血清SOX6、VCAN 表达对胃癌诊断及病情评估的价值分析

黄小平,李 轶,李 萍 （. 西安市第九医院消化内科，陕西 西安 70054；. 西安市第九医院血管介入科，陕西 西安70054）

胃癌是一种发病率和病死率都很高的疾病，多数患者表现为食欲下降和腹部不适等症状[1-2]。由于缺乏相对方便可靠的生物标志物，大量胃癌患者确诊时已为晚期，预后较差[3]。早期发现和诊断对于降低胃癌患者的病死率至关重要，因此寻找特异性、敏感性和便利性均较高的可靠生物标志物以进行早期诊断至关重要[4]。性别决定区Y 框蛋白6（sex determining region Y-box 6, SOX6）是SOX 基因家族D 亚族成员之一。大量研究表明，SOX6 异常表达与许多肿瘤疾病相关[5-6]。Dang 等[7]的研究证实，SOX6 在胃癌细胞中作为抑癌基因发挥功能。多功能蛋白聚糖（versican,VCAN）属蛋白聚糖家族，是一种硫酸软骨素蛋白多糖，也是重要的细胞外基质成分，与肿瘤发生密切相关。研究发现，VCAN 在胃癌组织中呈高表达，可能是胃癌预后的潜在分子标志物[8]。SOX6和VCAN皆与胃癌的发生有关，但二者对胃癌诊断及病情评估的价值目前尚不明确。基于此，本研究通过检测胃癌患者血清中SOX6、VCAN 的表达，探讨二者在胃癌诊断及病情评估中的价值，为胃癌的早期诊断和治疗提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2019 年1 月至2021 年10 月本院收治的胃癌患者105 例为胃癌组，其中男61 例，女44 例，年龄48～68 岁，平均（54.33±2.62）岁。依据手术病理检查结果判断胃癌患者病理分期[9]，将患者分为Ⅰ、Ⅱ期组（早期胃癌，37 例）和Ⅲ、Ⅳ期组（中晚期胃癌，68 例）。纳入标准：①符合《胃癌规范化诊疗指南（试行）》[10]中关于胃癌的诊断标准；②经病理检查确诊为胃癌；③首发胃癌。排除标准：①有精神障碍，无法进行正常沟通；②合并其他恶性肿瘤及免疫缺陷等疾病；③处于妊娠期或哺乳期；④合并心、肝、肺、脑等重要脏器疾病。另选取本院同期收治的85 例胃良性病变患者为良性组，其中男48 例，女37 例，年龄44～65 岁，平均（54.15±2.50）岁。选取同期85例健康体检者（无急慢性炎症、感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤疾病）为对照组，其中男43例，女42例，年龄45～67岁，平均（54.24±2.35）岁。3组研究对象的性别、年龄、BMI、吸烟史、饮酒史比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。本研究经本院医学伦理委员会审核批准（2018-10-291），获得患者或其亲属的书面知情同意。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 采集所有研究对象的空腹静脉血5 mL，以10 000 r/min离心15 min，取上层血清，置于-80 ℃保存备用。

1.2.2 qRT-PCR 法检测血清中SOX6、VCAN mRNA水平 按照制造商说明书，采用TRIzol 试剂（日本TaKaRa）提取血清总RNA。采用NanoDrop 1000 分光光度计（美国Thermo Fisher Scientific）检测总RNA 浓度。根据标准方案，使用PrimeScript RT Master Mix（日本TaKaRa）将总RNA 逆转录为cDNA。使用SYBR PREMIX EX Taq Ⅱ（日本TaKaRa）通过qRT-PCR 检测血清中SOX6、VCAN mRNA 表达水平，以GAPDH 为内参基因。反应条件：95 ℃ 30 s；95 ℃ 10 s，57 ℃ 20 s，72 ℃ 30 s，共40 个循环。采用2-ΔΔCt法对血清SOX6、VCAN mRNA 表达水平进行定量分析。SOX6、VCAN及内参引物序列见表1。

表1 实时荧光定量PCR引物序列

1.3 统计学分析

利用SPSS 22.0 统计学软件分析数据，计数资料以率（%）表示，进行χ2检验；计量资料符合正态分布，以均数±标准差（）表示，进行t检验。多组数据采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验。采用Spearman法分析SOX6、VCAN 表达与病理分期的相关性。利用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评价血清SOX6、VCAN 表达水平对胃癌的诊断价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血清中SOX6、VCAN的表达水平

胃癌组患者血清中SOX6 表达水平低于对照组和良性组，VCAN 表达水平高于对照组和良性组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 各组患者血清中SOX6、VCAN表达水平比较（）

