甘孜州藏羊消化道寄生虫流行病学调查

张 敏，钟 莹，石大刚，海金华，扎西泽仁，袁觉康，张润慧*，叶忠明*

（1.甘孜藏族自治州畜牧业科学研究所，四川 康定 626000；2.西南民族大学 畜牧兽医学院，四川 成都 610000；3.理塘县农牧农村和科技局，四川 理塘 624300；4.得荣县农牧农村和科技局，四川 得荣 627950；5.石渠县农牧农村和科技局，四川 石渠 627350；6.稻城县噶通镇便民服务中心，四川 稻城 627750）

反刍动物感染消化道寄生虫易引起贫血、腹泻等消化道炎症，导致动物生长发育受阻、饲料利用率下降，甚至死亡[1]。消化道寄生虫感染在我国养羊业较常见，2021年我国羊肠道寄生虫调查结果发现，羊寄生虫感染常见于我国中部地区（93.6%）和东北部地区（94.8%），西南地区和西北地区感染率分别为79.6%和75.5%[2]。藏羊是青藏高原地区主要特色畜种之一，依赖天然草场放牧饲养，易受寄生虫病的侵害。常艳凯[3]研究发现，西藏地区藏羊共检测出8类寄生虫，其感染率为89.2%（785/880），其中绵羊和山羊总感染率差异不大。王有为等[4]在2019年关于青海海南州5个县的藏羊肠道寄生虫感染的调查中发现，藏羊寄生虫感染率高达87%，主要优势虫种为线虫和球虫。

甘孜州是四川省西北部的生态示范区和国家生态屏障区，是藏山羊和藏绵羊的主要产区之一。目前关于该地区藏羊寄生虫流行病学的研究处于空白状态。本研究对四川甘孜州牧区藏羊的寄生虫病感染情况进行调查，旨在摸清该地区藏羊肠道寄生虫感染率，分析其与年龄、季节等因素的关系，掌握和丰富该地区藏绵羊、藏山羊消化道寄生虫病的流行病学资料，为该病的综合防治提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 样本来源及采集 2021年12月至2022年12月在甘孜州理塘、得荣、石渠、泸定、乡城和稻城等6个县选择9个月未使用任何寄生虫药物的268只藏羊（绵羊170只、山羊98只），包括1岁及以上的成年羊（215只）和1岁以下的羔羊（53只）。清晨或夜间用直接采样法随机收集新鲜羊粪便样本，每份30～50 g，并记录采样地点、海拔高度等信息（表1），再将采集样品冷藏保存于洁净自封袋中，运送到西南民族大学寄生虫实验室检测。

表1 采样地坐标及海拔信息

1.1.2 主要试剂和仪器 饱和食盐水，移液枪（LICHEN）、方形称量盘（BKMAN）、显微镜（Olympus CX21）、饱和搅拌仪（DLAB MS-H280-Pro）、60目过滤筛、搅拌棍、压舌板、离心机。

1.2 试验方法

1.2.1 检测方法 饱和食盐水漂浮法：将新鲜粪便样本取2～3 g置于称量盘中，加入8 mL饱和食盐水搅拌均匀，至粪便混匀液中完全没有大颗粒物质后，用60目网筛过滤至15 mL离心管中，静置15 min，取5 μL上清液均匀涂片后，放置在100倍、400倍显微镜下观察。

水洗沉淀集卵法：取新鲜粪便样本3～4 g置于称量盘中，加入20 mL的蒸馏水搅拌均匀，用60目网筛过滤至50 mL离心管中，再用30 mL蒸馏水冲洗筛子，冲洗液加入50 mL离心管中，静置沉淀25 min，倒去上层液，保留沉渣，再加水混匀，重复沉淀直到上清液清亮为止，弃去上清液，用巴氏吸管取少许沉淀均匀涂抹在载玻片上，在100倍显微镜下蛇形观察。

