色谱技术在木犀草素中的研究进展

徐 涛,夏鹏志,金 磊,李昶昶,程子钰

(合肥学院 生物食品与环境学院,安徽 合肥 230000)

1 木犀草素

木犀草素(图1)是一种常见的黄酮类化合物,存在于多种植物中,如木犀草、胡萝卜、香芹等。它具有多种生物活性和药理学特性,被广泛研究和应用。与其他2-苯基苯并γ-吡酮衍生物类似,其基本骨架具有C6—C3—C6体系的特征,包含两个苯环和一个C2—C3双键和一个氧原子连接的桥。研究表明木犀草素和其他类黄酮的药理作用与C5、C7、C3′和C4′碳上羟基的存在以及C2—C3上双键的存在密切相关。—OH基团在C3′位置的存在将木犀草素与芹菜素区分开来,而在C3上缺乏这一基团是将木犀草素置于黄酮基团中的一个元素[1-2]。

图1 木犀草素的化学结构

木犀草素具有抗氧化、抗炎、免疫调节等多种生物学作用。富含木犀草素的植物在传统医学中经常被用于治疗各种疾病,如高血压、炎症性疾病,甚至癌症。因为木犀草素有四个羟基(在C5、C7、C3′和 C4′位置),所以可以产生许多木犀草素的衍生物。各种类型的官能团可以附着在这些位置上,形成大量不同但结构相似的分子。

目前市场上越来越多的草药制剂含有木犀草素,如半枝莲[3],它是一种药用植物。为了确定这类产品的质量,使用合适的分析方法是很重要的。然而,现有木犀草素的定量方法缺乏质量评价,也缺乏对它们进行比较的信息。

色谱法在分析化合物的仪器方法中占有主导地位。它是一种分离分析化合物的物理化学方法,可以对被检测物质进行检测鉴定和定量测定,准确度高。色谱法与其他分析方法的耦合有助于更准确地检测和分析,特别是对复杂的有机化合物。色谱技术是基于物质在固体或流动相中的分离和分析原理的一种技术。它利用物质在不同相中的相互作用力的差异,将混合物中的不同成分分离开来,并使用检测器进行分析和定量。常见的色谱技术包括气相色谱(GC)、液相色谱(LC)和薄层色谱(TLC)等。在色谱技术中,样品首先通过一个固定相(如固定在柱子上的填料或涂覆在薄层上的材料)与流动相(如气体或液体)相互作用,物质在固定相和流动相之间以不同速率移动。由于不同物质之间的相互作用力不同,它们在固定相和流动相之间的分离度也不同,从而实现了不同成分的分离。分离完成后,通过检测器对分离出的物质进行检测和定量。检测器可以根据样品的特性进行选择,常见的检测器包括紫外-可见光谱检测器、荧光检测器、质谱检测器等。通过检测器的信号,可以得到分离出的物质的浓度、结构等信息。

色谱技术分类的一个标准是流动相的物态不同,可以将色谱技术分为液相色谱、气相色谱等,还可以根据操作方式的不同,可以将色谱技术分为常压色谱、高效液相色谱、超高效液相色谱等。常压色谱操作相对简单,适用于一般分析;高效液相色谱(HPLC)使用高压泵强制流动相通过固定相,分离效果更好;超高效液相色谱(UHPLC)是HPLC的进一步发展,具有更高的分离效率和灵敏度。许多不同的色谱技术都可用于木犀草素的分析,其中包括薄层色谱法(TLC)、高效薄层色谱法(HPTLC)、液相色谱法(LC)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)和逆流色谱法(CCC)。

本研究的目的是将木犀草素及色谱分析技术领域的知识和信息系统化。本研究首次对木犀草素的色谱分析技术进行了系统的综述,包括TLC、HPTLC、LC、HPLC、GC和CCC。

2 木犀草素的色谱分析技术

2.1 木犀草素的薄层色谱分析

苏联于1938年报道了Nikolay A. Izmaylov和Maria S. Shrayber将载体材料作为薄膜分布在玻璃板上,可以用类似于纸色谱的方式操作板和支撑材料。直到1956年德国化学家Egon Stahl开始深入研究其应用,该方法的潜力才被广泛认识。在20世纪50年代,薄层色谱法逐渐发展成为一种常用的分析技术。这一时期,Egon Stahl以及其他科学家对薄层色谱技术进行了改进和扩展,包括对固定相、槽设计和检测方法的改进。20世纪60年代末,薄层色谱法开始在不同领域得到广泛应用。自20世纪70年代以来,薄层色谱法继续发展和改进,包括新型固定相、新的检测方法以及自动化系统的引入,进一步提高了分离和分析的准确性和效率。

