青紫蓝兔致死性腹泻病的病理学观察

李宏瑞，魏娟鹏，张 楠，李怀银，高 明

（兰州生物制品研究所有限责任公司，甘肃 兰州 730046）

青紫蓝兔译称智利兔、青智利兔、琴其拉兔、山羊青兔、青林子兔，因其被毛颜色酷似南美洲产的珍贵毛皮动物青紫蓝色毛丝鼠而得名。它是世界育成较早的皮肉兼用型品种，也是制备单克隆抗体、热原检测、眼科研究、皮肤反应试验等最常用的实验动物之一。腹泻病是以腹泻为主要症状的一类疾病的统称，是普通级青紫蓝兔养殖过程中的常见疾病，一年四季均可发生，幼兔发病最多，死亡率较高。患病兔临床症状表现为食欲减退、消化不良，腹泻和便秘交替发生，更有继发细菌感染、病毒感染、寄生虫感染的风险。腹泻病的诱因包括但不限于病毒、细菌、寄生虫感染以及饲养管理、用药不当或应激等因素[1]，其中细菌主要包括大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、铜绿假单胞菌、产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌等[2]，病毒主要包括轮状病毒、细小病毒、腺病毒、冠状病毒、星状病毒等，以轮状病毒最为常见[3]。本试验解剖的病兔临死前精神状态不佳，喜欢蜷缩卧地，严重腹胀和腹泻，耳朵和四肢冰凉，部分病兔的粪便呈胶冻样并有特殊腥臭味，发病5 d后死亡。通过解剖观察病兔胃、肠以及部分实质器官的组织病理学特征，旨在为该病的防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物

普通级青紫蓝兔，2月龄，由兰州生物制品研究所有限责任公司提供。

1.2 主要试剂

甲醛溶液、二甲苯溶液、无水乙醇、切片石蜡，均购自国药集团化学试剂有限公司；苏木素-伊红染色液，购自南京森贝伽生物科技有限公司；中性树胶，购自北京索莱宝科技有限公司。

1.3 主要仪器

组织脱水机、组织包埋机、组织切片机，均购自德国美康Microm公司；生物组织摊烤片机，购自孝感市亚光医用电子技术有限公司。

1.4 试验方法

1.4.1 肉眼观察 解剖病死兔，肉眼观察其器官病变情况。

1.4.2 组织病理学观察 采集病兔胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胆囊等组织，经10%福尔马林溶液固定后制作石蜡切片，并进行苏木素-伊红染色（HE染色）。经HE染色后的切片利用德国树胶进行封片，置于显微镜下观察。

2 结果与分析

2.1 肉眼观察

病兔腹部严重鼓胀，盲肠近端阻塞大量红枣大小的深黑色干硬粪便（图1），肠壁极薄并充满气体，结肠内有胶冻样液体（图2），实质器官未见明显异常。

图1 腹部眼观结果

图2 结肠眼观结果

2.2 组织病理学观察

病兔胃黏膜浅表性糜烂，大量黏膜上皮细胞坏死和脱落，病变周围有少量嗜中性粒细胞和淋巴细胞浸润（图3）。十二指肠黏膜上皮细胞大量坏死和脱落，病变周围有大量嗜中性粒细胞和淋巴细胞，杯状上皮细胞分泌亢进（图4）。空肠黏膜上皮细胞大量坏死和脱落，隐窝细胞变性坏死，病变周围有少量嗜中性粒细胞和淋巴细胞，空肠黏膜杯状上皮细胞分泌亢进（图5）。回肠黏膜杯状上皮细胞减少，肠绒毛顶部上皮细胞坏死和脱落，回肠腺泡管腔内有脓细胞，肠隐窝细胞变性坏死，黏膜固有层细胞增生，病变周围及黏膜下大量淋巴细胞浸润（图6）。盲肠绒毛顶部上皮细胞坏死和脱落，肠腺管腔扩张，黏膜固有层和黏膜下层水肿，病变周围少量淋巴细胞浸润（图7）。结肠绒毛上皮细胞结构完整，未见细胞坏死和脱落，黏膜固有层见少量淋巴细胞浸润（图8）。直肠绒毛上皮细胞坏死和脱落，肠腺管腔扩张，管腔内有一些坏死细胞集聚，黏膜固有层细胞增生，少量淋巴细胞浸润，黏膜下层显著水肿（图9）。心肌组织结构正常，未见异常变化（图10）。肝小叶结构正常，未见肝细胞变性和坏死，门管区未见炎症反应，毛细胆管内胆汁淤积，小胆管未见异常（图11）。

