伴HR-HPV感染的CIN Ⅲ级患者血清CD105水平变化及临床意义探讨

闫霜，李岳

（1.河南省荣军医院 妇产科，河南 新乡 453000；2.新乡县人民医院 妇产科，河南 新乡 453000 ）

宫颈上皮内瘤变（CIN）是由于人乳头瘤病毒（HPV）感染等所引起的一种癌前病变［1］。CIN Ⅲ级为宫颈高级别鳞状上皮内病变，与高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染关系密切，相关研究显示［2］，CIN Ⅲ级患者的HR-HPV 阳性率为89.80%，严重威胁女性患者的生命健康，故临床一旦发现需尽快进行干预。宫颈环形电切术（LEEP）是临床治疗CIN Ⅲ级较为常用的方法之一，但部分CIN Ⅲ级患者术后可能会存在病变残留、复发的情况，极易进展为宫颈癌，影响患者预后［3］。因此，临床应尽早识别和控制伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者LEEP 术后复发的危险因素，以降低术后复发风险，改善患者预后。内皮糖蛋白（CD105）是位于细胞膜表面的Ⅰ型跨膜糖蛋白，是恶性肿瘤新生血管标志物，对监测恶性肿瘤具有重要意义［4］。目前，CD105 在妇产科领域得到了广泛重视，相关资料显示［5-6］，血清CD105 水平变化与卵巢癌、子宫内膜癌的分期、远处转移等密切相关。但目前尚无关于血清CD105 在伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者中的水平变化及其与预后关系的相关报道。鉴于此，本研究通过观察伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者血清CD105 水平变化，并探讨其与患者术后复发的关系，以为临床早期防控提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入标准：①疾病组均经细胞学及组织病理学确诊为CIN，且均为初诊；②疾病组CIN 病理学分级均为Ⅲ级，均行HPV 检查；③疾病组均符合LEEP 术临床指征，且均接受LEEP 术治疗；④对照组经体检均身体健康；⑤年龄≥18 岁；⑥受试者均知情同意。排除标准：①合并其他严重感染；②合并肝肾严重功能障碍；③月经期、妊娠期、哺乳期女性；④合并其他部位恶性肿瘤；⑤合并免疫系统疾病、造血系统疾病、凝血功能障碍；⑥合并淋巴系统疾病或处于急性炎症期患者；⑦合并宫颈糜烂、阴道溃疡、阴道炎、盆腔炎、尿道炎；⑧近期存在阴道用药、使用抗生素或激素；⑨既往存在宫颈/子宫手术史。脱落标准：①研究过程中失访；②研究过程中发生死亡等不良事件；③其他各种原因提前退出研究者。

根据样本量计算公式N=Z²×σ²/d²（其 中Z＝1.96，σ＝0.5，d＝5.48%，得出N≈320）以及上述标准，同时考虑研究过程中样本量的脱落情况等因素影响，共选取2018 年1 月至2022 年2月河南省荣军医院收治的352 例CIN Ⅲ级患者为疾病组，另选取同期在河南省荣军医院体检的健康女性352 例为对照组。其中疾病组年龄20～52岁，平均（36.36±6.21）岁；体重指数（BMI）18.21～25.33 kg/m2，平均（22.07±2.19）kg/m2。对照组年 龄18～55 岁，平 均（37.07±6.29）岁；BMI 18.50～24.95 kg/m2，平均（21.89±2.07）kg/m2。两组年龄、BMI 比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究已通过医院伦理委员会审核批准。

1.2 方法

1.2.1 血清CD105 水平检测 于对照组体检当日、疾病组入院24 h 内（手术前）及术后6 个月时采集空腹静脉血5 mL，室温静置30 min 后，以3 000 r/min 离心10 min，分离血清，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测CD105 水平，试剂盒为美国R&D Systems 公司产品，均严格按照说明书操作。

1.2.2 HPV 感染检查及分组 患者取截石位，充分暴露宫颈，将采样刷置入宫颈口后，沿顺时针旋转3～5 周以收集宫颈脱落细胞，放入HPV 样本保存液中保存待测。采用实时荧光定量PCR 检测HPV 基因和分型，HR-HPV 包括HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35 等十三种。根据上述检查结果将CIN Ⅲ级患者分为非HR-HPV 感染组和HR-HPV 感染组。

1.2.3 资料收集 收集伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者的临床资料，包括年龄、BMI、吸烟史、饮酒史、孕次、产次、首次性生活年龄、是否多个性伴侣、是否口服避孕药、是否绝经、是否性生活前后清洁外阴、术前HR-HPV 载量、手术切缘状态、病变累及象限、累及腺体。