在近几十年间,薄层色谱法在成分鉴定、混合物分离、药物分析、农药残留检测、食品研究等领域发挥了重要作用,并衍生出其他技术,如高效液相色谱(HPLC)、超高效液相色谱(UHPLC)等。

薄层色谱(TLC)作为一种分离和分析技术,至今仍被广泛应用于科学研究和分析实验室中。薄层色谱法的一般步骤是首先准备样品,接着准备TLC板,然后涂布样品,再接着运行分离,最后进行可视化测量和数据分析,适用于实验室初学者和快速分析需求。TLC检测快速高效,可以在短时间内完成样品分离和分析,通常只需几十分钟至几小时。相比于其他分离技术,如柱层析,TLC具有更快的分离速度和高效性。TLC使用的材料相对廉价,成本较低,且由于其分离速度快,对溶剂消耗也相对较少,节约了实验成本。TLC还可以同时分离和分析多个样品,例如对于混合物的分离和组分分析,这使得TLC在样品检测、药物分析和天然产物研究等领域具有广泛的应用。通过观察TLC板上斑点的位置、颜色和形状,可以初步判断不同成分的相对含量和分离程度。虽然TLC不能提供定量结果,但可以从定性角度对样品进行快速评估。此外,在薄层色谱板上,不存在消失或未预料到的峰的问题,因为整个样品都被应用并且可以视觉检测到。HPLC和GC中,保留度高的物质形成最宽的峰,分辨率最差;而TLC中,保留时间最长(比移值最低)的物质形成最紧的区,检测灵敏度最高[4]。

TLC和柱层色谱法(CC)都基于不同物质在固定相和流动相之间的不同亲和性来实现分离。它们都是根据化合物的相对极性来进行分离。因此,在某些情况下是可互换的技术,可以结合使用,这大大降低了成本和分析时间。为达到这一目的,理想情况下TLC和CC都使用相同的吸附剂,不过也可以使用其他溶剂体系。CC的洗脱可以在一个流动相中进行,也可以在色谱过程中改变其组成(梯度洗脱),从而增加洗脱力。在这种情况下,TLC流动相要相应改变。

固定相是TLC中非常关键的组成部分,它对于分离混合物的影响非常显著。固定相的极性决定了它与待分离混合物之间的相互作用。不同极性的固定相对于不同类型的化合物有不同的选择性。例如,对于极性化合物,使用硅胶固定相可以提供更好的分离效果,而对于非极性化合物,更低极性的固定相会更适合。具有亲脂性(非极性)固定相的反相体系也很常见,但在黄酮类化合物的分析中意义不大。目前,硅胶是最常用的TLC固定相之一,具有广泛的应用。它对许多不同类型的化合物有较好的分离效果,特别适用于中性和极性物质的分离。

黄酮类化合物通常在紫外光源下进行检测。常用的波长有254 nm和366 nm。这些波长通常适用于大多数黄酮类化合物的可视化。木犀草素衍生物也显示荧光,可以使用适当的衍生化试剂增强,例如使用所谓的NP/PEG试剂。最常见的步骤是用质量分数2%的AlCl3甲醇溶液喷涂板。密度计也可用于该物质的定性分析。通过比较被试物质与标准品的比移值(Rf)和吸收光谱进行分析。如薄层色谱法测定不同属杨树种及杂种花蕾中部分黄酮的含量实验中,采用CD-60密度计(Desaga)进行密度测量。质量分数2%的AlCl3甲醇溶液衍生化后,使用TLC显像仪(Camag)在366 nm处可以进行密度分析[5]。此外,分析物也可以通过从板上提取分离物质来鉴别。然后,利用质谱(MS)、紫外光谱、拉曼光谱或其他技术进行分析。尽管木犀草素的TLC分离(表1)可以在不同类型的固定相中进行,如聚酰胺相和纤维素相[6-7],但最常见的还是在硅胶板上进行分离。例如该方法已应用于草属植物开心果中木犀草素的分析[8]。在薄层色谱检测中可以通过调节两种溶剂的配比来调节展开剂的极性大小,对于一般极性的化合物,用石油醚乙酸乙酯体系就可以,如果化合物的极性很大,就要选择二氯甲烷甲醇体系。此外,木犀草素分离的流动相由非质子有机溶剂(如乙酸乙酯或丙酮和H2O的混合物组成),能更好地实现分离。

