高抗桃流胶病的砧木品种‘山梨桃’组织培养快繁技术

赵韵 方连明 邢博闻 王赟 孙宇红 陆锦明 汤桂钧 王水燕

（1 上海市闵行区三农综合服务中心，上海 201109；2 上海市闵行区农业技术服务中心，上海 201199；3 上海闵行区苗圃有限公司，上海 201109）*为通信作者

桃流胶病又叫疣皮病、瘤皮病、桃树脂病，是发生在桃树以及很多核果类果树上的主要病害之一。该病主要在桃树枝干部位发生，以主干发病较为严重，会引起树势衰弱、果实品质下降，且在发生严重时会造成桃树整株死亡[1-2]。桃流胶病分为非侵染性流胶和侵染性流胶两种，前者是一种生理性病害，在我国桃树种植地区均有不同程度的发生，前者发生时会严重削弱树势并降低产量；后者为真菌侵染致病，主要发生在江苏、浙江、上海、安徽、江西、湖北等长江中下游地区。桃流胶病发生持续时间较长，在4 月—10 月均可发生，其中以5 月—9 月发生较为严重。桃流胶病的发病机理复杂，防治难度较大，目前生产上主要通过加强果园管理增强树势以及喷施化学农药来进行防治，但这些方法往往难以根治桃流胶病。

桃树的种苗生产主要采用嫁接技术，其中嫁接苗的砧木品种对桃流胶病的抗性决定了整株桃树的抗流胶病特性。鉴于此，在桃树嫁接种苗生产上，选用高抗桃流胶病的砧木品种，可从源头上防止桃流胶病的发生，从而保证桃树的正常生长。目前，砧木种苗的繁育方法主要有种子播种、扦插、组织培养等，其中种子播种、扦插受外界环境因素的干扰较多，且繁殖速度慢、植株长势弱。而应用组织培养技术，既可获得提纯复壮、脱病毒（脱病菌）的种苗，又可达到快速繁育种苗的目的。目前，已有一些应用“嫩茎段离体培养法”“茎尖离体培养法”等组织培养技术繁殖砧木种苗的报道[3]。

‘山梨桃’是笔者近年引进的具有高抗桃流胶病的桃砧木品种。为尽快将该高抗桃流胶病品种应用于嫁接苗生产中，笔者借鉴蔷薇科、杜鹃科、杉科等木本植物的组织培养技术，应用“茎尖离体培养法”繁育了高抗桃流胶病的优良砧木品种‘山梨桃’种苗，并取得了成功，这为生产高抗桃流胶病的嫁接种苗打下了扎实的基础。现笔者拟将相关研究结果报道如下，以供参考。

1 外植体的诱导发生培养

1.1 外植体材料的选择与清洗

选取‘山梨桃’树当年春季萌发、叶片已展平转绿、枝条柔软有弹性的半木质化新枝，剪下新枝顶端3～5 cm，剪去已展平的叶片，将枝条用洗洁精冲洗3 遍后，用纱布包裹置于自来水下冲洗3 h。

1.2 外植体材料的消毒

在无菌室超净台上对枝条进行消毒，先用75%乙醇溶液消毒1 min，再用2%洁尔敏溶液消毒15 min，然后用10%次氯酸钠溶液消毒15 min（值得注意的是，为提高消毒杀菌效果，需反复摇晃玻璃瓶，以使杀菌剂渗透进枝条内部），最后，用无菌水冲洗3 遍后，用无菌滤纸吸干水分备用。

1.3 茎尖剥取与接种

在超净台上于80 倍解剖镜下用手术刀、解剖针剥取茎尖（长度在0.5 mm 左右），将0.5 cm 长的顶端连同茎尖一起切下，接种于发生培养基上诱导茎尖生长，以育成无菌系新芽。实践证明，与嫩茎段培养、叶片培养、根尖培养、花托（花蕾）培养等方法相比，茎尖培养法具有发生快、发生率高、脱病毒等优点，这是因为茎尖属于顶端分生组织，而顶端分生组织产生的植株几乎没有病毒[4]，故茎尖培养是产生脱病毒种苗的捷径。

1.4 茎尖发生培养基配方

茎尖发生培养基配方宜为1/2MS+ZT 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L+ 琼脂粉5.5 g/L+ 蔗糖30 g/L，pH 为5.6，诱导成功率可达96%。每培养瓶灌装培养基30 mL 左右，然后放置于消毒锅中消毒（温度121 ℃、0.11 MPa），待瓶内琼脂溶液冷却凝固后，每瓶接种1 个茎尖。

1.5 茎尖培养的温度和光照管理

茎尖培养的室内温度为24 ℃，光照强度为3 000 lx，每天光照时间为12 h（上午7 时—下午7 时）。培养7 d 后，茎尖开始萌动生长；培养15 d 时，茎尖长至长度为0.5 cm 以上；培养30 d 后，茎尖长至长度为1.0 cm 以上，亦有4、5 片新叶长出，且在基部叶腋内长出1～3个腋芽（“丛生芽”），少数长出3 个以上腋芽，预示着无菌系培育成功。

2 无菌系继代增殖培养

将发生成功的无菌系丛生芽切开进行继代增殖培养，每瓶接种3～5 株，增殖培养基配方宜为WP(木本培养基)+BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+琼脂粉5.5 g/L+ 蔗糖30 g/L，pH 为5.6，消毒方法同发生培养。培养室温度为24 ℃，光照强度为3 000 lx ，每天光照时间为12 h（上午7 时—下午7 时），每30～40 d 增殖1 次，增殖系数可达1∶3.0～3.5。

