猪口蹄疫O型灭活疫苗临床免疫效果评估

张国新,张志新,张晓晓,帕提古丽,玉努斯·阿不都,马春江*

(1. 哈密市动物疫病预防控制中心,新疆 哈密 839000;2.伊州区动物疫病预防控制中心,新疆 哈密 839000)

口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)感染引起猪、牛和其它偶蹄动物共患的急性、热性、接触性和高度传染性疾病[1]。口蹄疫具有极强的传染性,未接种疫苗的猪群发病率为100%。且不同物种、不同年龄段的死亡率不同,羔羊为5%～94%,犊牛为80%,哺乳仔猪为100%,大多数成年动物为1%～5%[2]。世界动物卫生组织(OIE)将其列为须报告动物传染病,我国也将其列为一类动物传染病[1,3-4]。该病发病率高且受出口贸易限制,严重危害我国及世界畜牧业的发展,仅非洲由于该病导致的直接损失和疫苗接种损失就高达23.2×108美元[5-6]。

口蹄疫病毒属于小RNA病毒科,口蹄疫病毒属,是一种单股正链RNA病毒[7]。目前已知口蹄疫病毒有7个血清型(O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asia1)和多个亚型[4,8],各血清型具有不同的免疫学、抗原性和遗传特性,且不同血清型间无交叉保护作用[9-10],导致口蹄疫的防控更加困难。口蹄疫O型为全世界危害最大、流行最广及影响最大的一个血清型,也是我国猪口蹄疫的主要流行血清型[11],广泛分布于非洲、亚洲、中东地区和南美洲的许多国家,严重影响动物及其产品进出口贸易[8]。因此,口蹄疫的有效防控不仅对养猪业发展起关键作用,而且对全球公共卫生安全和食品安全有重要意义。为准确掌握不同厂家猪口蹄疫O型灭活疫苗的临床免疫效果,筛选优质、可靠的猪口蹄疫O型灭活疫苗,本研究选择针对本地流行株的猪口蹄疫O型灭活疫苗,利用口蹄疫液相阻断ELISA法筛选出免疫保护效果最佳的口蹄疫疫苗,为哈密市生猪养殖场规范免疫程序和科学选择疫苗提供数据参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物

哈密市某生猪养殖场(存栏母猪在150头以上),全场生猪饲养管理模式、养殖环境及饲料等均一致,猪群整体健康状况良好。随机选择45 d～50 d 品种一致、体重相近,临床观察1周后确认健康的未经免疫的生猪60头,经ELISA检测所有试验猪O型口蹄疫母源抗体低于1:64(表1)。

猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/Mya98/XJ/2021株+O/GX/09-7株),分别来源于目前国内口碑相对较好的A、B、C 3个生产厂家。酶标仪(型号 ELx808)购自美国宝特公司;移液器均购自德国Eppendorf公司。口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒,购自兰州兽研生物科技有限公司(试剂盒批号为:20210922101-7,抗原批号101/36)。

表1 免疫前试验猪母源抗体检测结果Table 1 Detection results of pig maternal antibody in pre-immunization test

1.3 方法

1.3.1 免疫分组和方法 将60头试验猪随机分成A、B、C 3组,每组20头,分栏标记。按照说明书要求分别对A、B、C 3组试验猪肌肉注射猪口蹄疫O型灭活疫苗(2 mL/头),在首免间隔28 d 后进行二免。

1.3.2 采血日龄 A、B、C 3组分别于首免、二免后28 d、二免后60 d 进行前腔静脉采血,收集血清,存于-20 ℃冰箱备检。

1.3.3 检测方法与结果判定 采用口蹄疫O型液相阻断ELISA法检测样品,具体操作参照试剂盒说明书执行。判定标准:当抗体效价≥1∶64,被检血清的免疫抗体视为合格;抗体效价<1∶64,被检血清的免疫抗体视为不合格。

1.4 统计学分析

应用Excel对试验数据进行整理、统计,用GraphPad Prism 8.3 软件对检测数据进行独立样本Kruskal-Wallis检验,比较各组免疫抗体滴度之间的差异性,P<0.05表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 首免28 d后抗体检测结果

由图1可知,首免28 d 后,A、B、C各组之间差异显著(P<0.05)。A组疫苗免疫抗体滴度的中位数明显高于B、C 2组(P<0.05),表明A厂家疫苗首免28 d 后的免疫效果优于B、C 2个厂家。

