水稻恶苗病接种试验初步研究

邵丽华，李鹏

摘  要：选择了2个水稻品种，通过病原菌孢子和菌丝悬浮液与稻粒混拌的方法接种，接种5 d后分离出病原菌的芽数占总分离稻芽的70%以上，从病原菌分离出部位看，病原菌随着植株生长逐步向上扩展蔓延。接种发病的效果证明了使用稻粒与恶苗病菌混拌接种方法是可行的，且简便易行。

关键词：水稻；恶苗病；接种；镰孢属

中图分类号：Ｓ435.111.4+4                       文献标志码：A文章编号：1673－6737（２０23）05－００30－０3

Preliminary Study on Inoculation Test of Rice Bakanae

SHAO Li-hua ， LI Peng*

（Institute of Plant Protection， Heilongjiang Academy of Land Reclamation Sciences， Harbin 150038， China）

Abstract：In this paper， two rice varieties were selected and inoculated by mixing pathogen spores and mycelia suspension with rice grain. After 5 days of inoculation， the number of shoots isolated pathogens accounted for more than 70% of the total isolated rice shoots. The effect of inoculation proved that the mixed inoculation method of rice grain and pathogen was feasible and simple.

Key words： Rice; Bakanae; Inoculation; Fusarium

水稻恶苗病又名徒长病俗称公稻子，是危害性强的水稻常见真菌性病害，是黑龙江稻区普遍发生的水稻病害，在水稻生育后期调查发病重的地块发病率达10%～20%，严重影响水稻产量。目前，种子处理是防治恶苗病的关键，降低苗期的发病率，然而种植抗恶苗病水稻品种是最经济有效的防治方法。本论文通过病原菌孢子和菌丝悬浮液与稻粒混拌的方法接种，明确浸种催芽阶段此接种方法的可行性，为恶苗病室內抗性研究提供简便易行的接种方法。

1  材料与方法

1.1  水稻粒寄生病原真菌种类

将100粒品种为龙粳31的稻谷内颖、外颖和糙米手动分开后，使用次氯酸钠溶液表面消毒（内颖、外颖各1.5 min，糙米2.5 min）后，置于直径90 mm玻璃培养皿的PDA培养基平板上，每个平板放10个（粒），之后将培养皿置于28 ℃恒温培养箱中暗培养，6 d后观察病原菌形态。

1.2  病原菌分离培养

在水稻品种为龙粳31的地块上采集恶苗病病株，将病株的病节取3 mm×（3～5）mm大小的病组织，经次氯酸钠溶液表面消毒3 min后，置于直径90 mm玻璃培养皿的PDA培养基平板上，每个平板放5块病组织，之后将培养皿置于28 ℃恒温培养箱中暗培养，6 d后观察病原菌形态并转管保存待用。

1.3  恶苗病菌接种试验

水稻品种：垦稻26、龙粳31。

浸种药剂：4%嘧啶核苷类抗菌素水剂1 000倍液（武汉科诺生物科技股份有限公司生产）。

试验方法：每品种选500粒，药剂浸种2 d后更换清水浸种，24 h后再更换1次清水，共浸种4 d后催芽，催芽前接种，并设置不接种的处理为CK（每个品种215粒），每个品种接种285粒，接种后32 ℃恒温催芽24 h，按接种后1 d、3 d、5 d将接种与不接种的2个品种随机选30粒取各处理种子芽进行分离培养，使用次氯酸钠溶液表面消毒2 min后，置于直径90 mm玻璃培养皿的PDA培养基平板上，每个平板放10粒，之后将培养皿置于28 ℃恒温培养箱中暗培养，每隔2 d观察病原菌分离情况并记录。催芽24 h后30 ℃下全光照24 h，之后温度调至25 ℃全黑暗24 h、全光照24 h，然后将各处理剩余种子播种待用。

接种方法：将病组织分离培养转管保存的镰孢属真菌转至PDA培养基平板上扩繁，扩繁后的菌落取下后放入直径90 mm玻璃培养皿中，加少量水将菌丝和孢子刮下来，制成菌丝和孢子悬浮液，将菌丝和孢子悬浮液倒入装有稻谷的三角瓶中摇晃，使稻谷和悬浮液混合均匀。