表1 TLC和HPTLC对木犀草素的分析

薄层色谱法可以用于初步评估样品混合物的成分和相对含量,以指导后续的HPLC分析。它可以提供快速分析结果,帮助确定样品中具有较高含量的成分,并优化HPLC分离条件。例如,Markus Ganzera等用乙酸乙酯-甲酸-乙酸-水洗脱的硅胶层可以很容易地区分这两个田蓟物种的黄酮类化合物,然后采用高效液相色谱法定量测定木犀草素等四种黄酮类化合物[16]。薄层色谱法还可以在聚酰胺板上进行薄层色谱检测,并找到了最佳流动相。此外,薄层色谱能够用于分析被测物的单个组分。采用薄层色谱-高效液相色谱-脉冲安培-质谱联用(TLC-HPLC-PDA-MS)技术对雪绒花草药提取物中木犀草素等酚类化合物进行分析,还利用紫外和核磁共振(NMR)对这些化合物进行了鉴定[17]。

与其他色谱技术相比,高效薄层色谱法(HPTLC)减少了分析时间和成本,并提供了更高的分离效率。它甚至适用类似于TLC的粗提取物的分析,并且使用相对少量的溶剂来分析几种样品,使该方法具有环保性。在木犀草素的分析中(表1),HPTLC硅胶60大部分被用作固定相与薄层色谱类似,有机溶剂、水等的混合物常被用作流动相。

高效薄层色谱法也可作为其他色谱技术的补充方法。Ivan Lozada Lawag等采用高效薄层色谱(HTPLC)衍生的酚类数据库对酚类成分进行鉴定,并采用HPTLC对鉴定的酚类化合物进行定量。最后,使用DPPH-HPTLC生物自显像法鉴定了蜂蜜抗氧化活性的成分。结果表明,蜂蜜中含有木犀草素[12]。

利用衍生化试剂和366 nm紫外光比较Rf系数进行检测。衍生化后的特征荧光带为样品中主要黄酮类化合物的鉴定提供了重要线索,同时采用高效液相色谱-紫外光谱法或二极管阵列检测器(HPLC-UV/DAD)技术对这些化合物进行同时检测和定量。

2.2 液相色谱法分析木犀草素

液相色谱法(Liquid Chromatography,简称LC)结合串联质谱(LC-MS/MS)(表2)在分析多组分混合物(如草药提取物)时特别有用,因为它不需要大量的样品。为了进一步减少其他因素对分析的影响,越来越多地使用更先进的技术,包括多种检测方法的组合,例如采用液相色谱-质谱联用技术对大西洋黄连木亚种提取物进行了研究[18]。用甲醇和0.05%三氟乙酸梯度洗脱。对该物种的分析显示,其中存在木犀草素及其衍生物。

表2 LC对木犀草素的分析

在众多色谱方法中,以流动相为液体、固定相为固体的吸附色谱法是十分常见的方法。这种方法的应用比气相色谱法广泛得多,因为它允许分析液体和可溶性固体形式的物质。高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,简称HPLC)是将待分离的混合物通过高压泵送进液相色谱柱中,通过流动相在固定相(填充柱或固定相涂层)上的相互作用进行分离。与传统色谱分析相比,HPLC高分离效率和灵敏度,定量准确性和重复性好,还可以通过调整流动相和柱温等参数进行优化,适应不同样品和分析要求,是目前主要检测分析手段。然而改进的方法,如液相色谱结合质谱(LC-MS),越来越多地用于分析天然化合物,其中包括木犀草素。HPLC仪器和技术不断创新,包括新型柱材、检测器和分离模式的引入(如手性色谱、离子交换色谱、凝胶色谱等)。此外,HPLC与其他分析技术(如质谱联用、光谱检测等)的结合也得到了广泛应用操作。

