柴胡皂苷D对高尿酸血症大鼠尿酸及相关酶活性的影响

张 平，方 琼

（安徽医学高等专科学校，合肥 230061）

高尿酸血症是一种常见的代谢性疾病，主要由嘌呤代谢紊乱或尿酸排泄不足引起。随着社会进步，人们的生活水平不断提升，其发病率呈现上升趋势。研究〔1〕显示，我国高尿酸血症总体患病率为13.3%。长期高尿酸血症可诱发多种并发症，如痛风、2 型糖尿病、心血管疾病等〔2〕，高尿酸血症已成为严重影响人类健康的常见疾病。

研究〔3〕发现，饮食在高尿酸血症中具有不容忽视的影响，高尿酸血症的防控中也强调了饮食管理。皂苷是目前人们发现食品中降尿酸的物质之一，海参皂苷、番茄总皂苷等皂苷类物质具有显著降尿酸的作用〔4〕。柴胡皂苷D是中药柴胡中分离提取的重要单体之一，研究〔5〕表明其具有解热镇痛、镇静催眠、保护肝脏、抗肿瘤等活性。作为皂苷类物质，目前尚无其降尿酸作用的研究。本研究建立高尿酸血症大鼠模型，并采用不同剂量柴胡皂苷D 进行处理，探讨其在降尿酸方面的作用及其机制。

1 实验材料

1.1 实验动物成年SD 雄性大鼠，8~10 周龄，体质量（250±10）g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SYXK（京）2022-0052，饲养于安徽医学高等专科学校实验动物中心。所有与动物有关的实验已通过动物伦理审批。

1.2 主要试剂与材料柴胡皂苷D（上海吉至生化科技有限公司，批号：S15760）；腺嘌呤（美国Amresco公司，批号：CAS：65-46-3）；乙胺丁醇（杭州民生药业集团有限公司）；尿酸试剂盒、黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）试剂盒、腺苷脱氨酶（adenosine deaminase，ADA）试剂盒、肌酐试剂盒、尿素氮试剂盒（南京建成生物工程研究所）。

2 实验方法

2.1 动物分组、给药和高尿酸血症造模SD大鼠随机分为对照组、模型组和药物组，其中药物组又根据柴胡皂苷D 剂量的不同分为大剂量组（20 mg∕mL）、中剂量组（10 mg∕mL）和小剂量组（5 mg∕mL），每组10 只。对照组为正常大鼠，不进行任何处理，其余各组大鼠每天上午灌胃腺嘌呤0.2 g∕kg+乙胺丁醇0.25 g∕kg〔5〕，建立高尿酸血症模型。柴胡皂苷D 用0.9%氯化钠溶液溶解，配制5、10、20 mg∕mL 药液。柴胡皂苷D 各剂量组均以10 mL∕kg 的剂量灌胃给药〔6〕，对照组和模型组大鼠均灌胃10 mL∕kg 0.9%氯化钠溶液，每天上午9点给药1次，共给药28 d。

2.2 尿酸、XOD、ADA、肌酐、尿素氮的检测给药后14、21、28 d，对各组大鼠空腹采血，5 000 r∕min离心10 min，分离血清，用尿酸试剂盒检测各组大鼠的血尿酸值。第28 天采集各组大鼠尿液，同样方法检测尿尿酸值。按试剂盒说明书检测第28天采集的血清中XOD、ADA、肌酐、尿素氮的水平。

2.3 数据分析采用SPSS 25.0 软件对实验数据进行统计分析，符合正态分布的计量资料用（±s）表示，2 组资料之间的分析采用t检验，P<0.05 为差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 不同剂量柴胡皂苷D 对大鼠血尿酸的影响给药后21 d，与对照组相比，模型组大鼠血尿酸水平明显升高，柴胡皂苷D中剂量组与模型组相比，血尿酸水平显著下降，差异均有统计学意义（P<0.05）。给药后28 d，与模型组相比，柴胡皂苷D 大剂量组、中剂量组血尿酸水平显著下降，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 柴胡皂苷D对高尿酸血症大鼠血尿酸的影响（mg∕L，±s，n=10）