播种方法：将3 kg土与3 g尿素混拌均匀后，分装在5个塑料盒内浇水、播种、覆土。

2  结果与分析

2.1  水稻粒寄生病原真菌种类

6 d后病原菌形态特征目测和镜检观察可知，稻粒内颖、外颖和糙米分离出链格孢属、镰孢属真菌及红色未知真菌（表1），其中内颖分离出69株链格孢属真菌，占分离出总菌株数97.2%，外颖分离出89株链格孢属真菌，占分离出总菌株数97.8%，糙米分离出60株链格孢属真菌，占分离出总菌株数95.2%。

链格孢属真菌气生菌丝白色，绒毡状，菌落背面橄榄黑色，颜色较深，分生孢子链生，倒棒状、卵形、倒梨形或近椭圆形，褐色，表面光滑或具细疣，具横、纵、斜隔膜，分隔处略缢缩，少数具喙，喙短柱状或锥状。

镰孢属真菌气生菌丝绒状至粉状，白色，菌落背面黄色或红色，小型分生孢子数量多，卵型或椭圆形，单胞，大型分生孢子镰刀型，细长，顶胞渐尖。

2.2  病原菌分离培养

10个病组织分离培养2 d后均可见到病原菌菌丝，6 d后病原菌形态特征目测和镜检观察可知，气生菌丝绒状至粉状，菌落背面黄色或红色，培养基不变色，小型分生孢子数量多，卵型或椭圆形，单胞，偶见双胞，大型分生孢子镰刀型，细长，顶胞渐尖。从形态特征上确定病原菌为镰孢属（Fusarium）真菌。

2.3  恶苗病菌接种试验

2.3.1  接种后1 d分离培养结果  分离培养2 d后目测观察，垦稻26和龙粳31接种处理各有1个芽分离出病原菌，垦稻26和龙粳31未接种处理没有分离出病原菌。分离培养4 d后目测观察，垦稻26接种处理有1个芽分离出病原菌，占总分离稻芽3.3%；龙粳31接种处理有3个芽分离出病原菌，占总分离稻芽10%；垦稻26和龙粳31未接种处理没有分离出病原菌。

2.3.2  接种后3 d分离培养结果  分离培养2 d后目测观察，垦稻26接种处理有25个芽分离出病原菌，龙粳31接种处理有8个芽分离出病原菌，垦稻26和龙粳31未接种处理没有分离出病原菌。分离培养4 d后目测观察，垦稻26接种处理有26个芽分离出病原菌，占总分离稻芽86.7%，分离出病原菌的部位均在鞘叶；龙粳31接种处理有9个芽分离出病原菌，占总分离稻芽30%，分离出病原菌的部位均在鞘叶；垦稻26和龙粳31未接种处理没有分离出病原菌。

2.3.3  接种后5 d分离培养结果  分离培养2 d后目测观察，垦稻26接种处理有22个芽分离出病原菌，龙粳31接种处理有21个芽分离出病原菌，垦稻26和龙粳31未接种处理没有分离出病原菌。分离培养4 d后目测观察，垦稻26接种处理有25个芽分离出病原菌，占总分离稻芽83.3%，分别在10个鞘叶和15个不完全叶上分离出来；龙粳31接种处理有22个芽分离出病原菌，占总分离稻芽73.3%，分别在10个鞘叶、9个不完全叶和3个1叶上分离出来；垦稻26和龙粳31未接种处理没有分离出病原菌。

3  结论与讨论

水稻粒内颖、外颖和糙米经次氯酸钠溶液表面消毒后，分离出链格孢属、镰孢属等真菌，为了不影响恶苗病菌接种效果，使用嘧啶核苷类抗菌素浸种后接种效果明显，接种5 d后分离出病原菌的芽数占总分离稻芽的70%以上，从病原菌分离出部位看，病原菌随着植株生长逐步向上扩展蔓延。以上试验证明了使用稻粒与恶苗病菌混拌的接种方法是可行的。