1.2.4 术后随访和复发判定 术后通过复查的形式对疾病组患者进行1 年的随访。患者每3 个月进行1 次复查，复查内容主要有阴道镜、宫颈液基薄层细胞（TCT）检查、HR-HPV 检查，连续两次HR-HPV 检查阴性即为HPV 转阴，半年内无CIN 病变存在即为痊愈；术后6 个月内TCT 检查为阴性，而6 个月后TCT 检查阳性、组织学诊断为宫颈CIN 病变，则为复发［7］。根据上述标准将伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者分为复发组和未复发组。

1.3 观察指标

①疾病组与对照组血清CD105 水平比较；②非HR-HPV 感染组和HR-HPV 感染组术前血清CD105 水平比较；③复发组与未复发组一般资料比较；④分析伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的影响因素；⑤分析血清CD105 水平对伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的预测价值，统计灵敏度、特异度、曲线下面积（AUC）和95%置信区间（95%CI）。

1.4 统计学方法

统计学分析采用SPSS 26.0 软件。计量资料以均数±标准差（）表示，两组间比较采用独立样本t检验，多样本比较采用单因素方差分析和SNK-q检验；计数资料采用百分率（%）表示，用χ2检验组间差异，若任一理论频数≥1 且≤5 需对检验校正；采用Logistic 回归分析伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的影响因素；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清CD105 水平对伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的预测价值。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 疾病组与对照组术前血清CD105 水平比较

疾病组术前血清CD105 水平为（101.42±15.31）pg/mL，高于对照组［（30.78±6.22）pg/mL］，差异有统计学意义（t=80.200,P＜0.001）。

2.2 非HR-HPV 感染组和HR-HPV 感染组术前血清CD105 水平比较

疾病组352 例患者中HR-HPV 感染的有306 例，非HR-HPV 感染的46 例。HR-HPV 感染组患者术前血清 CD105 水平为（105.37±17.88）pg/mL，非HR-HPV 感染组患者术前血清CD105 水平为（75.15±18.31）pg/mL，HR-HPV 感染组高于非HR-HPV 感染组，差异有统计学意义（t=10.655，P＜0.001）。

2.3 HR-HPV 感染患者复发组与未复发组一般资料比较

术后随访期间，疾病组352 例患者中共脱落24 例。328 例CIN Ⅲ级患者中有35 例术后复发，术后复发率为10.67%，289 例伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者中有32 例术后复发，术后复发率为11.07%。复发组与未复发组年龄、BMI、吸烟史、饮酒史、孕次、产次、首次性生活年龄、是否口服避孕药、是否性生活前后清洁外阴、病变累及象限比较差异无统计学意义（P＞0.05）；复发组是否多个性伴侣、是否绝经、术前HR-HPV 载量高负荷、手术切缘阳性、累及腺体占比及术前血清CD105 水平、术后6 个月血清CD105 水平均高于未复发组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 HR-HPV 感染组复发组与未复发组一般资料比较

2.4 伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的影响因素分析

将伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发情况记为因变量（未复发=0，复发=1），将一般资料中比较显示P＜0.05 的因素记为自变量并进行赋值：多个性伴侣（否=0，是=1）、绝经（否=0，是=1）、术前HR-HPV 载量（低负荷=0，高负荷=1）、手术切缘状态（阴性=0，阳性=1）、累及腺体（否=0，是=1）、术前血清CD105 水平（实测值）、术后6个月血清CD105 水平（实测值）。多因素Logistic回归分析结果显示，绝经、术前HR-HPV 载量高负荷、手术切缘阳性、累及腺体及术前、术后6个月高水平血清CD105 均为伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的危险因素，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的影响因素分析

2.5 血清CD105 水平对伴HR-HPV 感染的CINⅢ级患者术后复发的预测价值

术后6 个月血清CD105 水平预测伴HR-HPV感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的灵敏度、特异度分别为87.50%、72.76%，AUC 为0.841（95%CI：0.794～0.881）（P＜0.05），见图1。术前血清CD105水平预测伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的灵敏度、特异度分别为81.25%、71.98%，AUC 为0.808（95%CI：0.758～0.852）（P＜0.05），见图2。

图1 术后6 个月血清CD105 水平预测伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的ROC 曲线

