磁微粒化学发光法检测乙型肝炎血清标志物的临床研究

刘晓倩 王辉 揭勤琴

基金项目：抚州市社会发展指导性科技计划项目（133）

作者简介：刘晓倩，女，本科，主管技师。

【摘要】 目的 探讨磁微粒化学发光法检测乙型肝炎血清标志物的临床价值。方法 选取2021年3月—2022年1月广昌县人民医院收治的100例乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染患者作为观察组，同期健康体检者100名作为对照组。所有入选对象均于清晨采集6 mL空腹血，离心处理后将血清标本分成2份，分别采用酶联免疫吸附法与磁微粒化学发光法检测血清内乙型肝炎病毒表面抗原（hepatitis B virus surface antigen，HBsAg）、乙型肝炎表面抗体（hepatitis B surface antibody，HBsAb）、乙型肝炎核心抗体（hepatitis B core antibody，HBcAb）、乙型肝炎e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）、乙型肝炎e抗体（hepatitis B e antibody，HBeAb）及前S1抗原（Pre-S1 antigen，Pre-S1Ag）。比较2种方法检测HBV阳性检出率、血清标志物阳性率及诊断效能。结果 磁微粒化学发光法检测在观察组中HBV感染阳性检出率高于酶联免疫吸附法，差异有统计学意义（χ2=4.348，P=0.037）；2种检测方法在对照组中阳性检出率相比，差异无统计学意义（χ2=0.592，P=0.442）；磁微粒化学发光法检测HBsAb阳性率、HBcAb阳性率高于酶联免疫吸附法，差异有统计学意义（P＜0.05）；磁微粒化学发光法检测灵敏度、准确度较酶联免疫吸附法高，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 2种方法检测乙型肝炎血清标志物均具有良好价值，但磁微粒化学发光法检测阳性检出率、灵敏度、准确度更高，利于提高HBV感染诊断效能，为临床后续治疗工作开展提供参考。

【关键词】 乙型肝炎；磁微粒化学发光法；酶联免疫吸附法；血清标志物

中图分类号：R446.6     文献标识码：A

文章编号：1672-1721（2023）31-0096-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.31.032

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）持续感染所致，早期肝损伤尚不严重，无明显症状。随着乙型肝炎病情进展，可反复出现乏力、食欲减退、头晕等症状，甚至可诱发肝脾肿大、肝掌等体征变化，若不及时救治，进展至肝硬化失代偿期可严重损害肝功能[1-2]。同时，乙型肝炎具有較强的传染性，可通过血液、母婴及性接触等多种途径进行传播，故早期明确诊断并予以规范化治疗，对控制疾病进展及防控感染病传播尤为重要。乙型肝炎的确诊主要依赖于血清标志物检测，包括乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗体（HBsAb）、乙型肝炎核心抗体（HBcAb）等，通过检测上述标志物定量情况，能为乙型肝炎定性诊断提供充足依据。酶联免疫吸附法为当前检测常用方法，具有操作简单、灵敏、快速、载体易于标准化等优势，可及时明确血清标志物检出情况，但长期应用发现该方法仍存在一定漏诊风险，不利于乙型肝炎精准防治[3-4]。磁微粒化学发光法则为新一代检测方法，该技术将免疫反应体系、免疫磁珠体系等结合，不仅灵敏度高，还兼顾检测快、操作简便等特点，易于自动化操作[5-6]。但磁微粒化学发光法在乙型肝炎中的具体检测效果尚未明确，仍需深入研究。鉴于此，本研究旨在分析磁微粒化学发光法检测乙型肝炎血清标志物的临床价值，报告如下。

1   资料与方法

1.1 一般资料 选取2021年3月—2022年1月广昌县人民医院收治的100例HBV感染患者作为观察组，同期健康体检者100名作为对照组。观察组男性59例，女性41例；年龄28～67岁，平均年龄（43.85±4.39）岁；对照组男性56名，女性44名；年龄29～68岁，平均年龄（44.05±4.46）岁。2组患者一般资料对比，差异无统计学意义（P＞0.05）。研究经医学伦理委员会批准。

