小鹅瘟、鸭病毒性肝炎卵黄抗体高免蛋免疫程序的研究

陈生雷，王一平，陈欣婷，李凤艳，舒秀伟

（ 辽宁益康生物股份有限公司，辽宁 辽阳 111000 ）

小鹅瘟（GP）是由小鹅瘟病毒（GPV）引起的一种急性或亚急性败血病，主要病理变化表现为渗出性肠炎。GP主要侵害出壳后4～20 日龄雏鹅，传染快且病死率可高达90%～100%，是危害养鹅业最严重的病毒性传染病之一[1-4]。近年来，养鹅业发展迅猛，但GP的流行对养鹅业造成了巨大的经济损失。鸭病毒性肝炎（DVH）是由鸭病毒性肝炎病毒（DHV）引起的一种急性、高度传染性的病毒性疾病，主要感染21日龄以内的雏鸭，可引起典型的肝炎症状，雏鸭死亡率高达80%[5-7]。目前对以上两种水禽疫病主要防治措施为应用卵黄抗体[8-10]。为使卵黄抗体效价达到较高水平，本试验将GP、DVH（1型+3型）二联灭活疫苗接种不同组别的商品蛋鸡，分别在接种后不同时间检测卵黄中的抗体效价，以筛选最佳高免蛋免疫接种程序。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验动物

试验动物为110 日龄海兰褐商品蛋鸡，由辽宁益康生物股份有限公司提供。

1.1.2 疫苗、阳性血清和检测用抗原

GP、DVH（1 型+3 型）二联灭活疫苗（批号：GM202101，辽宁益康生物股份有限公司）。GP阳性血清、DHV LSE 株阳性血清、DHV QZE 株阳性血清（自制）；GP琼扩抗原、DHV 1 型LSE 株检验抗原、DHV 3 型QZE 株检验抗原均由辽宁益康生物股份有限公司提供。

1.1.3 主要仪器

T25高速剪切机（IKA公司）、BSC-1304IIA2生物安全柜（北京东联哈尔仪器制造有限公司）、3k15高速冷冻离心机（德国Sigms公司）等。

1.2 试验设计

随机将2 500只产蛋鸡分成5组，每组500只鸡。A组首次免疫剂量为1.0 mL/只；接种后14 d 进行第2 次免疫，剂量为1.0 mL/只；第2次免疫后21 d进行第3次免疫，剂量为1.5 mL/只。B组首次免疫剂量为1.0 mL/只；接种后14 d进行第2次免疫，剂量为1.5 mL/只；第2次免疫后21 d进行第3 次免疫，剂量为1.5 mL/只。C 组首次免疫剂量为1.0 mL/只；接种后21 d进行第2次免疫，剂量为1.0 mL/只；第2 次免疫后21 d 进行第3 次免疫，剂量为1.5 mL/只。D组首次免疫剂量为1.0 mL/只；接种后21 d进行第2次免疫，剂量为1.5 mL/只；第2次免疫后21 d进行第3次免疫，剂量为1.5 mL/只。E组不接种作为非免疫对照组。

1.3 测定指标及方法

1.3.1 安全性评价

免疫后每天观察鸡死亡、精神状态、采食等情况至试验结束，计算死淘率。每次免疫后14 d随机抽取10只鸡，观察疫苗注射部位有无硬结、肿胀、溃烂等情况。第3次免疫后21 d，随机抽取5只鸡剖杀，观察疫苗吸收情况。

1.3.2 抗体水平

分别于免疫前以及首免、第2 次免疫及第3 次免疫后14、21 d 分别取蛋进行GP、DVH 卵黄抗体效价测定，测定方法按照试剂盒说明书操作。

1.3.3 产蛋统计

免疫后每周进行产蛋统计，计算产蛋率。

2 结果与分析

2.1 安全性评价（见表1）

表1 安全性评价Tab.1 Safety evaluation

由表1 可知，免疫后，与不免疫对照组相比，4 个注射组鸡群的精神状态、采食、饮水等情况差异均不明显。免疫鸡检查注射局部，均无肿胀、溃烂等异常情况发生。A 组死淘12 只（死淘率2.4%），B 组死淘15 只（死淘率3.0%），C组死淘14只（死淘率2.8%），D组死淘16只（死淘率3.2%），各组死淘差异不明显。A 组疫苗已全部吸收，B组有2只鸡注射部位可见小颗粒；C组疫苗已全部吸收，D组有1只鸡注射部位可见未完全吸收的小颗粒。