1.2.2 虫种鉴定 根据显微镜下观察到的寄生虫虫卵与卵囊的大小、颜色、形态结构，按照文献[5]对寄生虫种类进行形态学鉴定。

1.2.3 寄生虫虫卵感染强度检测 采用涂片计数法和麦克马斯特计数法检测感染强度。涂片计数法：将样本按上述方法处理后在100倍显微镜下蛇形观察。一个载玻片视野内虫卵数＜5，记为+；5＜虫卵数＜10，记为++；虫卵数≥10，记为+++。

麦克马斯特计数法：取2 g新鲜粪便置于称量盘内，先加入8 mL饱和食盐溶液，用玻璃棒捣碎混匀，再加入50 mL饱和食盐溶液，混匀后立即用纱布或60目筛网过滤，然后立即吸取滤液加入麦氏计数板，充满2个计数室，在显微镜载物台上静置3～5 min后，100倍镜下镜检计数。参照公式计算寄生虫感染强度，即每克粪便虫卵数（EPG）和每克粪便卵囊数（OPG）。

1.2.4 统计学分析 使用Graphpad PRISM和IBM SPSS Statistics 27软件对得到的藏羊消化道寄生虫感染率采用卡方（X2）检验进行多重比较，感染强度以“平均值±标准差”表示。P＜0.01表示差异极显著，P＜0.05表示差异显著，P＞0.05表示差异不显著。

2 结果

2.1 寄生虫感染情况

分别对藏绵羊、藏山羊样本进行寄生虫实验室检测，结果表明，藏羊消化道寄生虫的总感染率为71.27%（191/268），其中藏绵羊感染率为62.35%（106/170），藏山羊感染率为86.73%（85/98）。共检测出4类消化道寄生虫，分别为艾美耳球虫、线虫、吸虫和绦虫（图1）。感染藏绵羊的主要优势虫种是艾美耳球虫，感染率为49.41%（84/170）（表2）；感染藏山羊的主要优势虫种是线虫，感染率为78.57%（77/98）。藏绵羊的肝片吸虫、前后盘吸虫及莫尼茨绦虫的感染率分别为12.94%、15.88%和1.18%；藏山羊的前后盘吸虫和莫尼茨绦虫的感染率分别为14.29%、1.18%，肝片吸虫在藏山羊上未发现有感染。结果表明，藏山羊的线虫感染（P＜0.01，X2=51.78，1）和肝片吸虫感染（P＜0.01，X2=13.82，1）极显著高于藏绵羊。

图1 显微镜下寄生虫检测结果

表2 藏羊寄生虫感染情况

2.2 寄生虫混合感染情况

检测发现，线虫和球虫混合感染的情况最为常见。甘孜州藏羊的消化道寄生虫混合感染率为59.90%（115/192）。其中双重感染感染率最高，为45.31%（87/192）；其次是单个寄生虫，感染率为40.10%（77/192）；混合感染3种寄生虫的感染率为10.42%（20/192）；混合感染4种以上寄生虫的感染率为4.17%（8/192），详见图2。

图2 藏羊寄生虫混合感染情况

2.3 不同季节下藏羊寄生虫感染情况

圆线虫是常见的消化道寄生虫（X2=53.824，P＜0.01），春季感染率达到100%（CI：79.61～100.00）、夏季为45.45%（CI：37.20～53.95）、冬季为82.00%（CI：69.20～90.23）。艾美耳球虫春季感染率（33.33%，CI：15.17～58.28）与前后盘吸虫一致，仅次于线虫；在秋季，感染藏系羊的消化道寄生虫虫种最多，分别有线虫（圆线虫科、蛔虫）、原虫（艾美耳球虫）、吸虫（肝片吸虫及前后盘吸虫）。艾美耳球虫为感染藏系羊的优势虫种（60.50%，CI：48.94～71.11），其次为肝片吸虫和前后盘吸虫（30.99%，CI：21.44～42.48），线虫的秋季感染率仅为25.35%（CI：16.68～36.55），蛔虫最低（12.68%，CI：6.82～22.37）；肝片吸虫仅在秋季检测到虫卵（30.99%，CI：21.44～42.48），与前后盘吸虫的结果一致。冬季藏系羊感染的消化道寄生虫虫种最少，共3种，分别为圆线虫科、艾美耳球虫和前后盘吸虫。其他虫种感染情况见表3。