表2 各组患者血清中SOX6、VCAN表达水平比较（）

*：与对照组比较，P＜0.05；#：与良性组比较，P＜0.05

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2.2 胃癌组不同病理分期患者血清中SOX6、VCAN的表达水平

Ⅲ、Ⅳ期组患者血清VCAN表达水平高于Ⅰ、Ⅱ期组患者，SOX6 表达水平低于Ⅰ、Ⅱ期组患者，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 各组血清中SOX6、VCAN表达水平比较（）

表3 各组血清中SOX6、VCAN表达水平比较（）

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2.3 血清SOX6、VCAN表达与病理分期的相关性分析

相关性分析结果显示，胃癌患者血清中SOX6 表达与病理分期呈负相关（r=-0.485，P＜0.05），VCAN 表达与病理分期呈正相关（r=0.518，P＜0.05）。

2.4 血清SOX6、VCAN表达对胃癌患者的诊断价值

ROC曲线结果显示，SOX6、VCAN 及二者联合诊断胃癌患者的曲线下面积（area under the curve,AUC）、敏感度、特异度见图1、表4。

图1 SOX6、VCAN表达诊断胃癌患者的ROC曲线

表4 SOX6、VCAN表达对胃癌患者的诊断价值

3 讨论

胃癌的发病率和病死率在国内仅次于肺癌[11]。手术是其主要治疗方法，但大多数患者在确诊时已处于晚期，无法进行根治性手术。近年来，虽然胃癌的诊断技术与临床治疗不断发展，患者病死率有所降低，但是胃癌患者的预后较差，5 年生存率较低[12-13]。因此，继续开发用于早期胃癌检测的有效诊断标志物仍然具有重要意义。

SOX6 在中枢神经系统发育及早期胚胎软骨和肌肉组织形成过程中特异性表达，在细胞生长、发育和增殖中发挥重要作用。近期研究表明，SOX6 转录因子在多种癌症中作为抑癌基因发挥作用，SOX6 的表达与肿瘤的发生、发展及预后密切相关[14-15]。付真睿等[15]研究表明，SOX6 通过降低蛋白酶体活性，在膀胱癌中发挥抑癌基因作用。黄伟钊等[16]研究表明，食管癌中SOX6 的表达水平与病理分期呈负相关，检测SOX6 水平有助于食管癌病情诊断。目前，SOX6 的表达是否与胃癌及其病理分期有关尚不清楚。本研究结果显示，胃癌患者血清中SOX6 表达水平显著降低，病理分期Ⅲ、Ⅳ期的胃癌患者血清SOX6 表达水平显著低于Ⅰ、Ⅱ期的患者，提示SOX6 与胃癌的发生、发展密切相关，SOX6 表达水平对病理分期具有一定的指导意义，有可能成为临床治疗效果评估的指标之一。ROC曲线结果显示，SOX6 水平诊断胃癌患者的AUC为0.921，敏感度为92.38%，特异度为83.53%。提示SOX6 可在一定程度上作为诊断胃癌患者的生物标志物。

VCAN 是一种大型的硫酸软骨素蛋白多糖，是细胞外基质的主要成分[17]。有研究表明，VCAN 能够通过调节细胞黏附、凋亡、增殖、转移、迁移、侵袭和血管生成等促进癌症进展[18]。Zhai等[19]研究表明，VCAN 过表达可促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭，为胃癌的诊断、治疗和预后提供潜在的生物标志物和基因靶点。张捷等[20]研究表明，VCAN 可能通过调控Toll 样受体、Wnt 样受体等信号通路参与胃癌的发生、发展。本研究结果显示，病理分期Ⅲ、Ⅳ期的胃癌患者血清VCAN表达水平显著高于Ⅰ、Ⅱ期的患者，表明VCAN水平可间接反映胃癌的进展，预测病情严重程度，与张捷等[20]的研究结果一致。本研究进一步通过相关性分析发现，血清中SOX6 表达与病理分期呈负相关，VCAN 表达与病理分期呈正相关，提示二者共同参与胃癌的发生、发展。ROC曲线结果显示，VCAN 诊断胃癌患者的AUC为0.915，敏感度为79.05%，特异度为95.29%，SOX6 联合VCAN 诊断胃癌患者的AUC为0.969，敏感度为94.29%，特异度为90.59%。提示SOX6、VCAN二者联合检测可作为诊断胃癌患者的生物标志物，且诊断效能和敏感度均高于单一指标检测。

综上，胃癌患者血清中SOX6、VCAN 的表达较健康人群和胃良性病变患者有明显差异，在不同病理分期胃癌患者的血清中上述指标也有明显差异，二者联合检测可作为胃癌患者诊断的生物学指标，也可间接反映病情的进展情况，具有重要的临床意义。