纳入标准：经以HBV-DNA确诊；精神状态正常；临床资料完整；患者及其家属签署知情同意书。排除标准：合并其他肝脏疾病者；恶性肿瘤者；妊娠或哺乳期女性。

1.2 方法 仪器采用酶标仪Elx-800（美国BIOTek）、全自动化学发光免疫分析仪Wan200+（厦门优迈科医学仪器有限公司）、水浴箱420-A（江苏新康医疗器械有限公司）、洗板机DNX-9620（北京普朗新技术有限公司）、离心机TDZ5-WS（上海卢湘仪离心机仪器有限公司）。酶联免疫吸附法试剂由中山生物工程有限公司及武汉康珠生物技术有限公司提供，磁微粒化学发光法试剂由厦门万泰凯瑞生物技术有限公司提供。

所有入选对象均于清晨采集6 mL空腹血，以

3 000 r/min速度离心10 min，离心半径10 cm，获得血清后将其均分为2份，分别以酶联免疫吸附法与磁微粒化学发光法检测血清内HBsAg、HBsAb、HBcAb、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗体（HBeAb）及前S1抗原（Pre-S1Ag）水平。

酶联免疫吸附法：先进行准备工作，将试剂盒取出后室温下平衡30 min，并将浓缩洗涤液稀释20倍，之后设置空白对照1孔，阳性、阴性对照各2孔，每组待测标本1份（50 μL）；进行加酶处理，除空白对照外，每孔各加酶标溶液50 μL，混匀后封板，于37 ℃水浴箱内温育30 min；洗涤处理，将洗涤液注满各孔，静置5～10 s，去除洗涤液，重复4次，末次在吸水纸上拍干；行显色处理，每孔加底物A、B各50 μL，混匀后，置于37 ℃环境下避光15 min，每孔加50 μL终止液轻拍混匀进行终止处理，最后以酶标仪读数处理，单波长450 nm，空白孔校零后，读取各孔光密度（optical density，OD）值；结果判断，以OD值/临界OD值为参考，OD值/临界OD值≥1.00，则HBsAb、HBsAg、HBeAg为阳性，OD值/临界OD值＜1.00，则HBeAb、HBcAb为阳性。

磁微粒化学发光法：先进行仪器准备，将配套的反应杯、洗液、吸头等置于预定位置，以质量分数为75%酒精棉球将试剂针擦洗干净，并检查仪器是否处于良好运行状态，之后将配套试剂置于仪器试剂仓内，仪器可自动对试剂盒上条码信息进行读取；标本准备，吸取800 μL标本于专用样品杯，以试剂盒内附带

2瓶定标液校正出厂时反应曲线，测定待测样本；结果判断，HBsAg阳性为≥0.05 U/mL，HBsAb阳性为≥

10 mU/mL，HBcAb阳性为≥0.35 U/mL，HBeAg阳性为≥0.1 PEU/mL，HBeAb≥0.15 PEU/mL，Pre-S1阳性为≥1 COI。

1.3 观察指标 （1）2种方法检测HBV阳性检出率。比较磁微粒化学发光法检测与酶联免疫吸附法检测在观察组、对照组中HBV感染阳性检出率。（2）2种方法检测血清标志物阳性检出率。比较磁微粒化学发光法检测与酶联免疫吸附法检测在观察组中HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg、HBeAb、Pre-S1Ag阳性检出情况。（3）2种方法诊断效能。以HBV-DNA诊断为金标准，分析磁微粒化学发光法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎的灵敏度、特异度，灵敏度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%，特异度=真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100%，准确度=（真阳性例数+真阴性例数）/（真阴性例数+真阳性例数+假阴性例数+假阳性例数）×100%。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0統计学软件分析数据，计数资料以百分比表示，用χ2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2   结果

