36～60 h;试验2组集中在36～48 h。各处理组的发情时间存在差异。试验2组的发情时间更加集中,便于后续的人工授精和管理,且发情母羊的数量也明显高于对照组和试验1组。

表2 不同处理对母羊定时发情时间分布的影响

4.3不同处理对母羊情期受胎率的影响 由表3可知,自然发情的母羊,配种受胎率较低,平均为46.1%,试验组1处理后平均受胎率为59.2%,显著高于对照组(P<0.05)。试验组2获得的受胎率最高,显著高于另外二组(P<0.05),效果更明显。

表3 不同处理对母羊情期受胎率的影响

5 讨论

生殖激素的协调作用是母羊正常繁殖的关键。利用生殖激素诱导定时发情的方式,可提高湖羊的定时发情效率。而阴道栓法就是一种通过人为添加孕激素模拟自然黄体形成的方法。在休情期,通过阴道栓向母羊注入孕激素,可使母羊体内的孕激素水平升高,从而形成人工黄体。在预定的发情时间,撤去阴道栓,使母羊体内的孕激素水平迅速降低,同时注射PMSG使母羊体内的促卵泡素水平迅速升高,此时母羊的卵泡开始发育,表现为发情状态。海绵栓和CIDR配合PMSG等激素都是定时发情的有效方法,结合不同的处理手段呈现出的效果存在差异。周洪刚等采用“孕酮海绵栓+PMSG+PG”定时发情方案处理母羊,得到了比其他处理组更高的发情率,对发情母羊进行人工授精,受胎率得到显著提高,可达95%,这一改进措施进一步降低了湖羊的繁殖和生产成本,平均每只羊可下降247.5元。在生产中普遍应用的羊用阴道栓主要有CIDR和海绵栓两种类型。张文倩等通过对比CIDR和海绵栓对湖羊定时发情的效果,发现采用“CIDR+PMSG+PGF2α”方案处理湖羊,定时发情效果明显更好,发情率可达90.74%。CIDR配合应用PMSG、PGF2α等激素的处理效果要优于海绵栓。成海荣等比较了不同栓剂对肉羊同期发情的影响,对200只肉羊分为四组,分别放置进口CIDR栓、进口海绵栓、国产海绵栓,以及国产硅胶栓,撤栓后皮下注射330 IU PMSG,24 h开始试情,分别于36 h与48 h开始实施人工授精。采取“CIDR+PMSG”法处理,发情率为95.83%,受胎率为89.13%,均高于其他各组,且母羊阴道发炎率也更低,效果更稳定、更好。不同剂量PMSG对于定时发情的效果也存在差异。高峰等发现,应用“CIDR+PMSG+PG”处理方案的前提下,针对1～2岁龄左右的50 kg试验湖羊,PMSG的使用剂量在200～240 IU比较合理。赵晓锟等发现“孕酮海绵栓+PMSG+PG”定时发情方案处理,母羊在撤栓后48 h左右处于发情和排卵高峰,与撤栓后48 h和56 h两次定时人工输精组合,受胎率达76%。湖羊定时发情技术与人工授精技术相结合,可以极大程度地利用公母羊的繁殖优势,显著提高母羊的繁殖率,降低羊场的管理成本,可在规模化湖羊生产中推广应用。

6 结论

根据各种不同的实验设计,综合分析得到理想的湖羊定时发情处理方案,母羊直接放置 CIDR栓处理12 d,同时饲喂多胎素,放栓后第11 d分开注射PMSG 400单位、PG 0.1 mg,放栓后第12 d撤栓,同时停止饲喂多胎素,定期发情率高达87.8%,发情时间集中在湖羊发情处理后的36-48 h。在放栓后第14 d的上午和下午对试验母羊各进行一次人工输精,受胎率最高可达61.1%。