HDCP患者血清miR-181b、PLGF、IL-17与疾病严重程度的关系及其对不良妊娠结局的预测价值

罗玉萍,张杨,何晓焱,钟媛

(泸州市人民医院产科,四川 泸州 646000)

妊娠高血压疾病(hypertensive disorder complicating pregnancy,HDCP)是指在妊娠期出现血压升高的产科常见病,其临床表现多样,包括血压升高、蛋白尿和水肿等,严重者甚至出现抽搐和昏迷,是导致孕妇及新生儿死亡的主要原因之一[1-2]。HDCP治疗的目的是控制疾病进展,预防重度子痫前期和子痫发生,降低围生产期死亡率,改善母婴预后,故早期干预预防HDCP具有重要临床意义,筛选具有特征性的指标也尤为重要[3]。胎盘生长因子(placenta growth factor,PLGF)表达于胎盘,可以诱导滋养细胞和内皮细胞增殖,维持血管通透性,在正常妊娠胎盘的形成和发生发展中起到了重要作用,分泌异常与HDCP密切相关[4]。miR-181b参与心血管疾病、免疫疾病和恶性肿瘤的发病过程,表达异常与炎症水平变化有关,HDCP发病本质也与大量促炎因子释放有关[5]。白细胞介素17(IL-17)由T淋巴细胞分泌,在多种细胞中表达,在炎性反应和自身免疫疾病中表达异常[6]。本研究旨在探讨HDCP患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平与疾病严重程度的关系及对不良妊娠结局的预测价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年10月至2021年10月泸州市人民医院收治的126例HDCP孕妇为研究对象,其中患者年龄(32.16±2.83)岁;产前体质量指数(24.07±2.51)kg/m2;孕周(36.54±2.58)周;孕次(1.56±0.14)次;合并糖尿病21例。根据HDCP严重程度[7]分为妊娠期高血压组(n=61)、子痫前期组(n=37)和重度子痫前期组(n=28);根据妊娠结局不同分为正常组(n=62)和不良妊娠组(n=64)。本研究符合《赫尔辛基宣言》相关伦理准则。纳入标准:(1)参照中华医学会妇产科学分会制定的《妊娠期高血压疾病诊治指南(2012年版)》[8],确诊为HDCP;(2)妊娠前血压正常;(3)均为单胎妊娠,头位。排除标准:(1)合并严重肝、肾功能不全,心脑血管系统疾病者;(2)神经功能障碍或无法配合者;(3)合并严重感染或恶性肿瘤者。

1.2 方法

1.2.1 血清学指标检测 酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者血清IL-17水平,试剂盒购自江西艾博因生物科技有限公司;化学发光法检测血清PLGF水平,检测仪器为Roche cobas E610免疫分析仪,试剂盒为Roche配套试剂盒。

1.2.2 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清miR-181b表达水平[9]采集清晨空腹静脉血5 mL,4 000 r/min离心10 min 取上层血清,加入Trizol提取总RNA,逆转录试剂盒(Invitrogen公司)将其逆转录为cDNA,以cDNA为模板,PCR扩增试剂盒(Takara公司)进行PCR扩增。以U6为内参,U6引物序列为:上游:5′-ATTGGAACGATACAGAGA AGATT-3′;下游:5′-GGAACGCTTCACGAATTTG-3′。miR-181b引物序列为:上游:5′-AACATTCATTGCTGTCGGTGGG-3′,下游:5′-GCGAAGCACAGAATTAATACGACTCAC-3′,长度78 bp;PCR反应体系:反应体积20 μL,95 ℃ 3 min、95 ℃ 12 s、60 ℃ 40 s、72 ℃ 20 s,共40个循环。重复实验3次,取平均值,采用2-ΔΔCt法计算相对表达量。

1.3 观察指标

(1)不同HDCP严重程度患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平;(2)不同妊娠结局HDCP患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平;(3)血清miR-181b、PLGF、IL-17水平与HDCP严重程度的关系;(4)不同HDCP严重程度孕妇的妊娠结局;(5)血清miR-181b、PLGF、IL-17对HDCP不良妊娠结局的预测价值。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 不同HDCP严重程度患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平比较

不同HDCP严重程度患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平有统计学差异(P<0.05)。血清miR-181b和IL-17水平比较:重度子痫前期患者>子痫前期组>妊娠期高血压组;PLGF水平比较:重度子痫前期患者<子痫前期组<妊娠期高血压组。见表1。