在HPLC中流动相是一种溶液或混合溶剂,通过高压泵送进色谱柱中。固定相则通常是由细小颗粒构成的柱填料(也称为固定相床)。填料可以是无机材料(如硅胶)、有机聚合物(如聚合物高分子)等。通常样品溶液被注入流动相中,并被输送到色谱柱中。样品混合物中的化合物会以不同速度在固定相表面上与流动相相互作用。这个相互作用可以是吸附作用、分配作用、离子交换作用等,根据不同的分离原理,HPLC可以采用不同的柱材和减速剂。在分离结束后,溶液中的化合物通过检测器进行检测。常见的检测器包括紫外-可见光检测器(UV-Vis)、荧光检测器、质谱检测器等。这些检测器可以测量样品分子与光的相互作用,以获取关于化合物的信息。通过比较待测化合物的峰面积或峰高与已知标准样品的峰面积或峰高,可以进行化合物的定量分析。通过校正曲线或内标法等方法,可以确定待测化合物的浓度。

选择适当的色谱柱是进行高效液相色谱法(HPLC)分析的关键步骤。色谱柱的选择应基于样品特性、分离目标和分析条件。首先确定分离和分析的化合物的特性,如极性、分子大小、溶解度等。根据样品的物化性质,有选择性地选择色谱柱。其次根据分离原理和样品特性选择适当的色谱模式。接着选择柱填料的类型和粒径。填料通常使用硅胶,因为硅胶是最常见的固定相材料之一,它在反相色谱中广泛应用。它具有较大的表面积、中等的硅氧键极性和良好的机械稳定性。硅胶柱常用于极性化合物的分离。但它在酸性或碱性条件下会有一定的化学不稳定性。低pH条件下,硅胶可能会被腐蚀或溶解,导致柱性能下降。高pH条件下,硅胶表面可能发生硅氧键的水解作用,导致失去固定相的性能和效果,并且硅胶通常具有亲水性,对于极性化合物的吸附能力较强。这使得在一些非极性化合物的分离中,硅胶柱的选择性较低,容易引起保留不良或分离不彻底的问题。为了更好地分离和利用硅胶这一材料,在硅胶表面经过修饰,覆盖有长链烷基(通常是十八烷基),这种柱称为C18柱,适用于分离疏水性较强的化合物。硅胶这种填料可以有不同的性质取决于硅胶类型和生产方法。如氨基柱是一种正相色谱填料,也是由硅胶表面经氨基功能团修饰,使得氨基柱对极性化合物显示良好的吸附能力。填料的粒径通常以微米(μm)为单位,如 3 μm、5 μm、10 μm等。较小的粒径可以提供更高的分离效率和灵敏度,但也会增加色谱柱的压力。根据分离需求和仪器性能,选择合适的柱填料和粒径。例如,从枸杞中分离木犀草素[23]以及从山茱萸中分离木犀草素[24],见表2。

在高效液相色谱中,选择合适的流动相对色谱分离也非常重要。应考虑分析物的类型、混合物组成、固定相和所用检测器。在反相系统中最常用的是三种溶剂,通常使用甲醇(MeOH)/水或乙腈(ACN)/水的混合物。随着有机溶剂用量的增加,非极性物质的保留时间缩短,而H2O的加入延长了其保留时间。根据经验,含有ACN/H2O的系统比含有MeOH/H2O的系统效率更高。然而,在正相体系中,极性通过添加另一种极性更高的溶剂如三氟乙酸(TFA)而适当改变[32]。根据现有文献,大部分用于木犀草素分析(表3)的流动相都由ACN/H2O组成[23-24,26-28,31]。

表3 HPLC对木犀草素的分析

在HPLC检测过程中,洗脱可通过等度和梯度两种方式进行。等度洗脱适用于具有较简单样品组分的化合物分离。它常用于分析目标化合物在相对短的时间内完成分离,或者在不需要显著增加分离度的情况下进行定性或定量分析。在等度洗脱中,流动相的组成根据待分离化合物的性质和分析要求选择。通常流动相可由水和有机溶剂(如甲醇、乙腈等)组成,可以根据需要调整它们的比例。在一些特殊情况下,还可以添加缓冲剂、酸或碱来改变流动相的酸碱度。在梯度洗脱中,流动相的比例会变化,有机溶剂的比例逐渐增加,而水的比例逐渐减少。这样的变化可以通过线性梯度、非线性梯度或阶梯梯度等方式来实现。通过梯度洗脱可以提高分离度,减少共洗物质的干扰,从而更好地分离和定量目标化合物。

