HBV DNA阳性献血者感染标志物定量分析

洪淑芳 吴昕 杜晓明 钱江

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是一个重大的公共卫生问题，是肝硬化和肝细胞癌发生的主要危险因素，2019 年全球估计有2.96 亿人HBV 慢性感染，造成82 万人死亡。HBV 可通过血液传播，产生急性或慢性感染，大多数急性感染都是无症状的[1]。因此，输血前HBV 检测对保障血液安全至关重要。采供机构筛查献血人群中的HBV感染主要通过双厂家酶联免疫吸附试验（enzymelinked immuno sorbent assay，ELISA）检测乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）和核酸扩增试验检测（nucleic acid amplification，NAT）HBV DNA。本研究通过分析血站HBV DNA 阳性献血者HBV感染标志物定量特征，旨在探索HBsAg阴性乙肝献血者与HBsAg 阳性乙肝献血者诊断标志物的区别，为相关标志物发掘提供有价值的研究基础，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2019年9 月至2021年5 月金华市中心血站核酸阳性献血者标本46 324 例，所有标本均排除丙型肝炎、艾滋、梅毒感染。献血者均符合《献血者健康检查要求》，按照《血站技术操作规程（2019版）》和质量体系文件的规定，献血前经过必要的征询、一般检查和血液初筛检测，合格后采血。

1.2 仪器与试剂 Cobas S 201 核酸血液筛查系统（由美国罗氏公司生产）、EasyCuta 全自动时间分辨荧光分析仪（由苏州新波公司生产）、EZbead System-32核酸提取仪（由上海浩源公司生产）。HBVHCV-HIV（1+2型）核酸检测试剂盒（cobas@TaqScreen MPX Test，由美国罗氏公司生产）、乙肝五项[HBsAg；乙肝表面抗体（hepatitis B surface antibody，HBsAb）；乙肝e 抗原（HBeAg）；乙肝e 抗体（HBeAb）；乙肝核心抗体（HBcAb）]检测试剂盒（由苏州新波公司生产）、HBV DNA检测试剂盒（由上海浩源公司生产）。

1.3 方法

1.3.1 时间分辨免疫荧光分析法（timed-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA）采用EasyCuta全自动时间分辨荧光分析仪对NAT检测HBV DNA阳性的标本进行乙肝五项定量检测，通过剂量-反应曲线得出定量值。

1.3.2 实时荧光定量PCR 法（real-time PCR，RTPCR）采用EZbead System-32核酸提取仪对NAT检测HBV DNA阳性的标本进行HBV DNA定量检测。

1.4 统计学方法 采用SPSS 26.0软件对数据进行统计分析。计数资料两组间比较采用χ2检验或Fisher精确概率法，计量资料两组间比较采用独立样本t检验或秩和检验。设P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 金华地区HBV DNA阳性基本情况 46 324 例标本中，发现HBV DNA阳性124 例，阳性率0.27%，平均HBV DNA 浓度（1.82±0.94）lgIU/mL。其中HBsAg 阴性有64 例，占51.61%；HBsAg 阳性有60 例，占48.38%。

2.2 两组不同乙肝血清学模式比较见表1

表1 两组不同乙肝血清学模式比较/例（%）

由表1 可见，HBsAg 阴性组HBcAb 阳性率为93.75%，主要以血清学模式3（HBeAb与HBcAb共同阳性）为主，占37.50%；其次为模式2（单独HBcAb阳性），占28.12%。HBsAg 阳性组HBcAb 阳性率为100%，主要以血清学模式3（HBeAb与HBcAb共同阳性）为主，占88.33%，差异有统计学意义（P均＜0.05）。

2.3 两组血清学标志物HBcAb、HBsAb浓度比较见表2

表2 两组血清学标志物HBcAb、HBsAb浓度比较

由表2 可见，HBsAg 阴性组HBcAb 浓度明显低于HBsAg 阳性组，差异有统计学意义（Z=-4.87，P＜0.05）。HBsAg 阴性组HBsAb 浓度明显高于HBsAg阳性组，差异有统计学意义（Z=-5.43，P＜0.05）。

2.4 两组HBV DNA 定量比较 HBsAg 阴性组HBV DNA 定量为1.33（0.90，1.70）lgIU/mL，明显低于HBsAg阳性组2.15（1.70，3.06）lgIU/mL，差异有统计学意义（Z=-6.67，P＜0.05）。

3 讨论

HBV是一种嗜肝性DNA病毒，可导致终身慢性感染，进而发展成为肝硬化和肝癌[2]。目前严格的献血者HBV 检测是降低输血传播HBV 风险的唯一方法。HBV DNA 是HBV 的基因组，其检测是判断献血者体内HBV复制状态的金标准，具有很高的灵敏度和特异性，能有效缩短HBV检出的窗口期。

由于检测方法的局限性、HBV S 基因突变等原因，存在HBsAg 假阴性的情况[3]。张菊萍等[4]研究发现，TRFIA 法定量检测HBV 感染准确度较核酸检测高，在HBV-M 多次检测中差异极其微小。本研究对HBV DNA 阳性献血者进一步运用TRFIA 定量检测乙肝五项，其中HBsAg 检测阴性标本的HBcAb 阳性率为93.75%，HBsAg 检测阳性标本的HBcAb 阳性率为100%。HBcAb 是HBV 既往感染的指标，在HBV 感染时具有很高的阳性率。Esposito 等[5]研究发现HBcAb 可辅助诊断HBsAg 阴性的HBV 感染，给免疫抑制或免疫缺陷的受血者输注HBcAb 阳性的成分血时需谨慎，极易引起输血后HBV 再激活。本研究发现HBsAg 阴性组HBcAb 浓度低于HBsAg 阳性组，表明高浓度的HBcAb增加了HBV感染风险。

HBsAb 是具有保护功能的中和抗体，可与HBsAg 特异性结合，HBsAb 中的Fab 成分可以通过阻止Pre-S1和NTCP结合位点之间的相互作用来阻断HBV 进入肝细胞，也可以阻断HBsAg 的“a”决定因子与低亲和力细胞受体HSPG之间的相互作用清除HBV 感染，低浓度的HBsAb 增加了HBV 感染风险[6]。本研究通过对HBV DNA 阳性献血者HBsAb浓度定量分析，发现HBsAg阳性组HBsAb阳性仅为5%，且HBsAb浓度较低为0.80（0.17，1.46）mIU/mL。HBsAg 阴性组HBsAb 阳性率和HBsAb 浓度略高于HBsAg阳性组，但HBsAb浓度仍然较低。因此加强人群乙肝疫苗宣传与补种有利于切断HBV输血传播。

本研究中HBsAg 阴性组HBV DNA 定量低于HBsAg 阳性组。可能是因为在HBV感染早期、HBV感染康复期、血清学无症状的慢性肝炎或HBsAg发生突变时，血浆中无法检测到HBsAg，HBV处于低复制状态，血浆HBV DNA浓度较低[7]，即使是灵敏度较高的核酸检测也无法持续检测到血浆中的HBV DNA，当输注大剂量血液制品或受血者免疫低下时，易造成HBV感染[3]。因此，即便开展了核酸检测，也应注意全过程的质量控制，保持检测的灵敏度。

综上所述，本研究初步表明在HBV DNA 献血者中，HBsAg 阳性献血者的HBcAb 浓度和HBV DNA 浓度高于HBsAg 阴性献血者，HBcAb 与HBV DNA具有一定的正相关性，输注HBcAb阳性成分血时需更加谨慎。