图3 胃的组织病理学结果（HE，200×）

图4 十二指肠的组织病理学结果（HE，200×）

图5 空肠的组织病理学结果（HE，100×）

图6 回肠的组织病理学结果（HE，200×）

图7 盲肠的组织病理学结果（HE，200×）

图8 结肠的组织病理学结果（HE，200×）

图9 直肠的组织病理学结果（HE，200×）

图10 心脏的组织病理学结果（HE，200×）

图11 肝脏的组织病理学结果（HE，200×）

胆囊绒毛呈分支状，胆囊黏膜水肿，大量黏膜上皮细胞坏死和脱落，大面积黏膜固有层裸露，胆囊黏膜的部分绒毛断裂明显，病变周围有极少量的嗜中性粒细胞和淋巴细胞（图12）。

图12 胆囊的组织病理学结果（HE，200×）

脾脏白髓组织减少，脾小结淋巴细胞减少，脾呈现淋巴细胞耗空景象（图13）。肺脏轻度肺泡性肺炎。肺支气管黏膜上皮大量坏死和脱落，阻塞气道。肺泡隔明显增厚，肺泡腔内有大量嗜中性粒细胞和巨噬细胞（图14）。肾脏轻度间质性肾炎。嗜中性粒细胞广泛浸润，肾小管管腔扩张，部分肾小管上皮细胞变性和坏死，肾集合管内出现细胞管型（图15）。

图13 脾脏的组织病理学结果（HE，200×）

图14 肺脏的组织病理学结果（HE，200×）

图15 肾脏的组织病理学结果（HE，200×）

3 讨论与结论

青紫蓝兔致死性腹泻病主要发生在断奶期，直观原因可能是对病原体具有保护作用的母乳变成了固定饲料，这种饮食上的强烈改变使幼兔免疫力降低，易受到消化系统疾病和外部刺激的影响，其他诸如病原体、极端温湿度、母体抗体水平低和遗传背景等因素也会提高其易感性，这些因素往往共同发力，给该病的防治带来挑战。本试验病理学结果证实了这种复杂性：病兔大部分器官有不同程度的炎症，结合其生长环境，可能的生物性致炎因子有细菌、病毒等，甚至存在混合感染。病理结果虽未观察到不同发育阶段的寄生虫，但并不排除有寄生虫的因素，尤其是球虫。球虫和大肠杆菌对断奶幼兔消化道疾病的影响存在相关性，球虫除了具有致病性，还能改变肠道的pH值，从而使大肠杆菌过度生长[4]。

复杂的病因使疫苗研制只能针对具体某一诱因进行相关研究，Zhao等[5]成功分离出一株名为Z317的兔星状病毒株，分析了Z317衣壳（Cap）蛋白的基本特性，筛选出了10个线性B细胞表位，为后续研究兔星状病毒对家兔的影响进行了前期探索；Pu等[6]证明了艾美尔球虫的表面抗原rEmSAG10可以诱导体液免疫和细胞免疫，是兔大型艾美尔球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。除了接种疫苗外，加强饲养管理也是预防青紫蓝兔致死性腹泻病的方法[7]，如访问管理，严格规范访客的移动区域；健康管理，实时监测和治疗疾病、制定检疫规程；运营管理，包括尸体和废弃物的处置、设施管理、饮水安全、害虫控制措施等；饲喂方面，适量的饲喂限制可以降低腹泻率和死亡率，并提高消化酶活性和抗氧化能力[8]。此外，避免冷应激也非常重要，冷应激会破坏青紫蓝兔肠道菌群的平衡性。冬季饲喂温水可提高幼兔的生长性能并优化其肠道菌群[9]。

使用抗生素治疗家兔腹泻病也是常用方法，但抗生素耐药性和药物残留问题一直备受关注。Wang等[10]的研究表明，在断奶兔腹泻病发病机制中，肠道微生物群的改变与无抗生素饲料引起的腹泻有关。益生菌、益生元、合生元、酶、细菌素、有机酸、草药及其提取物等天然物质作为抗生素的替代物，在控制微生物群、避免胃肠道功能紊乱、改善肠道健康和提高机体免疫力方面表现优异[11]。Liu等[12]探寻了在不使用抗生素的情况下预防家兔腹泻病的方法，发现泛醌和其他萜类化合物可以增加腺苷5'-单磷酸（AMP）激活蛋白激酶的活性，促进细胞代谢和自噬，有预防炎症和缓解肠道疾病症状的可能。韩昱等[13]发现中草药复方中使用党参和黄芪对仔兔气血进行滋补，可以提高仔兔机体抗病力和免疫力，从而显著降低断奶仔兔腹泻率和死亡率。Liu等[14]研究发现，在兔饲料中添加艾草可以降低兔腹泻发生率并调节其肠道免疫功能，而不会影响生长性能。Wang等[15]研究表明，芽孢杆菌菌株混合物可以减轻产肠毒素大肠杆菌引起的损伤，并通过改善断奶獭兔的特定肠道微生物群成员和免疫力来增强抗病能力。因此，患致死性腹泻病的普通级青紫蓝兔大部分器官患有不同程度的炎症，可能的生物性致炎因子有细菌、病毒等，甚至存在混合感染。在防治该病时，建议加强饲养管理，同时进行药物干预，从而提高机体抗病能力。