规模羊场与散养户羊小反刍兽疫抗体水平检测分析

杨先富　包涛涛　吴通奎　黄功明　袁晓娟　莫兴虎　杨胜红

摘 要 为了掌握贵州省黔东南州规模羊场和散养户羊小反刍兽疫免疫抗体水平，从6个规模羊场和10个散养户采集羊血清742份，用小反刍兽疫酶联免疫吸附（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）法检测抗体。结果表明，规模羊场、散养户平均合格率分别为80.83%、68.06%，规模羊场表现优于散养户；1个规模羊场和4个散养户的抗体合格率低于农业农村部规定的合格标准（70%）。建议未达标的规模羊场开展免疫抗体检测，根据抗体变化规律，制订适合本场的小反刍兽疫疫苗免疫程序；对未达标散养户加强宣传和开展技术培训，改善羊群饲养管理条件、提高羊群体质，按照免疫程序开展小反刍兽疫疫苗免疫。

关键词 羊；小反刍兽疫；抗体水平；检测分析；贵州省黔东南州

中图分类号：S855.3 文献标志码：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2023.17.069

小反刍兽疫通常又被称为羊瘟，是由小反刍兽疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus，PPRV）引起的一种急性病毒性传染性疫病[1]。PPRV属于副黏病毒科麻疹病毒，主要感染山羊、绵羊等小反刍动物[2]。感染PPRV后，羊会出现高热稽留、眼鼻分泌物增多、口腔黏膜糜烂、腹泻、肺炎等症状，还常常表现出离群独处、卧地不起、体质虚弱、觅食困难、肛门周围有黑色附着物等[3]。小反刍兽疫主要通过接触和气溶胶途径传播，一年四季都有可能发生[4]。该病于1942年在非洲科特迪瓦首次被发现，当前在我国周边的阿富汗、印度、巴基斯坦等国家，小反刍兽疫呈流行性发生。2007年，小反刍兽疫首次在我国西藏自治区发生，2014年小反刍兽疫在我国新疆、西藏、甘肃、山西等20多个省市零星暴发，近５年来我国小反刍兽疫呈现出散发流行趋势，如2018年黑龙江省佳木斯市，江苏省如皋市、海安县、如东县，辽宁省调兵山市，湖南省耒阳市相继发生小反刍兽疫疫情。2020年５月至2021年５月，全国共报道18起小反刍兽疫疫情，其中14起涉及地区包括新疆生产建设兵团、青海、西藏及内蒙古，其余4起疫情分别发生在辽宁省清原县，青海省格尔木市，西藏自治区堆龙德庆区、尼木县、当雄县交界处及青海省都兰县国家自然保护区[5]。国内也有多起野生动物发生小反刍兽疫的报道，如青海省都兰县国家自然保护区的野生岩羊，西藏自治区堆龙德庆区、尼木县、当雄县交界处的野生岩羊，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市和库车市的鹅喉羚种群等，都曾发生过小反刍兽疫疫情[6]。

小反刍兽疫在我国被列为一类动物疫病，羊一旦感染PPRV，将很快在羊群中大面积传播，给养羊业造成严重的经济损失。因此，防治小反刍兽疫十分重要，而在小反刍兽疫的防控中，疫苗接种是最重要、最常见的防控措施之一[7]。到目前为止，已经研究成功的疫苗主要有减毒活疫苗、灭活疫苗、重组疫苗，因此开展小反刍兽疫疫苗免疫，加强对小反刍兽疫疫情的预防和监测，掌握规模场和散养户羊小反刍兽疫疫苗的免疫效果，不仅能有效保障黔东南州羊及羊类产品质量安全，有效控制小反刍兽疫的发生，还能为小反刍兽疫的防控提供重要依据。基于此，2023年上半年本团队在贵州省黔东南州的6个规模羊场和10个散养户采集羊血清样品共计742份，进行小反刍兽疫抗体检测，并对检测结果进行分析，现将情况报道如下。