2.2 二免28 d 后抗体检测结果

由图2可知,二免28 d 后,A、B、C各组之间差异显著(P<0.05)。且疫苗免疫抗体滴度均有不同程度的升高,A组疫苗免疫抗体滴度的中位数高于B、C 2组,集中程度明显高于B、C 2组(P<0.05),表明二免28 d,后A、B、C 3个厂家的疫苗免疫抗体滴度均有所升高,A厂家疫苗免疫效果优于B、C 2家。

图1 首免28 d后免疫抗体滴度对比 *P<0.05,**P<0.01,***P<0.001, ****P<0.0001,下同。Fig. 1 Comparison of immune antibody titer 28 days after first immunization * means P<0.05,** means P<0.01, *** means P<0.001,**** means P<0.0001, the same below.

图2 二免28 d后免疫抗体滴度对比Fig. 2 Comparison of immune antibody titer 28 days after second immunization

2.3 二免60 d 后抗体检测结果

由图3可知,二免60 d 后,A、B、C各组之间差异显著(P<0.05)。且疫苗免疫抗体滴度均有不同程度的下降,A组疫苗免疫抗体滴度的中位数高于B、C 2组(P<0.05),表明二免60 d 后A厂家疫苗免疫抗体维持效果优于B、C 2家。

图3 二免60 d后免疫抗体滴度对比Fig. 3 Comparison of immune antibody titer 60 days after second immunization

3 讨 论

口蹄疫发病率高,传染性强且有多种血清型和广泛的宿主范围[12],可感染牛、猪、山羊、绵羊等70多种偶蹄类动物[13-14]。口蹄疫的临床症状包括发热,口鼻黏膜、趾间、冠状带、乳房和乳头上皮等部位出现水疱病变,还会导致晚期妊娠动物流产、食欲不振,体重和产奶量下降[15],其中很大一部分康复的动物成为口蹄疫病毒的携带者[16]。此外,由于口蹄疫受动物种类[17]、动物品种、宿主免疫状态、病毒感染滴度等因素影响[14],可能导致长期、无症状和持续感染,给口蹄疫的控制和根除带来极大的困难[18]。我国针对口蹄疫的防控政策主要是预防为主、扑杀为辅,对口蹄疫实行强制免疫。目前广泛使用的猪口蹄疫疫苗包括:灭活疫苗[19]、合成肽疫苗[20]和基因工程疫苗等。临床生产中主要使用的是口蹄疫灭活疫苗[21]。然而,由于国内口蹄疫灭活疫苗生产厂家众多,质量良莠不齐,如何选择优质、可靠且适合当地的口蹄疫疫苗仍然是一个巨大的挑战[22]。

本研究选择A、B、C 3个厂家的猪口蹄疫O型疫苗对母源抗体保护水平较低的断奶育肥猪(45 d～50 d)免疫接种,试验猪均未出现免疫副反应,表明本研究使用的疫苗安全系数相对较高,免疫人员操作得当,对试验对象造成的应激相对较小。对检测结果进行独立样本K-W检验,结果显示A、B、C各组间差异显著。3个厂家猪口蹄疫O型疫苗有效免疫后均能产生一定的免疫保护作用,但可能受母源抗体水平、疫苗抗原含量、保存条件和加工工艺等多种因素的影响,A厂家的免疫抗体滴度上升水平较高、离散度较低、抗体衰减速度相对较慢,育肥猪出栏时免疫抗体依旧维持在较高水平,野毒感染保护力较强,优于B、C 2个厂家。

目前,政府部门供应的猪口蹄疫O型疫苗均能对猪群提供良好保护作用,养殖场户可放心使用。建议生猪出栏前至少开展1次强化补免,可有效保护猪群免受野毒侵袭;定期采血检测,了解免疫抗体水平,为科学防控提供参考依据;养殖场户还应结合实际,科学规范建立免疫程序,提升疫苗免疫保护效果。

4 结 论

建议哈密市生猪养殖场宜选用A厂家口蹄疫O型灭活疫苗,生猪45 d～50 d时开始首免,且在间隔28 d实行二免,避免育肥后期因补免而影响生猪正常生长,保证生猪在出栏时仍对猪口蹄疫O型野毒具有较高的保护作用。