嗜酸性粒细胞计数在术后静脉血栓中的应用价值

杨军，黄凯达，潘守成

（郑州大学第一附属医院检验科， 河南 郑州 450000）

静脉血栓栓塞症 (Venous thromboembolism,VTE)是指血液在静脉内不能正常凝结，最终致血管完全或不完全阻塞， 是外科手术后常见并发症之一，主要包括深静脉血栓(Deep Vein Thrombosis,DVT)和肺栓塞(Pulmonary Thromboembolism,PTE)两种类型，两者相互独立，但也密不可分[1]。DVT 形成较为隐匿，脱落后可随回心血流进一步形成PE，直接导致患者猝死，引起重视[2]。 近年，随外科疾病患病率增加和手术技术进步，外科手术量不断增加，VTE 患病率也随之升高，患者术后猝死风险升高[3]。深静脉造影是DVT 诊断公认的金标准， 但因有创性大、操作过程复杂，不能作为DVT 早期诊断和预测的常规检测[4]。 目前已有多项关于实验室血液相关指标与术后VTE 的研究， 如血小板（Platelet,PLT）计数、凝血酶原时间（Prothrombin time,PT）、活化部分凝血活酶时间 （Activated partial thromboplastin time,APTT）、 凝血酶时间 （Thrombin time,TT）、国际标准化比率（International Normalized Ratio,INR） 纤维蛋白原 （Fibrinogen,FIB）、D-二聚体（D-Dimer,D-D）和中性粒细胞胞(Neutrophil extracellular trap，NET)水平等，但都未能及时准确预测术后VTE 发生[5-6]。 嗜酸性粒细胞（Eosinophils,EOS）是近年发现与血栓相关的指标，但其具体价值尚未被完全确定[7]。 本研究对近2 年本院收治的360 例术后静脉血栓患者临床资料进行回顾性分析， 探讨外周血嗜酸性粒细胞计数在术后静脉血栓中的表达情况， 并分析其与血小板和凝血功能的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选取2018 年1 月至2019 年6 月于本院收治的360 例术后静脉血栓患者（VTE 组）临床资料进行回顾性分析。 纳入标准：（1）外科手术后DVT 首诊；（2）DVT 诊断符合《深静脉血栓形成的诊断和治疗指南（第3 版）》[8]；（3）PTE 诊断符合《肺血栓栓塞症诊治与预防指南（2018 年）》[9]；（4）年龄≥18 岁。排除标准：（1）因拔除滤器或复查而二次入院的DVT 或PE 患者；（2）合并过敏性疾病；（3） 术前存在凝血功能障碍；（4） 合并恶性肿瘤；（5）孕妇或哺乳期妇女；（6）临床资料不完整。其中男172 例， 女188 例； 年龄16~75 岁， 平均（53.79±16.38）岁；选取同期性别和年龄与其匹配的360 例健康体检者作为对照组，其中男167 例，女193 例，年龄18~72 岁，平均（54.15±17.05）岁。

1.2 方法

1.2.1 资料收集及整理 收集并整理所有研究对象临床资料， 包括：（1） 性别和年龄；（2） 疾病类型（DVT 和DVT 并发PE）、DVT 患肢部位、DVT 分型和DVT 分期；（3）EOS 计数、 血浆PT、APTT、TT、FIB 和D-D。

1.2.2 检测方法 收集VTE 组术后第1 天和对照组血常规和凝血功能检测结果。 其中EOS 计数绝对值和PLT 计数检测采用SysmexXN-2000 全自动血细胞分析仪——流式细胞术， 试剂盒为原装配套； 凝血功能相关指标（血浆PT、APTT、TT、INR、FIB 和D-D） 检测采用STAGO-COMPACT 全自动血凝仪，其中PT、APTT、TT、FIB 采用磁珠凝固法；D-D 采用免疫比浊法，试剂盒为原装配套。