1  材料与方法

1.1  羊血清样品与检测试剂

羊血清采集于黔东南州6个规模羊场、10个散养户，共计742份（其中规模羊场360份、散养户382份）。小反刍兽疫酶联免疫吸附（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）抗体检测试剂盒（批号：20221116），由深圳市莱孚生物科技有限公司生产。

1.2  免疫抗體检测与结果判定

1.2.1  抗体检测

1）洗涤液配制。用蒸馏水将洗涤液10×（2号液）按1∶10体积稀释为工作浓度洗涤液。

2）样品稀释及加样。用样品稀释液（5号液）将待检血清按1∶100体积稀释，每个样品孔加100 μL。

3）加阴、阳性对照品。阴性对照2孔，每个孔阴性对照品（试剂盒内提供）加入100 μL；阳性对照2孔，每个孔加阳性对照品（试剂盒内提供）100 μL，盖好封板膜，37 ℃避光反应30 min。

4）洗板。甩去孔内液体，每孔注满工作浓度洗涤液洗涤3次，每次均需停留1 min，最后1次甩净，拍干。

5）加酶反应。每孔加酶标结合物（1号液）100 μL，盖好封板膜，37 ℃避光反应30 min。后面操作同前述洗板方法。

6）显色反应。按所需用量，临用前取等体积底物溶液（3号液）和显色液（4号液）充分混匀，每孔加100 μL，盖好封板膜，37 ℃避光反应15 min。

7）终止反应。加终止液（6号液）50 μL，用酶标仪于450 nm波长读取OD值。

1.2.2  有效性判定

阴性对照孔OD450值不应大于0.20，否则小反刍兽疫抗体检测试验无效；阳性对照孔OD450值不应小于0.50，否则小反刍兽疫抗体检测试验无效。

1.2.3  检测结果判定

S/P值为样品OD值与阳性对照平均OD值的比值。S/P≥0.20，判断为小反刍兽疫抗体阳性；S/P＜0.20，判断为小反刍兽疫抗体阴性。

2  结果与分析

经测定，阴性对照OD450平均值为0.05，小于0.20；阳性对照OD450平均值为0.89，大于0.50。说明此次小反刍兽疫抗体检测试验有效。

2.1  规模羊场羊小反刍兽疫免疫抗体合格率

规模羊场小反刍兽疫免疫抗体检测结果如表1所示，检测6个规模羊场羊血清360份，合格数为291份，平均合格率为80.83%，合格率较高，超过农业农村部规定的合格标准（70%）；但是不同的规模羊场抗体水平存在差别，抗体合格率最高的是1号场，合格率为90.00%；其次是2号场、3号场，合格率分别是85.71%、85.24%；再次是5号场、4号场，抗体合格率分别是78.18%、77.78%；6号场抗体合格率最低，仅为67.24%，低于农业农村部规定的合格标准。

2.2  散养户羊小反刍兽疫免疫抗体合格率

散养户羊小反刍兽疫免疫抗体检测结果如表2所示，检测10个散养户羊血清382份，合格数为260份，平均合格率为68.06%，低于农业农村部规定的合格标准（70%）。但是不同散养户之间羊小反刍兽疫抗体合格率存在差异，抗体合格率较高的有10号、8号、3号，其次是1号、4号、6号，抗体合格率低于农业农村部规定合格标准的有5号、7号、2号、9号。

2.3  规模羊场与散养户羊小反刍兽疫免疫抗体水平比较

规模羊场与散养户羊小反刍兽疫免疫抗体水平存在明显差别。从平均合格率来看，规模羊场抗体平均合格率（80.83%）高于散养户抗体平均合格率（68.06%）；从抗体合格场（户）来看，6个规模羊场有5个规模羊场达到农业农村部规定的合格标准，占比83.33%，10户散养户只有6户达到农业农村部规定的合格标准，占比60.00%。可见，规模羊场羊小反刍兽疫免疫抗体水平明显高于散养户羊小反刍兽疫免疫抗体水平。