表1 不同HDCP严重程度患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平比较

2.2 不同HDCP妊娠结局患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平比较

不良妊娠组患者血清miR-181b、IL-17水平高于正常组(P<0.05);PLGF水平低于正常组(P<0.05)。见表2。

表2 不同HDCP妊娠结局患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平比较

2.3 血清miR-181b、PLGF、IL-17水平与HDCP严重程度的相关性

相关性分析显示,血清miR-181b和IL-17水平与HDCP严重程度正相关(P<0.05),血清PLGF水平与HDCP严重程度负相关(P<0.05)。见表3。

表3 血清miR-181b、PLGF、IL-17水平与HDCP严重程度的相关性

2.4 不同HDCP严重程度孕妇妊娠结局比较

126例HDCP患者发生不良妊娠结局64例,占50.79%,其中合并多种不良妊娠结局患者8例。重度子痫前期组孕妇早产、新生儿体重过低、新生儿窒息、胎儿窘迫和产后出血的发生率高于妊娠期高血压组和子痫前期组(P<0.05)。见表4。

表4 不同HDCP严重程度孕妇妊娠结局比较[n(%)]

2.5 血清miR-181b、PLGF、IL-17对HDCP不良妊娠结局的预测价值

以是否发生不良妊娠结局为因变量进行变量赋值(发生不良妊娠结局=1,未发生不良妊娠结局=0),ROC曲线分析显示,miR-181b、IL-17及PLGF对HDCP不良妊娠结局均有预测价值(P<0.05),且三者联合检测的预测价值更高(P<0.05)。见表5及图1。

表5 血清miR-181b、PLGF、IL-17对HDCP不良妊娠结局的预测价值

3 讨论

HDCP是妊娠期特有且常见的严重威胁孕产妇生命安全的产科并发症,其发病率呈现逐渐上升趋势[10]。HDCP对母婴健康影响大,易诱导不良妊娠结局,未及时干预可发展为重度子痫前期甚至子痫,产生更严重后果[11]。

本研究结果显示,重度子痫前期患者血清miR-181b和IL-17水平高于妊娠期高血压组和子痫前期组(P<0.05),血清PLGF水平低于妊娠期高血压组和子痫前期组(P<0.05);子痫前期患者血清miR-181b和IL-17水平高于妊娠期高血压组(P<0.05),血清PLGF水平明显低于妊娠期高血压组(P<0.05),表明HDCP越严重,患者血清miR-181b和IL-17水平越高,PLGF水平越低。相关性分析显示,血清miR-181b和IL-17水平与HDCP严重程度正相关(P<0.05),血清PLGF水平与HDCP严重程度负相关(P<0.05),证实了血清miR-181b、PLGF、IL-17水平与HDCP严重程度间具有相关性,提示临床可以通过检测血清miR-181b、PLGF、IL-17水平评估患者HDCP严重程度及发生HDCP的可能性。血清PLGF是血管内皮生长因子的一员,与胎盘有密切关系,可通过刺激内皮细胞和滋养细胞增殖浸润,促进胎盘血管生成[12]。既往研究[13-14]显示,HDCP孕妇血清PLGF水平较低,会使胎盘正常功能发生紊乱,母体血供异常,从而导致孕妇的营养物质供应减少,进而诱发胎儿窒息、早产等不良妊娠结局。HDCP发病时,诱导机体释放大量炎症因子,激活炎症反应,损伤血管内皮细胞,加重HDCP严重程度,可能与miR-181b表达上调有关[15]。

本研究中,重度子痫前期组孕妇早产、新生儿体重过低、新生儿窒息、胎儿窘迫和产后出血等不良妊娠结局发生率高于妊娠期高血压组和子痫前期组(P<0.05),表明白不良妊娠结局发生概率与患者HDCP严重程度有关,患者HDCP越严重,发生不良妊娠结局的可能性也越高。

此外,本研究结果显示,不良妊娠组患者血清miR-181b、IL-17水平高于正常组(P<0.05),PLGF水平低于正常组(P<0.05),表明血清miR-181b和IL-17水平越高、PLGF水平越低的患者,越容易发生不良妊娠结局,临床需对这类患者加以关注。妊娠期孕妇发生独特的免疫改变,表现为细胞平衡被打破,IL-17为Th17细胞分泌的代表性细胞因子,在体内广泛参与炎症反应和免疫应答[16]。Ito等[17]研究发现,IL-17可激活ROS/NF-κB信号途径诱导胎膜破裂,增加不良妊娠结局风险,本研究结果与之基本一致。ROC曲线分析显示,miR-181b、IL-17和PLGF均对HDCP不良妊娠结局有预测价值(P<0.05),三者联合检测的预测价值更高(P<0.05),表明联合检测能够更灵敏地预测HDCP患者发生不良妊娠结局的风险。

综上,血清miR-181b、IL-17水平与HDCP严重程度正相关,PLGF水平与HDCP严重程度负相关。同时血清miR-181b、IL-17水平越高,PLGF水平越低,发生不良妊娠结局的几率越大。因此临床可通过检测血清miR-181b、PLGF和IL-17水平预测HDCP进展和妊娠结局。