3 讨论

CIN Ⅲ级患者处于重度不典型增生或原位癌阶段，进展为浸润癌的风险较高［8］。HR-HPV 感染是CIN 发病的独立危险因素，并且与宫颈癌关系密切。HR-HPV 感染不仅能够加快CIN 增生，还是CIN 转向癌化的重要因素［9］。临床上主要通过LEEP 术治疗CIN Ⅲ级，通过电功率将病灶切除，可有效阻断病情进展，但仍有少数患者术后复发，最终可进展为宫颈癌。本研究结果显示，伴HRHPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的发生率为11.07%，与刘静云等［10］研究报道的11.70%相近，均提示伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者具有较高的术后复发风险。故早期评估伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发风险，并及时采取有效措施，对预防术后复发发生尤为重要。

本研究中疾病组术前血清CD105 水平高于对照组，HR-HPV 感染组术前血清CD105 水平高于非HR-HPV 感染组，提示血清CD105 水平在CINⅢ级患者中异常升高，并与HPV 感染有关。伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者异常增生的细胞占据上皮内2/3 以上或达全层，属宫颈癌癌前病变，与宫颈癌有相同的促血管新生的能力。CD105 作为存在于细胞表面的同源二聚体跨膜糖蛋白，主要表达于肿瘤相关的新生血管内皮细胞上，被标记的新生血管与肿瘤组织的增殖及转移密切相关，在活跃增殖过程中患者机体内血清CD105 浓度升高［11］。本研究结果显示，复发组术前、术后6 个月血清CD105 水平均高于未复发组，且经多因素Logistic 回归分析发现，术前、术后6 个月血清CD105 水平均为伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的危险因素，提示血清CD105 水平与伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者预后密切相关。高水平的血清CD105 与转化生长因子β1（TGF-β1）受体结合，不仅阻断了TGF-β1/ALK5 的信号传导，同时阻断了TGF-β1 对内皮细胞增殖、转移的抑制作用，促进异常增生的细胞增殖、转移、侵袭，增加伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发风险［12-13］。SUR 等［14］研究显示，在结直肠癌预后生物标志物研究中，CD105 水平高于健康对照组，并与结直肠癌患者的不良预后呈正相关。高水平的血清CD105 与TGF-β1 受体相结合，能够诱导Smda 蛋白磷酸化，并使磷酸化Smda 蛋白与转录因子相互作用，通过多种信号途径使基因转录，从而减弱TGF-β1 的生物学效应，抑制TGF-β1 的信号传导，使被侵犯组织部位细胞增殖、迁移，加剧HPV 感染，最终导致术后复发［15］。另本研究ROC 结果显示，术后6 个月血清CD105 水平预测伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的灵敏度、特异度、AUC 分别为87.50%、72.76%、0.841，术前血清CD105 水平预测患者术后复发的灵敏度、特异度、AUC 分别为81.25%、71.98%、0.808，提示血清CD105 水平对伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发具有较好的预测效能。因此，临床可通过监测伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者血清CD105 水平来预测预后情况，以指导临床干预，以期降低患者术后复发风险。

另本研究发现，绝经、术前HR-HPV 载量高负荷、手术切缘阳性、累及腺体均为伴HR-HPV感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的危险因素，与既往研究结果一致［16-17］。女性绝经后各项机体功能均出现一定程度上的减退，免疫功能下降，增加感染HPV 风险，另患者宫颈萎缩，宫颈移行带区移入宫颈管内，更易复发。HR-HPV 载量与感染的上皮细胞数量和感染细胞病毒数量直接相关，术前HR-HPV 载量高负荷提示HR-HPV 复制更为活跃，整合到宿主细胞的风险增加，易进入皮肤组织深处，导致术后复发；此外，术前HR-HPV载量高负荷会增加手术难度，术后易出现病灶残留，提高术后复发风险。手术切缘阳性患者手术范围较为保守，病变组织未完全切除，残留病变组织仍具有增殖分化能力，增加了复发风险。SAND 等［18］研究显示，手术切缘阳性增加了复发疾病风险，且具有一定的诊断效能。累及腺体会导致手术难度的增加，病灶切除不理想，从而出现残留，导致术后复发风险高。

综上所述，血清CD105 水平在伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者中异常升高，是伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的危险因素，且对患者术后复发具有较好的预测价值，另绝经、术前HR-HPV 载量高负荷、手术切缘阳性、累及腺体均是伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ级患者术后复发的危险因素，临床可通过监测上述因素用以指导治疗与防控，降低术后复发风险，改善患者预后。