目前,检测最常用的方法是二极管阵列检测器(DAD)(也称为光电二极管阵列检测器,PDA),然而,通常情况下,DAD与其他检测器结合使用以进行结构测定。DAD结合其他检测方法分析植物中木犀草素衍生物的例子包括：使用串联质谱(MS/MS)和核磁共振(NMR)分析小麦幼苗[33],二极管阵列探测器结合电喷雾电离和质谱(DAD-ESI-MS)分析Lathyrus cicera L. 种子[34],电喷雾电离结合串联质谱(ESI-MS/MS)分析芹菜[35]。高效液相色谱-光二极管阵列检测-质谱(HPLC-PAD-MS)技术被用于分析雪绒花高山地区(Leontopodium alpinum)的空中开花部分[17]。从该提取物中共分离出14种化合物,包括几种木犀草素衍生物和木犀草素。采用梯度洗脱,流动相为水- 0.9%甲酸∶0.1%乙酸∶1.5% 1-丁醇(均为v/v;溶剂A);乙腈加30%甲醇∶0.9%甲酸∶0.1%醋酸(均为v/v;溶剂B)和甲醇(溶剂C)。完成分离后的组分结构通过核磁共振谱进一步证实。

对所有分析物具有统一的液相色谱检测的探索正在进行中。到目前为止,还没有找到理想的解决方案,需要根据分析的特点类型选择特定的检测器。缺乏一种适用于广泛条件下能够定性和定量分析的通用检测技术,这使得开发普遍适用的HPLC方法仍然具有挑战性。在实验室大多数分析仍然是通过高效液相色谱-紫外进行的。对于非紫外线活性成分的检测,基于气溶胶的检测器,如蒸发光散射检测器(ELSD)或电雾式检测器(CAD)等,这些代表了高效液相色谱-质谱的一种方法,在未来可能会越来越受欢迎。高效液相色谱-质谱是一个非常通用和强大的工具,它可以被认为是一种特殊的检测方法,这项技术虽然很昂贵,但检测精度高的特点将使其在许多领域得到广泛应用。

2.3 气相色谱法分析木犀草素

气相色谱法(Gas Chromatography,简称GC)是一种常用的物质分离和分析技术。气相色谱可以与多种检测技术相结合,如气相色谱结合质谱(GC-MS)、气相色谱结合串联质谱(GC-MS/MS)或气相色谱结合飞行时间质谱(GC-Tof-MS),从而大大提高了灵敏度和准确性。GC有不同类型的探测器,而不同类型的探测器具有不同的最佳工作温度。例如,氢火焰离子化检测器(FID)通常在300～400 ℃之间,以确保良好的离子化和检测灵敏度。热导检测器(TCD)的工作温度通常在100～200 ℃之间。所以GC所分析的物质应热稳定,且其沸腾(或升华)温度不应超过400 ℃。

GC的流动相选择取决于分析目标和所使用的柱。在GC中,流动相通常指的是气相载气,它在色谱柱中传递样品。通常情况下,氮气、氢气和氦气是最常用的载气选择。这些气体均为惰性气体,不会影响样品的分离和检测。当然,载气的流量需要根据柱的类型、分析目标和样品性质进行适当的调整。较高的流量可以加快分析速度,但可能会影响分离效果和检测灵敏度。选择高纯度的载气以确保准确的分析结果。此外,载气需要保持干燥以避免引入水分对分离和检测产生干扰。某些柱具有特定的要求,需要选择与柱相兼容的载气。例如,使用具有极性固定相(比如聚酯或聚酰胺柱)的分析,可能需要使用氢气作为载气以获得更好的分离效果。

在气相色谱(GC)中,开放式柱(Open Tubular Column)是一种常用的柱类型。开放式柱也被称为毛细管柱(Capillary Column),其内部是一个细长的毛细管。开放式柱的内径通常在0.1～0.53 mm之间,相比之下,填充柱的内径较大。这种细小的内径使得开放式柱能够实现更高的分离效能和更好的峰形。由于开放式柱的内径较小,分析物在柱中的扩散速度更快,从而实现更高的分离效能。开放式柱通常具有较长的有效长度,提供更大的分离空间。开放式柱由于毛细管结构的特点,具有较好的热传导性能,适用于高温分析。此外,由于柱内的气体流动速度较快,开放式柱也适用于高速分析,提高样品的分析效率。