表1 柴胡皂苷D对高尿酸血症大鼠血尿酸的影响（mg∕L，±s，n=10）

注：与给药前比较△P＜0.05；与对照组比较*P＜0.05；与模型组比较#P＜0.05。

组别对照组模型组柴胡皂苷D 大剂量组柴胡皂苷D 中剂量组柴胡皂苷D 小剂量组给药前28.48±5.01 27.68±5.42 26.18±4.94 29.52±5.08 28.39±5.14给药后14 d 29.39±7.01 28.16±6.40 23.27±5.25 25.35±8.03 29.20±6.72给药后21 d 29.28±8.12 37.50±5.26△*36.65±5.39△33.69±6.32△#40.00±7.39△给药后28 d 29.68±7.34 42.29±5.13△*33.19±5.45△#30.48±7.33#39.23±5.32△

3.2 不同剂量柴胡皂苷D 对大鼠尿尿酸的影响给药后28 d，与模型组比较，柴胡皂苷D 大剂量组大鼠的尿尿酸水平无明显降低，差异无统计学意义（P>0.05）；而柴胡皂苷D 中剂量组和小剂量组大鼠的尿尿酸水平显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 柴胡皂苷D对高尿酸血症大鼠尿尿酸的影响（mg∕L，±s，n=10）

表2 柴胡皂苷D对高尿酸血症大鼠尿尿酸的影响（mg∕L，±s，n=10）

注：与给药前比较△P＜0.05；与对照组比较*P＜0.05；与模型组比较#P＜0.05。

组别对照组模型组柴胡皂苷D 大剂量组柴胡皂苷D 中剂量组柴胡皂苷D 小剂量组给药前298.87±43.28 295.19±31.22 315.51±33.38 286.31±29.54 281.01±28.15给药后28 d 378.87±46.36 438.19±54.35△*411.51±34.83△264.31±36.73#289.01±25.02#

3.3 不同剂量柴胡皂苷D 对大鼠血清ADA 及XOD的影响给药后28 d，模型组的ADA、XOD 水平较对照组显著升高，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组相比，药物组大鼠血清ADA及XOD水平显著下降，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

表3 柴胡皂苷D对高尿酸血症大鼠血清ADA及XOD的影响（U∕mL，±s，n=10）

表3 柴胡皂苷D对高尿酸血症大鼠血清ADA及XOD的影响（U∕mL，±s，n=10）

注：与给药前比较△P＜0.05；与对照组比较*P＜0.05；与模型组比较#P＜0.05。

组别对照组模型组柴胡皂苷D 大剂量组柴胡皂苷D 中剂量组柴胡皂苷D 小剂量组ADA给药前47.48±12.02 50.68±11.24 46.26±10.98#51.52±11.08 44.39±10.14给药后28 d 45.76±10.32 198.19±36.35△*75.52±26.84△#102.35±19.77△#83.17±25.56△#XOD给药前34.28±8.12 32.50±5.26 35.65±5.39 30.69±6.32 31.00±7.39给药后28 d 37.28±10.31 61.25±14.37△*47.55±9.80△#49.33±8.72△#45.20±10.06△#

3.4 不同剂量柴胡皂苷D 对大鼠血清肌酐和尿素氮的影响给药后28 d，模型组的肌酐、尿素氮水平较对照组显著升高，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组相比，药物组大鼠肌酐及尿素氮水平显著下降，差异有统计学意义（P<0.05）。见表4。