1.3 统计学方法 采用SPSS 21.0 统计学软件进行数据分析。其中计量资料符合正态分布，用（±s）表示，2 组间采用独立样本t检验比较，3 组及以上采用单因素方差分析；计数资料用（%）描述，用χ2检验，等级资料用秩和检验比较；绘制受试工作者曲线图（Receiver operating curve,ROC）探讨EOS 绝对计数在VTE 中的诊断价值和DVT 并发PTE 中的预测价值；相关性分析采用Spearman法；P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组EOS 计数绝对值比较 对照组和VTE 组术前EOS 计数绝对值分别为（0.31±0.12）×109/L 和（0.32±0.09）×109/L，两组比较，差异无统计学意义（t=1.265,P=0.206）；与术前比较，术后VTE 组EOS计数绝对值(3.82±1.35)×109/L 明显升高，差异有统计学意义（t=49.082,P<0.001）。

2.2 术后EOS 计数绝对值在VTE 中的诊断价值分析 绘制ROC曲线（见图1）分析发现，术后EOS计数绝对值诊断VTE 的曲线下面积为0.738，95%CI为0.709~0.814，截断值为0.78×109/L，约登指数最大为0.451， 敏感度和特异度分别为74.6%和70.5%。

图1 术后EOS 计数绝对值诊断VTE 的ROC 曲线

2.3 术后EOS 计数绝对值在预测DVT 并发PTE中的价值分析 360 例VTE 患者中，310 例DVT，50 例DVT 并发PTE；绘制ROC曲线（见图2）分析发现，EOS 计数绝对值预测DVT 并发PTE 的曲线下面积为0.817，95%CI为0.754~0.868， 截断值为1.52×109/L，约登指数最大为0.53，敏感度和特异度分别为78.4%和74.6%。

图2 术后EOS 计数绝对值预测DVT 并发PTE 的ROC 曲线

2.4 不同临床特征VTE 患者术后EOS 计数绝对值、PLT 计数和凝血功能指标比较 术后EOS 计数、PLT 计数和凝血功能指标在DVT 不同分期上比较，差异有统计学意义（P<0.05）；但在DVT 不同分型上比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 见表1。

表1 不同临床特征VTE 患者术后EOS 计数绝对值、PLT 计数和凝血功能指标比较（±s）

表1 不同临床特征VTE 患者术后EOS 计数绝对值、PLT 计数和凝血功能指标比较（±s）

特征 n EOS 计数绝对值(×109/L)DVT 分型周围型非周围型临床PLT 计数(×109/L)凝血功能指标PT(s) APTT(s) TT(s)INR FIB(g/L) D-D(μg/L)260 100 t P 3.85±1.42 3.79±1.46 0.356 0.723 156.27±10.69 154.84±11.07 1.126 0.261 5.78±2.14 5.72±2.26 0.235 0.815 16.71±3.86 16.67±4.04 0.087 0.931 24.42±3.25 24.51±3.34 0.234 0.816 2.78±0.46 2.75±0.51 0.537 0.591 5.73±1.82 5.69±1.77 0.188 0.851 375.46±42.18 380.08±42.25 0.930 0.353 DVT 分期急性期亚急性期慢性期FP 230 80 50 4.04±1.76 3.08±0.48 3.45±1.17 14.256<0.001 163.74±13.46 156.35±10.82 160.53±12.31 10.437<0.001 2.49±0.61 3.52±1.04 5.38±1.45 8.953<0.001 13.29±4.23 14.75±4.97 15.68±5.68 7.452 0.004 26.85±5.39 25.79±4.24 23.51±3.09 9.046<0.001 3.47±1.14 3.05±0.72 2.78±0.56 6.489 0.013 7.15±2.84 6.83±2.26 5.48±1.92 8.451<0.001 388.37±48.25 385.16±45.91 378.15±40.53 23.015<0.001

2.5 EOS 计数绝对值与PLT 计数和凝血功能指标的相关性分析 经Spearman相关分析，EOS 计数绝对值与PLT 计数、APTT 和TT 呈正相关 （P<0.05），与PT、INR、FIB 和D-D 呈负相关（P<0.05）。见表2。