3 生根培养

当瓶苗增殖至一定基数、幼苗长至高2 cm 以上时，将瓶苗切成单株转入生根培养基进行诱导生根，以培育成完整的瓶苗。

3.1 生根培养基配方

生根培养基配方宜为1/2MS+IBA 0.5 mg/L+活性炭2 mg/L+琼脂粉5.5 g/L+蔗糖20 g/L+铁钠盐38.23 mg/L（全量不减半），pH 为5.6，生根率可达95%，消毒方法同发生培养。在生根培养过程中，很多木本植物在植株离体后，会在枝条基部切口处逐渐发生褐化，从而丧失生根功能，这主要是因为枝条离体后产生了很多多酚类化学物质，从而使枝条基部切口逐渐褐化甚至死亡。而活性炭是一种无机矿物质，也是一种吸附剂，既对褐化现象有一定的抑制作用[5]，又可促进养分吸收、改善通透性[6]。因此，笔者在本试验培养基配方中添加了活性炭2 mg/L，以抑制幼苗基部褐化，促进其生根。

3.2 生根培养的温度、光照管理

在生根培养阶段，掌握适宜的生根培养温度也是重要一环，温度过高，会造成枝条徒长，叶色变淡，使生根推迟或不生根。生根培养阶段的培养室适宜温度为23～24 ℃，光照强度为3 000 lx，每天光照时间为12 h（上午7 时—下午7 时）。

3.3 常温炼苗

当培养瓶内幼苗根长约1 cm 时，将瓶苗移出培养室，打开瓶口，将其置于室内光亮处，进行常温炼苗24 h，然后用镊子轻轻将瓶苗取出，在清水中漂净根部（根部沾染琼脂会使瓶苗感染细菌和真菌），以防瓶苗栽入基质后烂根死苗。

4 炼苗驯化

4.1 炼苗时间与保护设施

炼苗时间以3月上旬至5月上旬为好，此阶段光照充足、气温适宜、雨水充沛，是一年中瓶苗炼苗驯化的最佳季节。炼苗设施以宽8 m、长30 m 的标准大棚（简称8型棚）或连栋大棚为好，大棚内外需设置2层黑色、75%遮光率的遮阳网（即在大棚外离顶部60 cm 处安装1 层可伸缩遮阳网，在大棚内增设1 层遮阳网或在苗床上架设小环棚遮阳网），以减少因日光直射导致棚内温度骤升引发的弊病，从而确保瓶苗能在移栽后7～10 d 内成活。炼苗苗床采用镀锌钢架网状苗床，苗床一般离地高度为80.0 cm、宽为1.3 m、长为14.0 m，通风透气性良好，操作管理方便。此外，在苗床上方1 m 左右高度处架设自动喷雾塑料管带，每隔1.2 m 安装1 个喷头，由自动机械系统控制，根据幼苗不同生长时期的需水情况调节喷雾次数。

4.2 基质配比

炼苗基质为泥炭+珍珠岩（质量配比为3∶1），充分拌匀后铺设于苗床上，厚度在8 cm 左右。

4.3 瓶苗移栽

在瓶苗移栽前，先对基质稍喷些水，然后用镊子、小刀或竹木片将幼苗浅栽于基质中（移栽株行距为4 cm×4 cm），栽后浇足活棵水。同时，苗床上需搭建小环棚并用塑料薄膜覆盖，以防幼苗失水萎蔫。

4.4 移栽后主要管理措施

4.4.1 水分管理

在幼苗移栽后第2天，进行叶面喷雾补水，每天喷水3～5次（阴雨天可少喷或不喷），喷水后覆盖塑料薄膜。大棚内空气相对湿度保持在75%～80%，持续一周左右。

4.4.2 光照管理

在幼苗移栽后一周内，如遇晴天日光较强，需用75%遮光率的遮阳网自上午9 时至下午4 时进行遮阳；一周后，若幼苗已成活，且有新根、新叶长出，可适当进行照光，若遇高温强光天气，仍需进行遮阳。当幼苗长至苗高5 cm 以上、具有4 张叶片以上时（约30 d），需加强光照，以促进主茎不断加粗、幼苗健壮生长。

4.4.3 温度管理

在幼苗移栽后15 d 内，大棚内温度宜控制在20～25 ℃，极端温度不宜超过30 ℃，若超过30℃，应立即采用通风、遮阳、喷雾等措施进行降温。在幼苗移栽15 d 后，大棚内温度宜控制在25～28℃，极端温度不超过30 ℃。

4.4.4 其他管理措施

在幼苗移栽15 d 后、幼苗高达5 cm 左右、具4张叶片以上时，需及时追肥，以促进幼苗健壮生长。一般可用0.5%尿素加0.5%磷酸二氢钾兑水浇灌，每月浇灌2次。幼苗移栽后几乎没有病害发生，但如果苗床基质水分过多则会引发根茎病，从而造成烂苗，此时需用杀菌剂浇灌防治；虫害主要为蚜虫、红蜘蛛，可喷施虫螨光1 000倍液或噻虫嗪1 000～2 000倍液进行防治。

5 砧木用幼苗种植移栽

幼苗炼苗驯化4个月以上，苗高一般可达10 cm以上、具8 张叶片以上，此时可将其移栽至苗圃基地内作砧木苗进行培育。经1～2 个月的苗木培育后，即可直接进行嫁接育苗。该砧木苗的亲和力极高，不同桃树接穗品种（如水蜜桃、黄桃等）可通过芽接、劈接等方法进行嫁接，且嫁接苗种植至果园后，可避免桃流胶病的侵染，确保桃树正常生长及开花结果。