2.1 2种方法检测HBV感染阳性检出率 磁微粒化学发光法检测在观察组中HBV感染阳性检出率高于酶联免疫吸附法，差异有统计学意义（χ2=4.348，P=0.037）；2种检测方法在对照组中阳性率相比，差异无统计学意义（χ2=0.592，P=0.442），见表1。

2.2 2种方法检测血清标志物阳性检出率 磁微粒化学发光法检测HBsAb阳性率、HBcAb阳性率等均高于酶联免疫吸附法，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

2.3 2种方法检测诊断效能 磁微粒化学发光法检测灵敏度、准确度较酶联免疫吸附法高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3、表4。

3   讨论

HBV属于嗜肝性病毒，进入人体后可迅速于肝脏部位大量复制，并与机体免疫反应相互作用，促使肝脏发生慢性炎症反应，造成大量肝细胞损害，引起肝功能障碍[7-8]。HBV持续复制还可引起肝脏组织纤维结缔增生，导致大量细胞外基质沉积，最终形成肝纤维化，甚至增加肝癌风险，威胁患者生命。同时，HBV感染后存在较强传染性，若未能及时治疗，还可增加传播风险，加重社会负担。目前，临床对于乙型肝炎多以早确诊、早治疗为原则，以降低患者体内HBV病毒载量，减轻肝脏损伤，并降低传播风险。

HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg、HBeAb及Pre-S1为乙型肝炎常见血清标志物，其表达与HBV感染及病情活跃程度存在明显相关性，故通过检测上述指标变化，有助于HBV感染的确诊，并评估病情严重程度。酶联免疫吸附法为当前血清标志物的常见检测方法，具有操作简单、检测迅速、价格低廉等特点，通过连接酶与待检测物引起特异性反应，从而检出阳性标本，便于疾病早期治疗[9-10]。但酶联免疫吸附法试剂受保存方法、制作工艺等方面的影响，稳定性相对较差，加之病原体侵袭机体到出现免疫反应存在一定窗口期，使得酶联免疫吸附法存在一定漏诊、误诊风险，仍需寻找更为精确的检测方式，提高HBV感染检出率。本研究结果显示，磁微粒化学发光法检测在观察组中HBV感染阳性检出率高于酶联免疫吸附法，磁微粒化学发光法检测HBsAb阳性率、HBcAb阳性率高于酶联免疫吸附法，磁微粒化学发光法检测诊断HBV感染灵敏度、准确度高于酶联免疫吸附法。提示磁微粒化学发光法在检测乙型肝炎血清标志物中具有较高应用价值，能提高HBV感染诊断灵敏度、准确度，值得广泛应用。磁微粒化学发光法是新一代诊断技术基础平台，在检测过程中能将待测抗原、碱性磷酸酶标记抗体等形成复合物，并借助荧光素抗体的磁性微粒分离复合物、未结合物质，清洗沉淀复合物后再加入酶促化学发光底物，在酶的作用下促使底物裂解成激发态中间体，之后回到基态过程内产生发光反应，即可通过仪器检测发光强度，进而获得检测结果[11-12]。相较于酶联免疫吸附法，该技术下免疫磁珠表面质量比高，可与更多抗体相结合参与免疫反应，且免疫磁珠表面通过共价键结合抗体，吸附性更坚固。免疫磁珠粒径小，在温育中能于反应液内均匀分散，近似于均相反应，故具有反应迅速、高均一性等特点，检测结果更为准确。磁微粒化学发光法试剂均为原装配套试剂，仪器检测过程中可自动进样，不仅能降低工作强度，还可减少人为因素所致的误差，进一步提高诊断准确率。

综上所述，磁微粒化学发光法检测血清标志物在乙型肝炎诊断中应用价值高，能提高诊断灵敏度、准确度，利于尽早明确诊断，及时予以针对性治疗，为乙型肝炎防治工作开展提供依据。

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