表3 不同季节下藏羊寄生虫流行情况

2.4 不同海拔下藏羊寄生虫感染情况

将所有样本的采集地分为3个海拔区间，分别为＜2 500 m、2 500～3 500 m、＞3 500 m。检测发现（表4），＞3 500 m的藏羊感染寄生虫种类最多，包括圆线虫（OR：52.16，CI：33.00～48.22）、蛔虫（OR：5.84，CI：3.98～12.18）、艾美耳球虫（OR：110.68，CI：51.13～66.39）、肝片吸虫（OR：12.64，CI：9.50～20.43）、前后盘吸虫（OR：14.69，CI：11.10～22.59）及莫尼茨绦虫（OR：1，CI：0.23～4.55），其中球虫为优势虫种，感染率为58.97%（92/156），其次是圆线虫，感染率为40.39%（63/156）。从OR值和置信区间可以看出，＞3 500 m除莫尼茨绦虫外，其他虫种均是感染藏羊的风险因素。海拔2 500～3 000 m，感染寄生虫的种类比＞3 500 m少，前后盘吸虫（14.29%，OR：6.83，CI：6.72～27.84）感染率较低，但是球虫（57.14%，OR：54.67，CI：45.21～70.88）、圆线虫（65.05%，OR：91.46，CI：53.97～80.93）感染率较高；＜2 500 m的藏系羊以感染圆线虫最为常见（82.00%，OR：350.78，CI：69.20～90.23），与艾美耳球虫（24.00%，OR：15.47，CI：14.30～37.41）、前后盘吸虫（22.00%，OR：21.72，CI：12.75～35.24）同为感染藏系羊消化道寄生虫的风险因素。

表4 不同海拔下藏羊寄生虫流行情况

2.5 不同年龄的藏羊寄生虫感染情况

根据年龄差异，将样本分为1岁以上和1岁以下。如图3所示，在藏绵羊中，羔羊感染球虫（58.97%）、线虫（46.15%）、前后盘吸虫（17.95%）、肝片吸虫（23.08%）、莫尼茨绦虫（5.13%）及蛔虫（15.38%）均高于成年羊。藏山羊除了蛔虫外，羔羊的感染率也均高于成年羊，但无统计学差异（P＞0.05）。

图3 寄生虫感染不同年龄段藏系羊比对图

2.6 寄生虫感染强度情况

本次研究只做了所有地区的球虫与部分地区线虫的计数，结果显示（表5、表6），藏羊消化道虫种以轻度感染为主，中度感染和重度感染的比率均较低。蛔虫的轻度感染率为100%，肝片吸虫的轻度感染率为90.00%，艾美耳球虫的轻度感染率为89.06%，其他虫种也都在75.00%以上。理塘的球虫感染最严重，感染OPG值是泸定球虫感染OPG的1倍以上；球虫感染最轻的为稻城。对于线虫，感染最严重的地区是乡城，其次是稻城，石渠感染最轻。