木犀草素的分析按照分析其他类黄酮的一般程序进行(表4)。木犀草素挥发性的检测采用质谱法,最常见的是氦气被用作载气。气相色谱-质谱法可以作为一种特异性最高的补充分析技术。

表4 GC对木犀草素的分析

2.4 逆流色谱法分析木犀草素

逆流色谱法(Counter Current Chromatography,简称CCC)是一种无固定相的液相色谱技术,它利用两种不相溶的液体相通过旋转柱来实现样品的分离和纯化。CCC的原理基于两种液相之间的分配平衡。它利用两种不同极性的液相相互配平,其中一种液相为移动相(移相器)而另一种液相则为静止相(静相器)。

静止相被固定在柱内,而旋转柱使两种液相形成重力计数并保持连续的混合和分离。CCC的基本步骤如下：首先准备两种不相溶的液相,其中一种为移动相,另一种为静止相,然后将两种液相注入CCC柱中,使其分层。接着开始旋转柱,产生离心力和地心引力,使两种液相分散形成旋转流动。在注入样品进入柱时,样品在两种液相间进行分配平衡,并根据分配系数在两相间移动。最后根据目标化合物的特性,逐步收集柱出口的分离物。

CCC不需要使用固定相柱,因此可以分离一些传统液相色谱无法处理的样品,例如高分子量化合物。CCC具有良好的分离效能和分离能力,能够实现高分离度和纯度的目标化合物。由于没有固定相的吸附损失,CCC可以实现高药物回收率。

表5给出了用快速逆流色谱法分离含有木犀草素的混合物的条件。从不同植物化学物质的混合物中分离木犀草素通常是用乙酸乙酯与醇和水的混合物中的一种进行的。分离后,需要用核磁共振测定结构。然而,代替核磁共振,高分辨率质谱(HRMS)也可以用于结构确认。

表5 CCC对木犀草素的分析

尽管逆流色谱法(CCC)有许多优点,但也存在一些缺点：CCC系统相对复杂,需要特殊的旋转柱和控制装置,这增加了设备配置和维护的复杂性,同时也增加了设备成本。它的成功与否高度依赖于液-液界面的管理。液-液界面的稳定性对分离效率和纯化能力至关重要。然而,液-液界面不稳定容易引起相混合和扩散,从而降低分离性能。CCC需要选择两种不相溶的液相作为移动相和静止相。找到合适的液相对于目标化合物的亲疏性具有挑战性。液相的稳定性、成本和可得性也是需要考虑的因素。由于液-液分配平衡的需求,CCC的流速通常较低,这导致分离和纯化过程可能比较耗时。虽然某些改进的CCC系统可以处理大容量样品,但普遍来说,样品容量受到限制,使得大规模分离变得困难。在CCC中,柱的再生相对困难,因为静止相固定在柱内,清洗和再生过程相对复杂。

3 结语

目前用于测定木犀草素的色谱方法提供了现有知识的系统总结。毫无疑问,色谱分析可以作为木犀草素定性评价和定量测定的有效方法。在繁琐而耗时的多成分植物提取物的测定中,包括那些含有最普遍的木犀草素的植物提取物,将大规模色谱技术与不同检测模式相结合是最有效的方法,如LC-MS/MS或LC/NMR/MS,这是一种非常有用的方法。色谱与其他分析技术的这种有益耦合扩展了其分析能力,同时还提高了测定的准确性、灵敏度和精密度。尽管LC在天然化合物分析中占据主导地位,新的色谱方法也在不断发展,但TLC/HPTLC在木犀草素的植物化学分析中并没有失去其重要地位。该技术相对简单,价格低廉,同时便于对测试化合物进行快速定性和定量分析。此该技术还在不断改进,其适用范围正在扩大。在所有色谱技术中,气相色谱是最不适合分析植物提取物的,包括那些含有木犀草素的植物提取物。尽管与各种检测技术(MS、MS/MS、TOF-MS)相结合时具有很高的灵敏度和效率,但该色谱分离过程涉及高温和分析物衍生化。正是由于这一点,气相色谱法较少用于多酚类化合物的分析。虽然植物种类的复杂性是色谱分析中的一个难题,但色谱法仍然是目前测定天然化合物的主要分析技术。