2.4  规模羊场与散养户羊小反刍兽免疫抗体S/P值比较

从表1来看，1号场小反刍兽疫免疫抗体合格率和S/P值最高，6号场小反刍兽疫免疫抗体合格率和S/P值最低；从表2来看，10号养殖户小反刍兽疫免疫抗体合格率和S/P值最高，9号养殖户小反刍兽疫免疫抗体合格率和S/P值最低。由此推断，小反刍兽疫免疫抗体S/P值与合格率呈正相关，即小反刍兽疫免疫抗体合格率越高，S/P值越高，疫情风险越低，反之疫情风险就越高；6个规模羊场羊小反刍兽疫免疫抗体S/P值平均为0.49，10户散养户羊小反刍兽疫抗体S/P值平均为0.32，规模羊场S/P值明显高于散养户。

3  小结

在正常情况下，小反刍兽疫疫苗免疫1次，抗体保护期限为3年[8]。这次检测结果显示，在黔东南州6个规模羊场中，仅有1个规模羊场小反刍兽疫免疫抗体不合格，占比16.67%；在10户散养户中，有4户小反刍兽疫免疫抗体不合格，占比达40%。对于羊群小反刍兽疫免疫合格率未达标的情况，经过仔细调查与分析，归纳出3方面的原因：1）最后一次小反刍兽疫疫苗免疫时间接近或超过3年，导致羊群抗体水平降低。2）饲养管理不当，致使羊群体质变弱，导致羊群免疫应答能力下降。3）部分养殖户不按照小反刍兽疫疫苗免疫程序进行免疫接种。

为了做好羊群的小反刍兽疫免疫工作，提高小反刍兽疫免疫抗体合格率，杜绝小反刍兽疫的发生，提出以下建议。1）对于小反刍兽疫免疫抗体未达标的规模羊场，建议定期开展小反刍兽疫免疫抗体检测，根据免疫抗体变化规律，制订适合本场的小反刍兽疫疫苗免疫程序。2）对于小反刍兽疫免疫抗体未达标的散养户，动物防疫部门应加强宣传，或对养殖户进行培训，使養殖户掌握动物疫病防治的基本知识，增强他们的防疫意识，提高养殖户防疫技术水平；改善羊群饲养管理条件，提高羊群体质；严格按照免疫程序开展小反刍兽疫疫苗免疫，提高羊群免疫力。

参考文献：

[1] 杨先富，莫兴虎，杨胜红，等.黔东南州规模羊场小反刍兽疫免疫抗体水平调查[J].农技服务，2021，38（2）：52-53.

[2] 耿怀洋.小反刍兽疫的诊断与防控[J].养殖与饲料，2020（3）：116-117.

[3] 阚威，李雷斌，赵旭阳，等.青海岩羊源小反刍兽疫病毒N、F基因的遗传进化分析[J].兽类学报，2023，43（2）：171-181.

[4] 王睿，王巍.小反刍兽疫的防控[J].北方牧业，2023（5）：30-31.

[5] 宋焕堂，江萍，丁剑，等.新疆小反刍兽疫流行现状及防控措施[J].现代畜牧兽医，2021（6）：84-87.

[6] 高睿，罗艳，庄向婷，等.以小反刍兽疫防控为例浅谈规模化羊场生物安全体系建设[J].吉林畜牧兽医，2022，43（6）：121-124.

[7] 赵川.小反刍兽疫疫苗研究进展[J].中国动物保健，2023，25（4）：125-126.

[8] 杨先富，廖飞，袁晓娟，等.从一例小反刍兽疫的发生到扑灭给我们的启示[J].中国兽医杂志，2017，35（5）：119-120.

（责任编辑：张春雨  丁志祥）

收稿日期：2023-07-17

作者简介：杨先富（1965—），男，贵州天柱人，硕士，正高级兽医师，从事动物疫病防控技术研究。E-mail：fxy6666yeah.net@163.com。