台莲梅等[1]（2003）以滤纸保湿法和分离培养法，从水稻种子内部和表面共分离鉴定出13个属、15个种真菌，其中链格孢菌（Alternaria oryzae）、禾谷镰孢菌（Fusarium graminearum）、黑附球菌（Epicoccum neglectum）、枝孢菌（Cladosporium cladosporioidas）为优势种。链格孢菌在两种分离方法中出现數量都高，禾谷镰刀菌、枝孢菌以分离培养法出现数量多，而黑附球菌则以滤纸保湿法出现的数量多。台莲梅等[2]（2020）确定黑龙江省水稻穗褐变病主要由禾谷镰孢（Fusarium graminearum）、链格孢（Alternaria alternata）、稻黑孢（Nigrospora oryzae）和黑附球霉（Epicoccum nigrum）4种病原真菌引起。乔金玲等[3]（2010）遵循Kochs法则，参照Ainsworth分类系统，确定了水稻褐变穗的病原菌主要是链格孢（Alternaria alternata （Fr.）Keissl）和黑孢霉（Nigrospora Zi）。韩雨桐[4]（2016）明确了引起黑龙江省水稻褐变穗病的病原为链格孢（Alternaria alternata （Fr.）Keissl）。从以上文献研究结果可以明确稻谷上有多种病原真菌，且以链格孢属和镰孢属真菌出现的数量多，笔者采用分离培养法获得的链格孢属真菌最多，也有少量的镰孢属真菌，因此在接种试验中使用了杀菌剂，以消除种子带菌对试验结果的影响。

前人在恶苗病菌接种试验过程中采用了多种试验方法，并明确了恶苗病菌侵染主要时期。郑镐燮，吕彬等[5-8]（1993，1994）明确水稻芽期浸菌接种法能明显区分不同品种（系）的抗感水平，且简便易行，适用于大量水稻品种抗恶苗病筛选鉴定。李勇等[9]（1994）将病菌孢子液连同培养基与种子拌匀接种，也取得了较好的鉴定结果。方兴洲等[10]（2012）明确了恶苗病菌侵染主要时期是催芽阶段，浸种过程中发病率随温度增加而上升，催芽温度34 ℃发病率最高。吕彬[11]（1996）研究结果确定芽期浸菌接种的致病效果最佳。笔者在芽期采用病原菌孢子和菌丝悬浮液与稻粒混拌的方法接种，也有比较好的接种发病效果，且简便易行。

参考文献：

[1] 台莲梅，郑雯，闫凤云，等.水稻种子真菌种群研究[J].黑龙江八一农垦大学学报，2003（1）：31-33.

[2] 台莲梅，姜小玉，靳学慧，等.黑龙江省水稻穗褐变病病原菌的分离与鉴定[J].微生物学通报，2020，4（6）：1776-1786.

[3] 乔金玲，台莲梅，王平，等.水稻褐变穗病原菌生物学特性的研究[J].现代化农业，2010（04）：9-10.

[4] 韩雨桐.黑龙江省水稻褐变穗病原鉴定、抗源及药剂筛选研究[D].哈尔滨：东北农业大学，2016.

[5] 郑镐燮，吕彬，吴润植，等.水稻恶苗病抗病性筛选方法的初步研究[J].植物保护学报，1993（4）：289-293.

[6] 吕彬.水稻种质资源对水稻恶苗病的抗性鉴定初报[J].植物保护，1994（3）：20-21.

[7] 郑镐燮，吕彬，吴润植，等.水稻品种抗恶苗病鉴定方法的研究[J].植物保护，1993（3）：8-10.

[8] 郑镐燮，吕彬，吴润植.水稻品种资源对恶苗病抗性鉴定研究[J].黑龙江农业科学，1993（3）：11-13.

[9] 李勇，林佩力，李静，等.水稻品种抗恶苗病鉴定研究初报[J].黑龙江农业科学，1994（1）：29-31.

[10] 方兴洲，陈莉，产祝龙，等.水稻恶苗病与浸种、催芽和播种等因子的关系研究[J].热带作物学报，2012，33（6）：1107-1110.

[11] 吕彬.水稻抗恶苗病的鉴定方法研究[J].作物学报，1996（5）：629-632.

（责任编辑：王丹）