表5 不同地区的藏羊球虫OPG与线虫EPG感染强度

表6 不同寄生虫的感染强度

3 讨论与结论

本研究结果表明甘孜州藏羊寄生虫感染率较高，且多为混合感染。感染藏羊的优势虫种是线虫和球虫，与郑双健等[6]和刘生财[7]对藏羊消化道寄生虫感染情况的检测结果一致。线虫在藏山羊的消化道寄生虫感染中为优势虫种，藏山羊线虫感染率极显著高于藏绵羊（P＜0.01）。感染藏绵羊的优势虫种是艾美耳球虫，感染率为49.41%（84/170），相较李栋梁等[8]对我国部分地区羊球虫感染调查结果（73.73%）偏低。对比本研究藏羊球虫感染结果，羊云飞等[9]针对四川红原地区藏羊球虫的检测结果（66.67%）较低。调查结果可能由调查样本数量、地区差异等不同因素造成。此外，本次研究显示藏绵羊的肝片吸虫感染率极显著高于藏山羊（P＜0.01)，其原因可能是采样的季节不同、藏绵羊与藏山羊的进食习惯和生理结构存在差异[10]。绵羊以食草为主，而山羊更多以灌木或树木为食，因此绵羊易接触到吸虫的中间宿主淡水螺类，比山羊更易感染肝片吸虫。

从季节来看，线虫一年四季都能不同程度地感染藏羊。以往研究表明蠕虫感染与季节存在一定联系。本研究结果表明，甘孜州藏羊春季、夏季及冬季是感染线虫的高峰期。春季圆线虫感染率高达100%。球虫感染在秋季最高（60.56%），冬季达到最低（24.00%）；李栋梁等[8]调查发现，羊球虫感染率的季节动态变化差异小，与本研究结果不一致。出现该情况可能是因为高原气候独特，冬季气温低且气候干燥，不利于球虫虫卵生存。肝片吸虫在春夏未检测出虫卵，只在秋季感染藏羊，且多数与前后盘吸虫混合感染。肝片吸虫和前后盘吸虫的流行特点基本相似，主要发生在秋季，特别是多雨年份和多雨季节。春季得荣的总降水量仅有3.4 mm，而秋季理塘样本当时的降水量达到22 mm，可能是导致春季肝片吸虫未检测出的原因。

对不同海拔样本进行分析发现，球虫是海拔＞3 500 m的藏羊感染的优势虫种。以往的调查多针对寄生虫季节差异情况进行分析，而对于不同海拔地区藏羊寄生虫调查较少。仅张春霞[11]2021年对青海省藏羊肠道线虫进行调查，发现寄生虫感染与海拔有关，不同海拔高度线虫感染强度不同。高寒草原海拔越高，昼夜温差越大，不利于线虫幼虫感染阶段的发育。因此，本研究结果发现圆线虫感染率随海拔的升高有所下降，且差异显著。海拔＞3 500 m的藏羊感染寄生虫的种类最多，其中圆线虫、蛔虫、艾美耳球虫、肝片吸虫及前后盘吸虫均为感染当地藏羊的风险因素。在海拔2 500～3 500 m之间，艾美耳球虫、圆线虫及前后盘吸虫为感染藏系羊的风险因素。

藏绵羊的年龄对比结果中可以看出，羔羊比成年羊的感染率略高，但差异不显著。羔羊的抵抗力比成年羊低，更容易被寄生虫感染，再加上成年羊是带虫者，羔羊与成年羊同期放牧也是造成羔羊感染率高的原因。每年羔羊还会经历胃肠炎潮，更降低了抵抗力，导致羔羊感染率高且容易死亡。

从感染强度来看，甘孜州乡城县的线虫感染强度最高，平均EPG为725±698.47，孔繁瑶[12]等认为羊粪中线虫EPG＞1 000则表现为致病，本次调查结果提示，甘孜州藏羊线虫感染程度虽然不严重，但应引起重视。羊球虫病是由羊球虫入侵破坏宿主肠道上皮细胞的一类原虫病，最常见的感染症状为腹泻、体重增长缓慢等，严重则导致死亡[13]，成年羊通常为带虫者，无明显临床症状，但对羔羊危害较大。理塘的艾美耳球虫感染强度最高，平均OPG为4 925±4 911.47，提示该地区应对艾美耳球虫病加强防治。

甘孜州理塘、得荣、泸定、乡城、稻城及石渠6个县的藏羊消化道寄生虫感染情况普遍存在，其中线虫和球虫感染尤为突出。作为青藏高原地区的重要经济畜种，应加强对藏羊消化道寄生虫的防治工作。