表4 柴胡皂苷D对高尿酸血症大鼠血清肌酐及尿素氮的影响（±s，n=10）

表4 柴胡皂苷D对高尿酸血症大鼠血清肌酐及尿素氮的影响（±s，n=10）

注：与给药前比较△P＜0.05；与对照组比较*P＜0.05；与模型组比较#P＜0.05。

组别对照组模型组柴胡皂苷D 大剂量组柴胡皂苷D 中剂量组柴胡皂苷D 小剂量组肌酐∕（μmol∕L）给药前45.48±8.26 46.69±9.12 44.26±8.97 42.31±9.16 43.17±9.26给药后28 d 48.28±9.33 85.17±16.31△*64.52±11.83△#48.37±13.71#55.26±12.24△#尿素氮∕（mmol∕L）给药前7.61±0.88 7.89±0.74 7.23±0.65 7.51±0.77 7.39±0.79给药后28 d 7.38±0.91 17.21±3.74△*12.23±3.05△#8.89±1.37#10.09±2.13△#

4 讨论

尿酸是嘌呤代谢的终产物，机体的尿酸水平与嘌呤代谢密切相关。高尿酸血症是复杂的多基因遗传病，已有研究〔7〕证明，多种与嘌呤代谢有关的酶的活性对尿酸生成有着显著影响，嘌呤代谢过程中某些酶发生基因突变，致酶活性改变，使体内的尿酸代谢紊乱，从而引发高尿酸血症。其中，ADA参与核苷酸分解代谢，并发挥重要作用，可以使得腺嘌呤核苷在其催化下转变为次黄嘌呤核苷，并进一步生成次黄嘌呤〔8〕。XOD 则参与嘌呤核苷酸分解代谢的终末阶段，负责将次黄嘌呤催化氧化为黄嘌呤，并进一步生成尿酸〔9〕。ADA 和XOD 都是嘌呤核苷代谢过程中的关键酶。

本研究采用腺嘌呤加乙胺丁醇灌胃的方式获得高尿酸血症大鼠模型，在给药后第21 天及第28天测得大鼠血尿酸水平显著升高，表明造模成功，为研究柴胡皂苷D 治疗高尿酸血症提供了重要的实验基础。研究结果表明，柴胡皂苷D 大剂量与中剂量组能显著降低血尿酸值，中剂量组在给药后28 d，大鼠血尿酸水平几乎恢复至给药前，两者之间差异无统计学意义。给药后28 d，药物组大鼠的尿尿酸水平均低于模型组，这些均提示柴胡皂苷D 具有重要的降尿酸活性。

进一步检测了大鼠ADA 以及XOD 水平，结果显示不同剂量的柴胡皂苷D 均可降低ADA 以及XOD 水平，说明柴胡皂苷D 主要通过抑制尿酸合成关键酶的活性，使机体尿酸水平降低，这与多数皂苷类药物有关的研究相似〔10-11〕。检测了大鼠给药前与给药后28 d 肾功能相关指标（肌酐、尿素氮），发现尿酸水平的升高使得大鼠的肾功能明显受损，而柴胡皂苷D 的干预可以使肌酐、尿素氮水平下降，说明柴胡皂苷D 具有保护肾功能的作用，尤其是在柴胡皂苷D 中剂量组中，可以发现肌酐、尿素氮水平恢复至给药前的水平，给药前与给药后差异无统计学意义，在血尿酸的指标中也同样如此。这提示，适宜剂量的柴胡皂苷D 对控制机体尿酸水平以及保护肾功能方面值得进一步探索。

综上所述，柴胡皂苷D 可以通过降低ADA 以及XOD 水平，抑制尿酸生成，起到降尿酸的作用，同时适宜剂量的柴胡皂苷D 具有显著的肾脏保护功能。但本研究仅仅是针对高尿酸血症的初步研究，高尿酸血症的发生以及对机体的影响还涉及诸多方面，如氧化应激、炎症小体等〔12-13〕，值得进一步探索与研究。目前关于皂苷类药物对于降尿酸活性的研究仍较有限，本研究可以为未来寻找新型降尿酸潜力的药物提供研究方向。