表2 EOS 计数绝对值与PLT 计数和凝血功能指标的相关性分析

3 讨论

DVT 是外科手术最常见并发症之一， 由此可引发PTE，疾病进展迅速，死亡率高，引起临床高度重视[10]。 究其原因发现与麻醉和应激反应等相关，手术麻醉后下肢静脉血流量减少，速度减慢，血液容易淤积；再加上手术本身使机体产生应激反应，可激活外源性凝血系统，机体处于高凝状态，使血小板发生异常黏附和聚集， 进而促进血栓形成[11]。研究还发现， 手术时间过长是导致术后DVT 发生的独立危险因素， 这是因为手术时间长的患者必定需要更多的麻醉药物，再加上术中仰卧体位，使其术后下肢静脉更易瘀滞， 血栓形成风险增高[12]。目前医疗技术尚不能完全预防术后DVT 发生，且缺少预测DVT 及PTE 发生的有效方法[13]。近年，关于预测DVT 及PTE 发生的研究较多，以凝血功能指标研究居多，但因其易受多种因素影响，灵敏度高、特异性低，不为临床所推荐[14]。 后有学者发现，免疫系统与血栓形成相关，NET 不仅具有抗微生物的特性， 还可通过结合血管性血友病因子和凝血因子等，促进纤维蛋白形成、血小板和红细胞聚集，最终血栓形成[15]。

EOS 计数是近年新进的血栓相关检测指标。除与寄生虫感染和过敏性疾病相关外，EOS 增多被认为是血栓前状态， 预示血栓形成风险增高[16]。研究发现，EOS 可通过多条途径作用于机体凝血和抗凝系统，在促凝血的同时抑制抗凝，最终导致血栓形成[17]。 本研究将360 例VTE 患者和360 例健康体检者纳入回顾性分析发现，VTE 患者术前EOS 计数和健康体检者比较，差异无统计学意义，排除术前EOS 异常对血栓形成的影响； 术后VTE患者EOS 计数明显升高， 远大于术前和健康体检者，说明EOS 参与血栓形成，与前述结论吻合，提示EOS 计数可能在VTE 诊断和PTE 预测上具有一定价值。 后通过绘制ROC曲线分析验证了前述猜想，发现术后EOS 计数既可诊断VTE，又可预测PTE 发生， 其曲线下面积分别为0.738 （95%CI：0.709~0.814）和0.817（95%CI：0.754~0.868），其敏感度和特异度分别为（74.6%和78.4%）和（70.5%和74.6%），提示临床诊断及预测效能均较高，为术后VTE 诊断和PTE 预测提供了新的方向。 本研究还探讨了DVT 不同临床特征与术后EOS 计数绝对值、PLT 计数和凝血功能指标的关系， 术后EOS计数、PLT 计数和凝血功能指标仅在DVT 不同分期上比较，差异均有统计学意义，主要表现为急性期EOS 计数和PLT 计数最多，PT 和APTT 缩短最明显，TT、INR、FIB 和D-D 则升高最明显， 提示临床工作者可通过以上指标辅助鉴别DVT 分期。 此外， 本研究还通过Spearman相关分析探讨了EOS计数绝对值与PLT 计数和凝血功能指标的关系，EOS 计数绝对值与PLT 计数、APTT 和TT 呈正相关，与PT、INR、FIB 和D-D 呈负相关。 究其原因发现凝血功能指标的变化与EOS 内特殊颗粒蛋白（主要碱性蛋白、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和嗜酸性粒细胞过氧化物酶）活化相关，其不仅可抑制凝血因子Ⅻ活化，导致纤维蛋白溶解减少；还可中和肝素， 使肝素不能与凝血酶结合而使凝血酶持续生成，机体高凝[18]。

综上认为， 外周血EOS 计数在术后静脉血栓中异常表达，与DVT 类型和分期密切相关，有望成为辅助诊断术后静脉血栓和预测DVT 并发VTE的有效指标，具有一定临床参考价值。 但本研究仍未阐明EOS 与VTE 关联的具体机制，后续通过相关方法进行深入的机制研究。