2.2 抗体监测结果（见表2、表3）

表2 GP琼扩抗体监测结果Tab.2 Results of GP AGAR amplification antibody monitoring

表3 DVH中和抗体监测结果Tab.3 Results of DVH neutralizing antibody monitoring

由表2、表3 可知，首免14 d 后即可产生抗体，GP、DVH 抗体均在3 免后21 d 达到高峰，GP 琼扩抗体效价为1∶200～1∶280，DVH 抗体效价为1∶919.58～1∶1 591.71。B组、D组抗体水平高于A组和C组，说明抗体水平随着免疫剂量增加而升高；A组和C组、B组和D组首免和第2次免疫间隔时间不同，抗体增长差异不显著。

2.3 不同免疫方案对蛋鸡产蛋率的影响（见表4）

表4 不同免疫方案对蛋鸡产蛋率的影响Tab.4 Effects of different immunization regimens on laying rate of laying hens 单位：%

由表4 可知，三免后21 d，免疫组产蛋率为80.00%～83.43%，对照组的产蛋率为85.43%，提示大剂量和高频次免疫会对产蛋鸡的产蛋性能产生一些应激性的影响，临床表现为产蛋率下降，免疫组比对照组下降2.34%～6.36%。

3 讨论

GP 和DVH 是水禽疫病防控的重点疾病[11-14]，对其预防疾病控制的主要方法是应用GPV、DHV 制备灭活疫苗免疫商品蛋鸡。具体方法是经检测达到使用标准的种蛋提取卵黄抗体，制备成冻干或水剂的抗体制剂，对雏鸭和雏鹅进行免疫以达到保护作用。抗体的提取方法很多，如何高效地提取卵黄中的抗体并有效利用抗体，达到降低成本提升效率是相关研究的最终目标，实现这一降本增效的目标的基本环节是鸡群免疫和保证抗体持续期[15]。本研究为优化免疫程序，通过设置不同剂量和免疫间隔时间对试验鸡进行GP、DVH（1型+3型）二联灭活疫苗免疫，在免疫过程中的不同时间测定卵黄GP琼扩抗体、DVH中和抗体水平，同时对疫苗免疫后的安全性包括接种部位吸收情况、死淘率和产蛋率进行统计比较。结果表明，疫苗免疫后试验鸡局部吸收良好，且死淘率与对照组相比差异不显著。产蛋率结果显示，免疫组由于经过3次不同剂量的灭活疫苗免疫，产蛋率略低于对照组，说明高剂量免疫会对鸡群产蛋率产生一定影响。3免后21 d，B组、D组GP琼扩抗体、DVH中和抗体高于A组、C组，说明抗体水平随着免疫剂量增加而增加；各组首免和第2次免疫间隔不同时间比较，间隔21 d 组鸡抗体水平略高于较间隔14 d，且产蛋率也高于间隔14 d。综上，高剂量和高频次免疫时，免疫间隔时间延长对机体的应激恢复会有一定的效果。通过上述试验结果表明，适当增加免疫剂量可提升抗体水平，但同时也会对鸡群的产蛋性能产生一定影响，在增加免疫剂量的同时也要考虑应激引起的生产性能下降。因此，应综合考虑优化免疫程序，包括剂量、频次和间隔时间，以保持较好的抗体水平和生产性能。

4 结论

本研究结果显示，优化最佳免疫程序为首次免疫剂量1.0 mL/只，21 d 后进行第2 次免疫（剂量为1.5 mL/只），21 d 后进行第3 次免疫（剂量为1.5 mL/只），3 免后21 d 可采集种蛋进行抗体制备，后期通过持续的抗体监测调整维持免疫的时间和剂量。